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細(xì)胞融合PEG法和電融合法對(duì)比

更新時(shí)間:2025-10-20 02:14:16 類型: 閱讀量:6280
導(dǎo)讀:在自發(fā)或人工誘導(dǎo)下,兩個(gè)細(xì)胞或原生質(zhì)體融合,使得一個(gè)雜種細(xì)胞形成,即是細(xì)胞融合(cell fusion)。

在自發(fā)或人工誘導(dǎo)下,兩個(gè)細(xì)胞或原生質(zhì)體融合,使得一個(gè)雜種細(xì)胞形成,即是細(xì)胞融合(cell fusion)。


細(xì)胞融合中的化學(xué)法誘導(dǎo)

1、PEG誘導(dǎo)


2、PEG結(jié)合高Ca2+和PH誘導(dǎo)法


3、NaNO3誘導(dǎo)

NaNO3可以對(duì)原生質(zhì)體表面負(fù)電荷進(jìn)行中和,對(duì)原生質(zhì)體聚集起到促進(jìn)作用,不會(huì)損害原生質(zhì)體,然而卻沒(méi)有較高的融合效率。


4、高Ca2+和pH誘導(dǎo)法


基本原理

聚乙二醇(PEG)是一種多聚化合物,實(shí)驗(yàn)室用的PEG,200-2000之間為平均相對(duì)分子質(zhì)量范圍,固體狀態(tài)通常超過(guò)1000,液體狀態(tài)通常小于1000.


7.jpg


機(jī)制

因?yàn)橛写罅控?fù)電荷為PEG分子所帶有,靜電鍵是由于其和原生質(zhì)體表面的負(fù)電荷在鈣離子的連接下形成的。從而分子橋在原生質(zhì)體之間形成,導(dǎo)致原生質(zhì)體發(fā)生粘連從而對(duì)原生質(zhì)體的融合起到了促進(jìn)作用。除此之外,PEG使得類脂膜的流動(dòng)性得以增加,從而增大了原生質(zhì)體的核、細(xì)胞器發(fā)生融合的可能性。

質(zhì)膜結(jié)合的PEG分子使用高Ca2+和PH溶液進(jìn)行洗脫,造成電荷平衡因此失調(diào)而重新分配的結(jié)果,連接兩種原生質(zhì)體上的正負(fù)電荷,從而使得具有共同質(zhì)膜的融合體形成。


物理法

基本原理

盡管很晚才開(kāi)發(fā),然而目前為止,有著比較廣泛的應(yīng)用。融合儀和融合板為電融合必備的儀器。細(xì)胞膜表面的氧化還原電位經(jīng)過(guò)直流電脈沖的誘導(dǎo)發(fā)生了改變,粘合了異種細(xì)胞且瞬間破裂質(zhì)膜,然后開(kāi)始連接質(zhì)膜,一直到完整的膜閉和成功,使得融合體形成。


相比于PEG法,電融合法有如下優(yōu)點(diǎn):

1、有很高的融合率,很強(qiáng)的重復(fù)性以及對(duì)原生質(zhì)體傷害小。


2、操作簡(jiǎn)單,裝置精巧,能夠在顯微鏡下觀察或錄像融合過(guò)程。


3、使PEG誘導(dǎo)后的洗滌過(guò)程免去了,更加可以對(duì)誘導(dǎo)過(guò)程進(jìn)行控制。


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