基因合成是指在體外人工合成雙鏈DNA分子的技術(shù),與寡核苷酸合成有所不同:寡核苷酸是單鏈的,所能合成的Z長片段僅為100nt左右,而基因合成則為雙鏈DNA分子合成,所能合成的長度范圍50bp-12 kb。
概念
根據(jù)人們的愿望,嚴格的進行設(shè)計,利用體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù),將新的遺傳特性賦予生物,將與人們需要的更符合的新的生物類型和生物產(chǎn)品創(chuàng)造出來,即是基因工程,其又稱為NA重組技術(shù),其是在在DNA分子水平前提下設(shè)計和施工的。
原理
原理是基因重組,以下為基因重組的基本工具:
1、載體
常用載體
質(zhì)粒是一種雙鏈環(huán)狀DNA分子,其具有自我復(fù)制能力,于細菌染色體獨立存在,裸露,其具有簡單的結(jié)構(gòu),是Z為常用的載體。
其它載體
動植物病毒以及噬菌體的衍生物也能夠作為載體。
條件
具有供重組DNA的鑒定和選擇的基因;具有供外源DNA片段插入的一至多個限制酶切點;可以復(fù)制并穩(wěn)定保存在受體細胞中。

2、限制性核酸內(nèi)切酶
來源
其主要由原核生物中分離純化出來。
功能
其可以將雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列識別出來,并且斷開每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵,所以專一性為其所具備。
結(jié)果
經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端一般有黏性末端和平末端兩種形式。
3、DNA連接酶
種類
DNA連接酶有兩種,分別為T4DNA連接酶和E.coliDNA連接酶。
不同點
T4噬菌體為T4DNA連接酶的來源,大腸桿菌為E.coliDNA連接酶的來源,T4DNA連接酶可以將兩種末端均縫合起來,然而連接平末端具有比較低的效率。E.coliDNA連接酶僅僅可以連接雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵。
相同點
均能將磷酸二酯鍵連接。
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