液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進(jìn)行先分離，而后分析鑒定的儀器。液相色譜儀在生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等領(lǐng)域均有廣泛應(yīng)用。

液相色譜儀柱壓問題

　　液相色譜儀柱壓問題是使用液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關(guān)。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值而是指壓力波動范圍在50PSI(3.3Bar)之間(在使用梯度洗脫時，柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的)。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。

　　1、壓力過高

　　這是液相色譜儀在使用中Z常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時，我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查。

　　①首先斷開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。

　　處理方法：用30%的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，在檢查;

　?、诖蜷_Purge閥，使流動相不經(jīng)過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。

　　處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI(6.7Bar)以下，過濾白頭正常，在檢查;

　?、郯焉V柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。

　　處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動相更強(qiáng)的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過來接在液相色譜儀上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。

　　2、壓力過低

　　液相色譜儀壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏，處理方法：尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。當(dāng)然還有一個原因就是泵里進(jìn)了空氣，但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴(yán)重一點會導(dǎo)致泵無法吸上液體。

　　處理方法：打開Purge閥，用3~5ml/min的流速沖洗，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

液相色譜儀漂移問題

　　主要包括基線漂移和保留時間漂移。

　　1、基線漂移

　　一般說來，液相色譜儀剛起動時，基線容易漂移，大概要半個小時的平衡時間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長，但如果你在實驗過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則你要考慮下面的原因：

　?、僦鶞夭▌樱嚎刂坪弥雍土鲃酉嗟臏囟龋瑱z查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。

　?、诹魍ǔ乇晃廴净蛴袣怏w：用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池(Z好斷開柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。

　?、圩贤鉄裟芰坎蛔悖焊鼡Q新的紫外燈。

　?、芰鲃酉辔廴?、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成：檢查流動相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑。

　?、輼悠分杏袕?qiáng)保留的物質(zhì)(高K'值)以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線：使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間。液相色譜儀分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。

　　⑥檢測器沒有設(shè)定在Zda吸收波長處：將波長調(diào)整至Zda吸收波長處。

　　⑦流動相的PH值沒有調(diào)節(jié)好：加適量的酸或堿調(diào)至Z佳PH值。

　　2、保留時間漂移

　　保留時間重現(xiàn)是液相色譜儀性能好壞的一個重要標(biāo)志，同一種東西，兩次的保留時間相差不要超過15s，超過了半分鐘可看做保留時間漂移，就無法進(jìn)行定性，要考慮以下原因：

　?、贉乜夭划?dāng)：調(diào)好柱溫，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。

　?、诹鲃酉啾壤兓簷z查四元泵的比例閥是否有故障。

　?、凵V柱沒有平衡：在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時間平衡色譜柱。

　?、芰魉僮兓褐匦略O(shè)定流速。

　?、荼弥杏袣馀荩簭谋弥谐馀?。

液相色譜儀峰型異常問題

　　峰型問題是液相色譜儀的主要問題，在做液相過程中，就是要變換不同的條件來改善不好的峰型，對于各種各樣的異常峰，要區(qū)別對待，從主要問題出發(fā)，一個一個加以解決。

　　1、色譜圖中未出峰：系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解;液相色譜儀泵未輸液或流動相使用不正確;檢測器設(shè)置不正確;針對以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可。

　　2、一個峰或幾個峰是負(fù)峰：流動相吸收本底高;進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣;樣品組分的吸收低于流動相。

　　3、所有峰均為負(fù)峰：信號電纜接反或檢測器輸出極性設(shè)置顛倒;光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。

　　4、所有峰均為寬峰：系統(tǒng)未達(dá)到平衡;溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多;色譜柱尺寸及類型選擇不正確;色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低;溫度變化造成的影響。

　　5、所出峰比預(yù)想的小：樣品黏度過大;進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差;檢測器設(shè)置不正確.定量環(huán)體積不正確;檢測池污染;檢測器燈出現(xiàn)問題。

　　6、出現(xiàn)雙峰或肩峰：液相色譜儀進(jìn)樣量過大;樣品濃度過高;保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞;保護(hù)拄或色譜柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。

　　7、前伸峰：進(jìn)樣量或樣品濃度高;溶解樣品的溶劑較流動相極性強(qiáng);保護(hù)柱或色譜柱污染或失效。

　　8、拖尾峰：柱超載，降低樣品量;增加柱直徑采用較高容量的固定相;峰干擾，對樣品進(jìn)行清潔過濾;調(diào)整流動相;硅羥基作用，加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相pH值;柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效，更換燒結(jié)不銹鋼;加在線過濾器，對樣品進(jìn)行過濾;死體積或柱外體積過大，將連接點降至Zdi;盡可能使用內(nèi)徑較細(xì)的連接管;柱效下降，更換柱子;采用保護(hù)柱，對柱子進(jìn)行再生。

　　9、出現(xiàn)平頭峰：液相色譜儀檢測器設(shè)置不正確;進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高。

　　10、出現(xiàn)鬼峰：進(jìn)樣閥殘余峰，在每次進(jìn)完樣后用充足的時間來平衡和清洗系統(tǒng);樣品中存在未知物，改進(jìn)樣品的預(yù)處理;流動相污染，更換新流動相，盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用，隔夜的流動相再次使用時要過濾;盡可能使用HPLC級試劑;流路中有小的氣泡，打開Purge閥，加大流速排除。