簡而言之，PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成，大體上，其是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復(fù)制。如今常用的技術(shù)，能夠把一段基因復(fù)制為原來的一百億至一千億倍。

基本要素

1.水以及四種脫氧核苷酸

2.DNA聚合酶

3.引物

4.DNA模板 

工作原理

利用升溫讓DNA變性，在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈，從而達到基因復(fù)制的目的。

反應(yīng)條件

溫度、時間和循環(huán)次數(shù)為PCR反應(yīng)條件。

溫度設(shè)置：

以PCR原理基礎(chǔ)對變性-退火-延伸3個溫度點進行設(shè)置。在標準反應(yīng)中，當溫度達到90~95℃時，雙鏈DNA會變性，然后將溫度快速冷卻至40~60℃，引物退火且在靶序列上結(jié)合，再將溫度快速提升到70~75℃，在 TaqDNA聚合酶的作用下，沿模板延伸引物鏈。

反應(yīng)時間：

變性的時間通常為2~3分鐘，能夠讓模板DNA完全變性。復(fù)性時間通常是30~60秒，引物與模板之間完全結(jié)合的時間充足。待擴增片段的長度決定了PCR延伸反應(yīng)的時間，通常1kb以內(nèi)的DNA片段，延伸時間1min綽綽有余。

循環(huán)次數(shù)：

PCR擴增程度根據(jù)循環(huán)次數(shù)而定。PCR循環(huán)次數(shù)主要以模板DNA的濃度為依據(jù)，通常選擇的循環(huán)次數(shù)在30-40次之間，非特異性產(chǎn)物的量隨著循環(huán)次數(shù)的增多而變多。

反應(yīng)步驟

反應(yīng)的步驟為Denaturation- Annea領(lǐng) of primers-Extension of primers。Denaturing指的是將DNA加熱（至90~95℃）變性，使得雙股的DNA變?yōu)閱喂傻腄NA來當做復(fù)制的模板。而Annea領(lǐng)卻是在一定的溫度下（冷卻至55~60℃）使得 Primers在模板DNA兩端附著，Z后加熱使得溫度達到70~75℃在DNA聚合酶的作用下對引物進行延伸以及合成另一股DNA。