通常，對某一特定蛋白質的分離純化的步驟包括前處理、粗分級、細分級三步，下面就讓小編帶你了解一下。

前處理：

對于某種蛋白質的分離純化，首先需要通過溶解的狀態(tài)從原來的組織或細胞中釋放出蛋白質并且使原來的天然狀態(tài)保持不變，從而使生物活性不丟失生。之后，按照不同的情況，選擇適當的方法，破碎掉組織和細胞?？梢允褂秒妱訐v碎機或勻漿機破碎或超聲波對動物組織和細胞進行處理破碎。

如果所要的蛋白主要在如細胞核、染色體、核糖體或可溶性細胞質等某一細胞組分集中，那么可以通過差速離心的方法分開它們，對該細胞組分進行收集以作下步純化的材料。如果所要蛋白是與細胞膜或膜質細胞器結合的，那么必須使用超聲波或去污劑解聚膜結構，然后使用適當介質來提取。

粗分離

當獲得蛋白質提取液（有時還雜有核酸、多糖之類）以后，選擇合適的方法來分離所要的蛋白與其他雜蛋白。通常使用鹽析、等電點沉淀和有機溶劑分級分離等方法來進行這一步的分離。這些方法不但操作簡單，而且能夠處理很多，既可以將大量的雜質除去，又可以使蛋白溶液濃縮。一些蛋白提取液體積比較打，使用沉淀或鹽析法濃縮又不適用，那么進行濃縮的方法可以是超過濾、凝膠過濾、冷凍真空干燥或其他方法。

細分離

樣品在進行粗分級分離以后，通常只有很小的體積，以及去除了絕大多數的雜蛋白大部分。通常使用包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等層析法來進行進一步純化。作為Z后的純化步驟選擇包括區(qū)帶電泳、等電點聚焦等電泳法也很有必要。蛋白質分離純化的Z后步驟結晶，結晶過程不能夠使蛋白一定是均一得到確保，然而只有在溶液中某種蛋白在數量上占有優(yōu)勢時才能有結晶形成。

離子層析法

當被分離的蛋白質溶液流經離子交換層析柱時，會在離子交換劑上吸附帶有與離子交換劑相反電荷的蛋白質，之后通過對pH進行改變等方法洗脫吸附的蛋白質。

有機溶劑提取

與水互溶的有機溶劑(如甲醇、乙醇)可以顯著降低一些蛋白質在水中的溶解度，并且在一定的離子強度、溫度以及PH值下，導致蛋白質沉淀的有機溶劑的濃度不一樣，所以蛋白質的分離純化能夠通過對有機溶劑的濃度的控制來實現(xiàn)。在室溫下，有機溶劑不但能夠導致蛋白質的沉淀,而且會變性。所以，一般需要首先冷卻，有機溶劑，之后為了避免局部濃度過高，不斷攪拌并且將有機溶劑加入。能夠在很大程度上解決蛋白質的變性問題。