生物反應(yīng)器是指以活細(xì)胞或酶為生物催化劑進(jìn)行細(xì)胞增殖或生化反應(yīng)時(shí),為微生物提供適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)條件使微生物能進(jìn)行生長(zhǎng)和新陳代謝的設(shè)備,是生物反應(yīng)過程關(guān)鍵設(shè)備。
動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí),生物反應(yīng)器是整個(gè)培養(yǎng)過程的關(guān)鍵設(shè)備,為細(xì)胞提供了一個(gè)適宜的生長(zhǎng)環(huán)境,使之快速增殖并形成所需的生物組織制品。
1、攪拌式生物反應(yīng)器
攪拌式反應(yīng)器靠攪拌槳提供液相攪拌的動(dòng)力,它有較大的操作范圍、良好的混合性和濃度均勻性,因此在生物反應(yīng)中被廣泛使用。
由于動(dòng)物細(xì)胞沒有細(xì)胞壁的保護(hù),因此對(duì)剪切作用十分敏感,直接的機(jī)械攪拌很容易對(duì)其造成損害,傳統(tǒng)的用于微生物的攪拌反應(yīng)器用作動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)顯然是不合適的。所以,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中的攪拌式反應(yīng)器都是經(jīng)過改進(jìn)的,包括改進(jìn)供氧方式、攪拌槳的形式及在反應(yīng)器內(nèi)加裝輔件等。

2、非攪拌式生物反應(yīng)器
攪拌式生物反應(yīng)器用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)存在的Zda缺點(diǎn)是剪切力大,容易損傷細(xì)胞,雖然經(jīng)過各種改進(jìn),這個(gè)問題仍很難避免。相比之下,非攪拌式反應(yīng)器產(chǎn)生的剪切力較小,在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中表現(xiàn)出了較強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)。
①填充床反應(yīng)器是在反應(yīng)器中填充一定材質(zhì)的填充物,供細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)。營(yíng)養(yǎng)液通過循環(huán)灌流的方式提供,并可在循環(huán)過程中不斷補(bǔ)充。細(xì)胞生長(zhǎng)所需的氧分也可以在反應(yīng)器外通過循環(huán)的營(yíng)養(yǎng)液攜帶,因而不會(huì)有氣泡傷及細(xì)胞。這類反應(yīng)器剪切力小,適合細(xì)胞高密度生長(zhǎng)。
?、谥锌绽w維反應(yīng)器中空纖維反應(yīng)器由于剪切力小而廣泛用于動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)。
?、蹥馍缴锓磻?yīng)器也是實(shí)現(xiàn)動(dòng)物細(xì)胞高密度培養(yǎng)的常用設(shè)備之一,其特點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,操作方便。有人在氣升式反應(yīng)器中利用微載體培養(yǎng)技術(shù),研究了Vero細(xì)胞高密度培養(yǎng)的工藝條件。
由于植物細(xì)胞與微生物細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)不同,植物細(xì)胞較微生物細(xì)胞大,對(duì)剪切力耐受性差,而且對(duì)氧的要求相對(duì)微生物要低得多,因此微生物反應(yīng)器并不完全適合于植物細(xì)胞生長(zhǎng)與生產(chǎn)。用于植物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器主要有攪拌式、非攪拌式及其改進(jìn)型反應(yīng)器,另外還有植物細(xì)胞固定化反應(yīng)器和膜反應(yīng)器等。
1、機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器
機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器有較大的操作范圍,混合程度高,適應(yīng)性廣,在大規(guī)模生產(chǎn)中廣泛使用。攪拌罐中產(chǎn)生的剪切力大,容易損傷細(xì)胞,直接影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝,特別對(duì)于次級(jí)產(chǎn)物生成影響極大。攪拌轉(zhuǎn)速越高,產(chǎn)生剪切力越大,對(duì)植物細(xì)胞傷害越大。
對(duì)于有些對(duì)剪切力敏感的細(xì)胞,傳統(tǒng)的機(jī)械攪拌罐不適用。為此,對(duì)攪拌罐進(jìn)行了改進(jìn),包括改變攪拌形式、葉輪結(jié)構(gòu)與類型、空氣分布器等,力求減少產(chǎn)生的剪切力,同時(shí)滿足供氧與混合的要求。
2、非攪拌式生物反應(yīng)器
相對(duì)于傳統(tǒng)攪拌式生物反應(yīng)器,非攪拌式生物反應(yīng)器所產(chǎn)生的剪切力較小,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,因此被認(rèn)為適合植物細(xì)胞培養(yǎng),其主要類型有鼓泡式反應(yīng)器、氣升式反應(yīng)器和轉(zhuǎn)鼓式反應(yīng)器等。
鼓泡式反應(yīng)器優(yōu)于機(jī)械攪拌式反應(yīng)器。但由于鼓泡式反應(yīng)器對(duì)氧的利用率較低,如果用較大通氣量,則產(chǎn)生的剪切力會(huì)損傷細(xì)胞。研究表明,噴大氣泡時(shí),湍流剪切力是YZ細(xì)胞生長(zhǎng)和損害細(xì)胞的重要原因。較大氣泡或較高氣速導(dǎo)致較高剪切力,從而對(duì)植物細(xì)胞有害。
氣升式反應(yīng)器廣泛應(yīng)用于植物細(xì)胞培養(yǎng)的研究和生產(chǎn)。氣升式反應(yīng)器用于多種植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)或固定化細(xì)胞培養(yǎng),但其操作彈性較小,低氣速時(shí),尤其H/D大,高密度培養(yǎng)時(shí),混合性能欠佳。過量供氣,過高的氧濃度反而會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和次生代謝產(chǎn)物的合成。將氣升式發(fā)酵罐與慢速攪拌結(jié)合使用可彌補(bǔ)低氣速時(shí)混合性差的弱點(diǎn),采用分段的氣升管,也有利于氧的利用與混合。
轉(zhuǎn)鼓式反應(yīng)器用于煙草細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的研究發(fā)現(xiàn),與有一個(gè)通風(fēng)管的氣升式反應(yīng)器相比,相同條件下轉(zhuǎn)鼓式反應(yīng)器中生長(zhǎng)速率高,其氧的傳遞及剪切力對(duì)細(xì)胞的傷害水平方面均優(yōu)于氣升式反應(yīng)器。

3、光生物反應(yīng)器
許多植物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需要光照,往往考慮在生物反應(yīng)器基礎(chǔ)上增加光照系統(tǒng),但在實(shí)際中存在很多問題,如光源的安裝、保護(hù),光的傳遞,還有光照系統(tǒng)對(duì)反應(yīng)器供氣、混合的影響等。小規(guī)模實(shí)驗(yàn)往往采用外部光照,反應(yīng)器表面有透明的照明區(qū),光源固定在反應(yīng)器外部周圍。但大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)透光窗的設(shè)置,內(nèi)部培養(yǎng)物對(duì)光的均勻接受等問題難以解決,因此許多人對(duì)采用內(nèi)部光源的生物反應(yīng)器進(jìn)行了研究。
根據(jù)微藻自身的營(yíng)養(yǎng)特點(diǎn),可通過光能自養(yǎng)和化能異養(yǎng)兩種方式來培養(yǎng)微藻。微藻培養(yǎng)用生物反應(yīng)器一般可分為:封閉式光生物反應(yīng)器和敞開式光生物反應(yīng)器。
封閉式光生物反應(yīng)器比敞開式培養(yǎng)系統(tǒng)有以下優(yōu)點(diǎn):①培養(yǎng)密度高,收獲效率也顯著提高;②培養(yǎng)條件易于控制,易于實(shí)現(xiàn)高密度培養(yǎng),對(duì)代謝產(chǎn)物積累有利;③無污染,可實(shí)現(xiàn)純種培養(yǎng);④不受地域環(huán)境限制,生產(chǎn)期長(zhǎng),可終年生產(chǎn);⑤適合于所有微藻的光自養(yǎng)培養(yǎng),尤其適合于微藻代謝產(chǎn)物產(chǎn)品的生產(chǎn)。
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