對于形成混合酸酐，既可以使用無機(jī)酸，也可以使用有機(jī)羧酸。但是，實(shí)際上，得到廣泛應(yīng)用的只有少數(shù)幾個(gè)。在大多數(shù)情況下，采用氯甲酸烷基酯。從前氯甲酸乙酯得到頻繁使用，如今主要換成了氯甲酸異丁酯。

酸酐是通過氯甲酸酯以及羧基組分反應(yīng)形成。兩個(gè)互相競爭的羰基的親電性和（或）空間位阻為其氨解反應(yīng)的區(qū)域選擇性依賴的條件。在由氯甲酸烷基酯（活化組分，例如源于氯甲酸烷基酯）以及N保護(hù)的氨基酸羧酸鹽（羧基組分）形成混合酸酐時(shí)，，主要由親核試劑胺對氨基酸組分的羧基進(jìn)行進(jìn)攻，來使預(yù)期的肽衍生物形成，并且將游離酸形式的活性成分釋放出來。當(dāng)對氯甲酸烷基酯（R1＝異丁基、乙基等）進(jìn)行應(yīng)用時(shí)，不穩(wěn)定的游離的單烷基碳酸，會(huì)立即分解形成相應(yīng)的醇和二氧化碳。但是，對選擇親核進(jìn)攻的區(qū)域來說，也有一些相反的報(bào)道，原來的N保護(hù)氨基酸組分和氨基甲酸酯作為產(chǎn)物。

在二氯甲烷、四氫呋喃、二氧六環(huán)、乙腈、乙酸乙酯或DMF中分別溶解N保護(hù)的氨基酸或肽使用等當(dāng)量的三級(jí)堿（N－甲基哌啶、N－甲基嗎啉、N－乙基嗎啉等）處理從而使得混合酸酐形成。之后，為了使不對稱酸酐（活化）形成，在溫度－15℃-5℃環(huán)境下，劇烈攪拌，同時(shí)將氯甲酸烷基酯加入其中。在很短時(shí)間的活化之后，將親核性氨基酸組分加入。若作為銨鹽來使用（需要更多的堿），那么對于過量使用堿應(yīng)當(dāng)有所避免。若對于以上的反應(yīng)條件嚴(yán)格地遵守的話，就能夠很容易地進(jìn)行混合酸酐法，在縮合方法方法中，混合酸酐法也是Z有效的方法之一。

對于混合酸酐的穩(wěn)定性，副產(chǎn)物氨基甲酸酯和消旋等方面的減少，Benoiton和他的同事進(jìn)行了深入研究，通過這一研究，對于反應(yīng)機(jī)理有了進(jìn)一步的了解，并且使該方法的縮合效率得到提高。一直到現(xiàn)在該方法的應(yīng)用非常的廣泛。通過對產(chǎn)生過量氨基甲酸酯的原因進(jìn)行研究，特別是在異亮氨酰基和纈氨?；那闆r下，如果三及堿使用N－甲基哌啶以及溶劑使用二氯甲烷，那么就可以使主要副反應(yīng)得以避免?；旌纤狒獾姆€(wěn)定性比較高，所以混合酸酐的純化能夠利用用水洗滌有機(jī)相進(jìn)行。

在混合酸酐縮合法的實(shí)際應(yīng)用中，需要注意以下幾個(gè)方面：

盡管對于混合酸酐的形成和隨后的縮合反應(yīng)，含水的DMF可以算作一個(gè)好的溶劑，然而相比于使用四氫呋喃或鹵化試劑為溶劑，它對于消旋的促進(jìn)作用要高得多。