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核酸提取過程核酸的沉淀

更新時間:2025-10-21 14:03:13 類型: 閱讀量:3100
導讀:核酸提取儀是應用配套的核酸提取試劑來使得樣本核酸提取工作自動完成的儀器。其在、輸血安全、法醫(yī)學鑒定、疾病控制中心、臨床疾病診斷、生物學研究等多種領域得到廣泛地應用。

核酸提取儀是應用配套的核酸提取試劑來使得樣本核酸提取工作自動完成的儀器。其在、輸血安全、法醫(yī)學鑒定、疾病控制ZX、臨床疾病診斷、生物學研究等多種領域得到廣泛地應用。


沉淀的目的:

以從裂解體系中將核酸沉淀下來,從而使分離核酸與其它雜質(主要是鹽)得以實現(xiàn)。對核酸來說,醇用量需要有一定比例以及有一定的鹽作為標準的醇沉淀要求。然而不是說醇的比例不可更或者鹽必不可少。通過實際的操作,我們發(fā)現(xiàn),當裂解體系中核酸的濃度達到一定水平后,就算教科書中建議的鹽不包含在體系中,對醇單獨使用也能夠將核酸沉淀下來,當然,可能會降低一定比例的得率。不要對標準方法的唯yi性的迷信為了解這一點的意義。反之,如果標準方法遇到純度問題時,改善的方法為根據(jù)沉淀條件的調整是完全可以實現(xiàn)的。純粹的異丙醇由一半異丙醇加一半高鹽溶液來替代,能夠使殘留的多糖大大的降低。除此以外,還有一個問題,核酸的醇沉淀過程同樣也是其它雜質的沉淀過程必須要堅信。盡管會使得核酸的得率有所降低,然而由于能夠使純度大大提高。


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沉淀溫度的選擇:

如果有比較多的雜質在核酸抽提的起始樣品,原則上沉淀不在低溫下進行,低溫沉淀可以使沉淀效率提高,當核酸有很低的的時候,會得到很明顯的效果,當核酸有比較高的濃度時,不會有比較明顯的效果,然而卻會大大增加雜質增加的可能性。


沉淀劑的選擇:

醇沉淀通常使用乙醇或者異丙醇,無論是乙醇還是異丙醇,它們對于質量的大的影響我們暫時還沒有發(fā)現(xiàn)。乙醇沉淀的核酸顏色比較白,比較蓬松,容易在壁上移動,異丙醇沉淀的核酸顏色不是很白,比較緊湊,帖壁緊。乙醇用于大量核酸的沉淀,異丙醇用于少量核酸的沉淀。沒有遇到過異丙醇更容易使鹽沉淀的現(xiàn)象,不徹底的洗滌為出現(xiàn)該現(xiàn)象的因素。當然,體積小為異丙醇沉淀的Zda優(yōu)點,能夠在1.5ml離心管內完成絕大部分的小量抽提操作。然而由于其沉淀物很緊湊,洗滌時不容易洗滌到其ZX部分,因此放置一段時間使沉淀Z終變成蓬松的白色或者懸浮起沉淀為洗滌異丙醇沉淀的核酸的關鍵。除了乙醇和異丙醇可以用于核酸沉淀,核酸沉淀還能夠使用PEG、LiCl、CTAB。盡管和醇沉淀相比較,它們的使用頻率不會更高,然而卻各自有特點。沉淀病毒顆粒的方便手段為PEG。CTAB能夠將核酸從含多糖的裂解體系中沉淀下來,LiCl能夠將RNA沉淀,從而使DNA去除得以實現(xiàn)。


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