工作原理

工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實驗技術(shù)。它的基本原理是以一個光潔，直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細胞的膜接觸，之后對微電極另一端開口處施加適當?shù)呢搲河秒姌O的纖細開口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入，如此在微電極開口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會形成緊密的封接，它的電阻能夠達到數(shù)個或數(shù)十個千兆歐，這世界上就是在化學上完全隔離了吸附在微電極開口處的那一片膜同膜的其余部分，通過微電極記錄到的電流變化僅僅和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關(guān)聯(lián)。若在這一小片膜中僅僅有一個或少數(shù)幾個通道蛋白分子，那么通過微電極測量出的電流，就是某種帶電離子經(jīng)由開放的單一通道蛋白質(zhì)分子進行跨膜移動的結(jié)果。

操作步驟：

1.打開總電源。

2.依次打開電腦、顯微鏡、監(jiān)視器、微操、放大器。

3.打開PULSE軟件，在E盤建立自己的文件夾。

4.灌注玻璃電極并排空氣體。

5.裝上玻璃電極，浸入液面并調(diào)至視野范圍。

6.點擊set-up，將增益調(diào)為0.5，點Auto，記錄電極電阻。

7.封接細胞，若上G，提起或吸破細胞。

8.依次點擊on-cell，whole-cell補償。

9.選定In-out或whole-cell模式進行實驗。

10.用完關(guān)閉儀器，并切斷總電源。

注意事項：

1.為了防止塵埃、靜電傷害機器，每天做實驗前請用清水拖地。

2.拉制儀使用前需預(yù)熱15-30min。

3.銀絲電極及地線發(fā)白時，請先用砂紙輕微打磨，再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀，如果銀絲電極30min未變黑，則考慮更換次氯酸鈉。

4.先開放大器，后開軟件；先關(guān)軟件，后關(guān)放大器。

5.非必須用到汞燈時請不要打開汞燈電源，打開后至少需1個小時才可關(guān)閉。

6.在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲（包括地線），在取放細胞片時請關(guān)閉放大器。

7.向玻璃微電極灌注內(nèi)液時切勿灌太多（1cm左右為適），以防液體進入銀絲底部增加噪聲。

8.安裝玻璃微電極時，電極應(yīng)與銀絲平行，防止刮蹭銀絲電極。

9.玻璃微電極需先用甲醇浸泡，再用酒精燈微燒兩端，使其平滑。

10.換液時應(yīng)時刻觀察浴槽，防止液面過低或液體溢出污染鏡頭，Z適液面為微高于出液口。

11.浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗，防止長菌影響實驗。

12.打雷天氣必須禁止膜片鉗實驗。

13.干燥季節(jié)請先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。

14.每位實驗者請在E盤建立自己的文件夾儲存數(shù)據(jù)。

15.實驗者可以根據(jù)需求設(shè)定自己的電極拉制和patch模式參數(shù)，但請大家不要隨意修改軟件、顯微鏡以及拉制儀的默認設(shè)置。