二氧化碳培養(yǎng)箱是一種能使細胞在人工環(huán)境中正常生長的科學實驗裝置。細菌培養(yǎng),尤其是苛氧菌的培養(yǎng),需要37℃、5%的濃度和飽和濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱,為細菌提供生長環(huán)境。
二氧化碳培養(yǎng)箱價格昂貴,而且溫度和氣體濃度傳感器靈敏,如果在使用過程中操作不當,容易導致儀器損壞,影響正常工作和儀器使用壽命。二氧化碳培養(yǎng)箱種類繁多,但核心部分主要是CO2調(diào)節(jié)器、溫度調(diào)節(jié)器和濕度調(diào)節(jié)裝置。一般溫度調(diào)節(jié)范圍在5℃-50℃,濕度在95%以上,CO2控制范圍0%-20%。當空氣沖進箱內(nèi)后,通過能產(chǎn)生潮濕的含水托盤,再用CO2調(diào)節(jié)裝置調(diào)節(jié)CO2的張力,或者將空氣和CO2按比例混和來調(diào)節(jié)CO2張力。
二氧化碳培養(yǎng)箱從原理上主要分為三類:氣套式二氧化碳培養(yǎng)箱、水套式二氧化碳培養(yǎng)箱和N2-O2-CO2培養(yǎng)箱。
氣套式二氧化碳培養(yǎng)箱采用直接加溫空氣方式,其溫度感受器用不受外界溫度、濕度影響的紅外線裝置,主要用于高精度的培;
水套式二氧化碳培養(yǎng)箱使用熱容量大的水加溫的水套箱,當箱體溫度變化和停電時也可保持穩(wěn)定的溫度環(huán)境;
N2-O2-CO2培養(yǎng)箱可控制箱內(nèi)O2的濃度,實現(xiàn)了與生物體內(nèi)更加相近的培養(yǎng)環(huán)境,多用于高精度的細胞培養(yǎng)。

培養(yǎng)箱內(nèi)氣壓由CO2氣體傳感器控制。要求進氣壓為0.06兆帕。開門后,箱內(nèi)氣體丟失,壓力下降。關(guān)門后氣體傳感器在低壓刺激下有節(jié)奏地開閉,向箱內(nèi)充氣,當進氣壓達到0.06兆帕時,自動停止調(diào)節(jié)。
在日常使用過程中,盡量避免不必要的打開培養(yǎng)箱,從而減少傳感器的工作負荷,延長其使用壽命。另外,在換氣瓶時,避免采用加大進氣壓的快速充氣法,使用0.06兆帕的壓力,無形中會損傷CO2傳感器。開始這種損傷效應不能顯示,但反復操作,時間一長,CO2傳感器就會損傷,致氣壓調(diào)節(jié)失靈。一旦傳感器失靈,就會導致箱內(nèi)濃度無法控制,影響培養(yǎng)環(huán)境。
當出現(xiàn)報普信號“CO2 SNSR ERR"時,首先觀察CO2探頭表面是否有水珠,若有水珠則用純棉紗布擦拭,其次觀察CO2探頭是否松動,若有則插緊即可。若仍不能解決則可能是探頭損壞。
在J/R CO2控制的二氧化碳培養(yǎng)箱中,使用零點自動定標裝置,且每24小時自動定標一次,若在循環(huán)自動定標期間CO2的濃度超過0.45%,則出現(xiàn)“IR AUTO ERR”報警信號,造成這一報警的原因可能有以下幾點:
1、自動校正零點的泵的密封圈,過濾器或管路原因?qū)е職怏w不能接觸到探頭。
可能是:①氣泵沒有加電或氣泵損壞;②氣泵與探頭之間的管路脫落;③過濾網(wǎng)堵塞或“O"型密封圈老化。
2、箱內(nèi)溫度低于標定點,如:箱內(nèi)溫度測出為30℃而標定點溫度為50℃,在此時重新標定CO2,則可解除報警信號。
3、可能實驗室內(nèi)的CO2的濃度過高,實驗室內(nèi)的CO2的濃度過高有可能是CO2瓶漏氣所致。
4、CO2探頭過臟所致,先進行擦拭,若仍不能解決,則更換CO2探頭。
培養(yǎng)箱溫度由溫度傳感器控制,它的正常運行需要25℃室溫條件。為了監(jiān)測室溫,在培養(yǎng)箱外放一支水銀溫度計,每日觀察并且作好室溫登記制度。
在日常使用時,箱內(nèi)同樣放1支水銀溫度計監(jiān)測箱內(nèi)溫度。溫度傳感器正常運行,使設(shè)定溫度數(shù)(37℃)、箱面顯示數(shù)和箱內(nèi)溫度三者一致。當室溫高于30℃時,溫度傳感器調(diào)節(jié)失靈,儀器就會報警,提示箱內(nèi)溫度、箱面溫度、設(shè)定溫度三者不一致。
如果在白天,工作人員就會降低室溫,保證培養(yǎng)箱溫度恢復正常。但在晚上,儀器就會持續(xù)報警,影響培養(yǎng)環(huán)境和損傷溫度傳感器。因此,每日觀察和保持室溫,是保養(yǎng)培養(yǎng)箱的必要條件和工作程序。
二氧化碳培養(yǎng)箱使用過程中,要求在箱內(nèi)托盤中放2/3至全盤的滅菌水,維護箱內(nèi)飽和濕度環(huán)境。因為飽和濕度環(huán)境可以避免CO2逃逸,維持PH穩(wěn)定,有利于細菌生長。
實際工作中,工作人員常忘記補充水,使箱內(nèi)處于低濕度或干熱環(huán)境,致CO2揮發(fā),PH改變,影響細菌生長。為了避免該問題出現(xiàn),要求工作人員每天打開培養(yǎng)箱時,首先檢查托盤內(nèi)水分是否充足,是否需要補充,然后再取箱內(nèi)培養(yǎng)基。

因為二氧化碳培養(yǎng)箱主要用于細菌培養(yǎng),時間一長,箱內(nèi)就會有細菌的滋生和繁殖,從而容易污染接種的培養(yǎng)基。
為了避免交叉污染,培養(yǎng)箱內(nèi)托盤盛裝的無菌水是按照1000:2的比例加人新潔爾滅液,同時定期用75%酒精和紫外線消毒箱內(nèi)空氣,切斷箱內(nèi)微生物滋生的環(huán)境,保持箱內(nèi)處于無污染狀態(tài),以利于培養(yǎng)基內(nèi)細菌生長。在消毒前一定要移走托盤,空氣過濾器及溫度探頭。用皂液水和消毒液的混和液清洗加濕盤,然后用蒸餾水漂洗,Z后用70%酒精噴淋處理加濕盤。
總之,在二氧化碳培養(yǎng)箱使用過程中,只要保持室溫、濕度和箱內(nèi)消毒工作和日常正確使用,就能保證二氧化碳培養(yǎng)箱正常運行,為臨床微生物室的細菌培養(yǎng)提供服務。
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