Western免疫印跡（WesternBlot）是往膜上轉移蛋白質，然后利用抗體進行檢測?？赏ㄟ^融合部分的抗體對新基因的表達產物進行檢測?？捎孟鄳贵w作為一抗對已知表達蛋白進行檢測。

主要試劑

1、5%(w/v)脫脂奶粉。

2、在磷酸緩沖鹽溶液(PBS)中溶解NaN30.02%疊氮鈉(有毒，戴手套操作)。

3、Tris緩沖鹽溶液(TBS):

NaCl 500mmol/L，Tris/HCL(pH7.5)20mmol/L。

4、Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。

5、過氧化物酶標記的第二抗體。

6、NBT(溶于70%二甲基甲酰胺，75mg/ml)。

7、BCIP(溶于1**%二甲基甲酰胺，50mg/ml)。

8、Tris-HCL(pH9.5)100mmol/L。

9、NaCl100mmol/L。

10、EDTA5mmol/L，Tris-HCL(pH7.5)50mmol/L。

11、丙烯酰胺和N，N’-亞甲雙丙烯酰胺：

含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亞甲雙丙烯酰胺儲存液的配制應當使用溫熱（對溶解雙丙稀酰胺有利）的去離子水。取1gN，N-亞甲叉雙丙稀酰胺，29g丙稀酰胺，將水加入到100毫升。將其在棕色瓶中，4℃避光保存。由于堿催化或者光催化會發(fā)生脫氨基反應，因此必須確保PH不高于7.0。如果出現沉淀，可以過濾，若使用期超過兩個月，就必須重新配制。

12.十二烷基硫酸鈉SDS溶液:

10%(w/v)0.1gSDS使用1mlH2O去離子水配制，在室溫下保存。

13、分離膠緩沖液:

48ml 1mol/LHCL和1.5mmol/L Tris-HCL(pH8.8): 18.15g Tris混合，加水稀釋，使終體積到100ml，過濾后在40攝氏度下保存。

14、濃縮膠緩沖液:

在40ml H2O中溶解0.5mmol/L Tris-HCL(pH6.8):6.05g Tris，使用大約48ml 1mol/LHCL將pH調至6.8，加水稀釋，使終體積到100ml，過濾后在40攝氏度下保存。必須使用Tris堿來制備

這兩種緩沖液，然后使用HCL來對PH值進行調節(jié)。

15、TEMED原溶液：

過硫酸銨在N，N，N’N’四甲基乙二胺的催化作用下使自由基形成，從而使得兩種丙稀酰胺加速聚合。若PH太低，則會YZ聚合反應。丙稀酰胺聚合所必須的兩種自由基由10%(w/v)過硫酸胺溶液來提供。臨用前配制數毫升去離子水。

16、SDS-PAGE加樣緩沖液:

1.6ml 0.05%溴酚藍，3.2ml巰基乙醇，12.8ml 10%SDS，6.4ml甘油，8ml pH6.8 0.5mol/LTris緩沖液，加32ml水混勻備用。與蛋白質根據1:1或1:2比例混合，在沸水終煮3min混勻后再上樣，通常是20-25ul，總蛋白量100μg。

17、Tris-甘氨酸電泳緩沖液:

10gSDS，188g甘氨酸，30.3gTris用蒸餾水溶解至1000ml，使0.25mol/L Tris-1.92mol/L 甘氨酸電極緩沖液得到。在臨用前稀釋10倍。

18、轉移緩沖液：

對1L轉移緩沖液進行配制，需要對0.37gSDS，5.8gTris堿以及2.9g甘氨酸進行稱取，并且將200ml甲醇加入，加水至總量1L。

19、麗春紅染液儲存液：

30g磺基水楊酸，30g三lv乙酸以及2g麗春紅S加水至100ml，使用時將上述儲存液稀釋10倍，就使成麗春紅S使用液制成，在使用后將其廢棄。