在體外人對(duì)雙鏈DNA分子合成的技術(shù)，即是基因合成，不同于寡核苷酸合成：寡核苷酸是單鏈的，大約100nt為其所可以合成的Z長(zhǎng)片段?；蚝铣蓞s是雙鏈DNA分子合成，50bp-12 kb是可以合成的長(zhǎng)度范圍?；蚝铣珊推渌斯し椒ê铣苫虻募夹g(shù)相比，不需要模板，所以基因來(lái)源不會(huì)對(duì)其起限制作用，其為獲取基因的方法之一，是使用人工方法合成基因的技術(shù)。

 DNA合成流程

接收合成訂單

對(duì)訂單按照實(shí)際的情況進(jìn)行合理的安排，根據(jù)加急-測(cè)序-內(nèi)部-外部的順序依次安排。如果是同一客戶，那么將合成盡量安排在同一批次，如大合成量，高G含，鏈長(zhǎng)的部分引物合成比較困難，可能需要推遲一些時(shí)間

合成

合成儀的型號(hào)不同，合成通量和合成時(shí)間都會(huì)存在差異。

氨解脫保護(hù)

結(jié)束合成以后，將載體取出，進(jìn)行切割并且脫保護(hù)，長(zhǎng)度通常不超過(guò)40bp，且需要2小時(shí)以上，鏈越長(zhǎng)需要越長(zhǎng)的時(shí)間。

純化

HPLC純化、脫鹽純化、PAGE純化以及OPC純化為目前為止常用且主要的四種純化方式。

1、脫鹽純化

若有較高的耦合效率，較好的合成效果，短片段不存在粗品中，那么能夠直接脫鹽。

2、HPLC純化

HPLC吸附基質(zhì)包括離子柱和反相柱：

離子柱是按照不同長(zhǎng)度的寡核苷酸帶有的凈電荷不同，洗脫n-片段通過(guò)對(duì)流動(dòng)相的離子強(qiáng)度的緩慢增加來(lái)進(jìn)行。

RP(反相柱)是按照疏水性的不同來(lái)分離的，在柱內(nèi)保留的時(shí)間，疏水性更強(qiáng)的長(zhǎng)片段比短片段更長(zhǎng)。

3、OPC純化

用低濃度的有機(jī)溶劑通過(guò)OPC柱芯對(duì)DMT寡核苷酸特殊的親和力洗脫不帶DMT的短片段，用1ml的20%乙腈洗脫用酸除去DMT后的吸附在柱芯里的DNA。

4、PAG純化

分離的原理是利用在膠中DNA不同片段的遷移率不同，,大片段有著較大的分子，較多的電荷，也就只有較慢的遷移的速度。待等目的片段與N-片段分開(kāi)后，將目的片段切下，在80攝氏度下孵育2h后脫鹽。