核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來(lái)使得樣本核酸提取工作自動(dòng)完成的儀器。其在環(huán)境微生物檢測(cè)、食品安全檢測(cè)、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、疾病控制ZX、臨床疾病診斷、生物學(xué)研究以及畜牧業(yè)等多種領(lǐng)域得到廣泛地應(yīng)用。下面就讓小編帶你了解一下CTAB法。

CTAB法原理：

CTAB（十六烷基三甲基溴化銨）是一種陽(yáng)離子去污劑，能夠?qū)⒓?xì)胞膜溶解，并且和核酸形成復(fù)合物。在高鹽溶液中，該復(fù)合物是可溶的，利用有機(jī)溶劑抽提，將多糖、酚類以及蛋白等雜志出去，之后將乙醇加入，就能夠分離出核酸。

CTAB提取緩沖液的經(jīng)典配方以及作用

1、終濃度100mM Tris-HCL(pH 8.0)

作用：為了避免核酸被破壞，Tris-HCL(pH 8.0)提供了一個(gè)緩沖環(huán)境。

2.終濃度20mM EDTA(pH 8.0)

作用：EDTA螯合錳離子或者鎂離子，使DNase活性得以YZ。

3.終濃度0.4M NaCl

作用：NaCl提供了一個(gè)高鹽環(huán)境，充分溶解DNP，在液相中存在。

4.終濃度2％（W/V）CTAB

作用：CTAB使細(xì)胞膜溶解，并且和核酸結(jié)合，方便分離核酸。

5.使用前加入0.1％（V/V）β-巰基乙醇

作用：β-巰基乙醇為抗氧化劑，使酚氧化成醌得到有效的避免，使褐變得以避免，易于除去酚。

CTAB提取緩沖液的改進(jìn)配方

CTAB終濃度由2％（W/V）CTAB變?yōu)?％（W/V）CTAB，新添加終濃度3％（W/V）PVP40。

終濃度3％（W/V）PVP40

作用：PVP是酚的絡(luò)合物，可以和酚形成一種不溶的絡(luò)合物質(zhì)，使多酚被有效地除去，從而使DNA中酚的污染減少。同時(shí)它還可以與多糖結(jié)合，使多糖被有效地除去。

CTAB法實(shí)驗(yàn)流程

植物材料-液氮研磨-細(xì)胞裂解-抽提-上層溶液-核酸沉淀-離心洗滌-干燥溶解-DNA溶液