分子雜交（molecular hybridization）是指使單鏈核酸堿基序列確定的技術(shù)。待測單鏈核酸與已知序列的單鏈核酸（叫做探針）間通過堿基配對使可檢出的雙螺旋片段形成為分子雜交的基本原理。下面就讓小編帶你了解一下末端標記DNA的方法。

現(xiàn)在將Klenow片段標記3'末端當作離子來對末端標記的方法進行說明。

注意事項：

1.還有一些其他的方法能夠用作末端標記。

2.對于DNA的純度不作嚴格的要求，即使制備的質(zhì)粒的數(shù)量很少，也能夠進行末端標記來使得探針合成。

操作準備：

試劑：10×末端標記緩沖液，Klenow片段，[α-32P] dNTP，合適的限制酶以及200mmol/L 3種不含標記的dNTP。

設(shè)備：水浴鍋，高速臺式離心機等。

材料：待標記的雙鏈含凹缺3'末端的DNA。

操作步驟：

在25μl反應(yīng)體系中通過合適的限制酶對1μg的DNA進行酶切。將1mg已酶切的DNA、5ml 2mmol/L10×末端標記緩沖液以及1ml 3種dNTP和適量的[a-32P]-dNTP加水變成50ml溶液混合均勻。將1單位的Klenow片段加入，在室溫環(huán)境下反應(yīng)30min。將1ml 2mmol/L 第四種核苷酸溶液加入，在室溫環(huán)境下保溫15min。加熱到70℃保溫5min，使反應(yīng)終止。用酚/氯仿抽提后,用Sephdadex G-50柱層析或者用乙醇沉淀來使標記的DNA分離。