Real-Time PCR 技術(shù)，又稱實時定量熒光PCR，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，Z后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行總量分析或通過Ct值對模板進(jìn)行相對定量。下面就讓小編帶你了解一下Real-Time PCR引物設(shè)計原則及其應(yīng)用。

Real-Time PCR引物設(shè)計原則

1.避免堿基重復(fù)，特別是G。

2.引物的退火溫度一般在58-60攝氏度之間。

3.G+C含量為30％-80％。

4.不能有超過兩個的G或C位于3′端Z后的5個堿基內(nèi)。

5.引物的產(chǎn)物的大小通常在80-250bp之間，Z合適的產(chǎn)物大小為80-150bp。

6.尤其要對于引物二聚體以及非特異性擴(kuò)增的存在注意避免。

7.Real-Time PCR引物的擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)該跨外顯子，引物能夠跨外顯子Z好，從而對基因組DNA污染影響加以避免。

Real-Time PCR在優(yōu)生優(yōu)育中的應(yīng)用

隨著經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展以及人民生活水平的提高，人民越來越重視自己，家人尤其是下一代的身體健康，除此以外，因為國內(nèi)計劃生育，有很多的獨(dú)生子女，所以長輩們更加的關(guān)注孩子的身體素質(zhì)。如何使得新生兒質(zhì)量提高呢？優(yōu)生優(yōu)育變得極其重要。

①防止有嚴(yán)重遺傳性疾病和先天性疾病的個體出生。

②增進(jìn)體力、智力個體的繁衍。

優(yōu)生優(yōu)育Z基本的內(nèi)容是避免有嚴(yán)重遺傳性疾病及先天性疾病個體出生。在母親妊娠期間需要對母親及胎兒進(jìn)行遺傳學(xué)檢查，使得常見的遺傳性疾病個體的出生盡可能排除。除此之外，在母親妊娠期間對母親是否患有某些易引起胎兒畸形的傳染性疾病如弓型蟲、風(fēng)疹病毒、衣原體等感染進(jìn)行檢查。染色體分析法是從前進(jìn)行遺傳性疾病的檢測的主要方法，但是臨床上基因病才是絕大部分遺傳性疾病，染色體發(fā)析法不能夠檢測出來。單個基因的突變使用PCR基因擴(kuò)增法聯(lián)合單鏈構(gòu)型多態(tài)性分析（sscp）、限制性片段長度多態(tài)性分析（RFCP）等位基因特異性寡核某酸（Aso）點(diǎn)雜交或差異PCR很方便地檢測出來，而且有超過95%的準(zhǔn)確率。從前對容易導(dǎo)致胎兒畸形的感染性疾病原體的診斷非常困難。如今PCR基因擴(kuò)增法具有很高的高敏感性和高特異性，對這些疾病診斷及LX跟蹤非常適用，這種方法也非常值得推薦。