多肽合成儀以固相合成為反應(yīng)原理，在密閉的防爆玻璃反應(yīng)器中使氨基酸按照已知順序不斷添加、反應(yīng)、合成，操作Z終得到多肽載體。固相合成法，大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。

多肽合成儀的原理

　　首先將所要合成肽鏈的羥末端氨基酸的羥基，以共價鍵的結(jié)構(gòu)和一個不溶性的高分子樹脂相連，然后以此結(jié)合固相載體上的氨基酸作為氨基組份，經(jīng)過脫去氨基保護基并同過量的活化羧基組分反應(yīng)，接長肽鏈。

　　重復(fù)(縮合→洗滌→去保護→中和及洗滌→下一輪縮合)操作，達(dá)到所要合成的肽鏈長度，Z后將肽鏈從樹脂上裂解下來，經(jīng)過純化等處理，即得所要的多肽。

　　多肽合成中α-氨基用BOC(叔丁氧羰基)保護的稱為BOC固相合成法，α-氨基用FMOC(9-芴甲氧羰基)保護的稱為FMOC固相合成法。

多肽合成步驟

　　1、樹脂的選擇及氨基酸的固定

　　用于多肽合成的高分子的載體主要有3類:交聯(lián)聚苯乙烯;聚酰胺;聚乙烯乙二醇脂類樹脂。氨基酸的固定主要是通過保護的氨基酸的羧基同樹脂的反應(yīng)基團之間形成共價鍵來實現(xiàn)。

　　2、氨基、羧基、側(cè)鏈的保護及脫除

　　要成功合成具有特定的氨基酸順序的多肽，需要對暫不參與形成酰胺鍵的氨基和羧基加以保護，同時對氨基酸側(cè)鏈上的活性基團也要保護，反應(yīng)完成后再將保護基團除去。

　　近年來，F(xiàn)MOC合成法得到了廣泛的應(yīng)用。羧基通常用形成酯基的方法進(jìn)行保護，甲酯和乙酯是逐步合成中保護羧基的常用方法。

　　3、成肽反應(yīng)

　　固相中的成肽反應(yīng)一般是將兩個相應(yīng)的氨基被保護的氨基酸，及羧基被保護的氨基酸放在溶液內(nèi)并不形成肽鍵，要形成酰胺鍵，經(jīng)常用的手段是將羧基活化，變成混合酸酐、活潑酯、酰氯或用強的縮合劑(如碳二亞氨)形成對稱酸酐等方法來形成酰胺鍵。

　　4、裂解及合成肽鏈的純化

　　BOC法用TFA+HF裂解和脫側(cè)鏈保護基，F(xiàn)MOC法直接用TFA，有時根據(jù)條件不同，其它堿、光解、氟離子和氫解等脫保護方法也被采用。合成肽鏈進(jìn)一步的精制、分離與純化通常采用GX液相色譜、親和層析、毛細(xì)管電泳等。

多肽合成技術(shù)

　　多肽合成儀研究已經(jīng)走過了一百多年的光輝歷程。多肽合成是一個重復(fù)添加氨基酸的過程，固相合成順序一般從C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。過去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法。多肽固相合成技術(shù)的發(fā)明同時促進(jìn)了肽合成的自動化。

　　多肽合成包括標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)多肽合成、多肽修飾、多肽文庫以及重組多肽表達(dá)。逐步固相多肽合成能合成5-50aa的多肽，對于大于200aa的多肽，通過片段濃縮及連接技術(shù)來合成。

　　1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來，經(jīng)過不斷的改進(jìn)和完善，到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個常用技術(shù)，表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法無法比擬的優(yōu)點，從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。多肽合成總的來說分成兩種：固相合成和液相多肽合成。

　　多肽固相合成：

　　固相多肽合成方法由于其合成方便，迅速，成為多肽合成的shou選方法，而且?guī)砹硕嚯挠袡C合成上的一次革命，并成為了一支獨立的學(xué)科——固相有機合成，固相合成的發(fā)明同時促進(jìn)了肽合成的自動化。世界上diyi臺真正意義上的多肽合成儀出現(xiàn)在1980年代初期。

　　多肽液相合成：

　　基于將單個N-α保護氨基酸反復(fù)加到生長的氨基成份上，合成一步步地進(jìn)行，通常從合成鏈的C端氨基酸開始，接著的單個氨基酸的連接通過用DCC，混合炭酐，或N-carboxy酐方法實現(xiàn)。Carbodiimide方法包括用DCC做連接劑連接N-和C-保護氨基酸。重要的是，這種連接試劑促接N保護氨基酸自己炭基和C保護氨基酸自由氨基間的縮水，形成肽鏈，同時產(chǎn)出副產(chǎn)物。

　　然而，此方法因其導(dǎo)致消旋的副反應(yīng)，或在強堿存在時受到影響。慶幸地是，這些副反應(yīng)能Z小化，但是還不能完全消除，方法是加入連接催化劑。此外，此方法也可用于合成N保護氨基酸的活性酯衍生物。依次產(chǎn)生的活性酯將自發(fā)與任何別的C保護氨基酸或肽反應(yīng)形成新的肽。