檢測(cè)各種蛋白質(zhì)是蛋白分析儀的主要用途,其對(duì)于很多疾病的ZL起到重要的作用。其不但對(duì)于實(shí)驗(yàn)室免疫檢測(cè)和臨床發(fā)展的需要有所符合,而且對(duì)于流程管理和質(zhì)量系統(tǒng)的優(yōu)化也合適。
蛋白質(zhì)的含量測(cè)定
經(jīng)常需要在蛋白質(zhì)的分離純化的過(guò)程中進(jìn)行蛋白質(zhì)的含量的測(cè)定。體液中蛋白質(zhì)的含量的測(cè)定也往往需要用于臨床上診斷疾病和觀察病程。所以在實(shí)際工作中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定具有的意義非常的重大。其是測(cè)定是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能研究的重要基礎(chǔ)工具。
凱氏定氮法
介紹
1883年,凱氏定氮法由 Kjeldahl化學(xué)家所建立,之后通過(guò)不斷地進(jìn)行改良,不斷地改進(jìn)精確性、敏感性和操作的簡(jiǎn)便程度。目前為止,建立各個(gè)具體方法時(shí)采用的參考標(biāo)淮方法依然是凱氏定氮法。

原理
加熱消化生物樣品與濃硫酸,其中,硫酸銨由含氮化合物分解并轉(zhuǎn)化,再與氫氧化鈉反應(yīng)釋放出氨。使用硼酸吸收釋放出的氨,使得硼酸銨生成,再使用標(biāo)準(zhǔn)硫酸滴定,將生物樣品中氮的含量求出來(lái)。
按照蛋白質(zhì)平均含氮量為16%,使用氮的含量乘以6.25,就能夠?qū)⒌鞍踪|(zhì)的含量計(jì)算出來(lái)。
優(yōu)點(diǎn)
對(duì)于所有樣品的測(cè)定都適用是凱氏定氮法的優(yōu)點(diǎn)。能夠在測(cè)定動(dòng)、植物的各種組織、器官以及食品、土壤等成分復(fù)雜的蛋白質(zhì)的含量時(shí)被使用。特別是樣品溶液渾濁,用其他方法不能測(cè)定,可靠的結(jié)果能夠通過(guò)采用凱氏法獲得。
缺點(diǎn)
1、和理論含氮量相比,含堿性氨基酸、酰胺和小分子量氨基酸(甘氨酸、丙氨酸等)偏多的蛋白質(zhì)含氮量明顯非常高,導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏高。
2、有著相當(dāng)繁瑣的操作過(guò)程,要求操作者具有很高的技術(shù)熟練度,實(shí)驗(yàn)室空氣中氨含量會(huì)對(duì)其產(chǎn)生影響。
3、測(cè)定值會(huì)由于樣品中的非蛋白氮而偏高,所以,在測(cè)定前需要先將與樣品共存的非蛋白氮去除。
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