流式細(xì)胞儀集電子、計算機(jī)、激光、流體理論于一體，其是進(jìn)行流式細(xì)胞分析的儀器。在功能水平上定量分析和分選單細(xì)胞或其他生物粒子的一種檢測手段，即是流式細(xì)胞術(shù)。其能夠隨上萬個細(xì)胞進(jìn)行高速分析，并且可以同時從一個細(xì)胞中將多個參數(shù)測量出來，下面就讓小編帶你了解一下流式細(xì)胞儀的基本原理。

基本原理

染色待測細(xì)胞，之后將單細(xì)胞懸液制作成功。用一定壓力往流動室內(nèi)壓入待測樣品，在高壓下從鞘液管噴出不含細(xì)胞的磷酸緩沖液，待測樣品流與鞘液管入口方向成一定角度，如此，鞘液就可以包繞著樣品高速流動，使一個圓形的流束組成，在鞘液的包被下待測細(xì)胞單行排列，依次從檢測區(qū)域通過。

流式細(xì)胞儀的發(fā)光源一般是激光。在樣品流上垂直照射著經(jīng)過聚焦整形后的光束，在激光束的照射下的被熒光染色的細(xì)胞，會有激發(fā)熒光和散射光產(chǎn)生。90度方向的光電倍增管和前向光電二極管同時接收這兩種信號。在前向小角度進(jìn)行光散射信號的檢測，細(xì)胞體積的大小基本上由這種信號來反映。熒光信號的接受方向垂直于激光束，經(jīng)過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，使多個不同波長的熒光信號形成。所測細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度由這些熒光信號的強(qiáng)度來代表。通過電倍增管接收后能夠轉(zhuǎn)換為電信號，被計算機(jī)識別的數(shù)字信號能夠由連續(xù)的電信號通過 A/D轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換而成。計算機(jī)處理所測量到的各種信號，在計算機(jī)屏幕上顯示分析結(jié)果，也能夠打印出來，還能夠在硬盤上以數(shù)據(jù)文件的形式存儲，從而為以后的查詢或進(jìn)一步分析做準(zhǔn)備。根據(jù)不同的測量參數(shù)提供了多種檢測數(shù)據(jù)的顯示形式。使用直方圖的形式來表達(dá)單參數(shù)數(shù)據(jù)，其細(xì)胞數(shù)目為Y軸，測量強(qiáng)度為X軸。通常而言，512或1024通道數(shù)為流式細(xì)胞儀坐標(biāo)軸的分辨率，此取決于模數(shù)轉(zhuǎn)換器的分辨率。關(guān)于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù)，不僅能夠?qū)γ總€參數(shù)的直方圖單獨(dú)顯示，而且能夠?qū)ΧS的三點(diǎn)圖、等高線圖、灰度圖或三維立體視圖進(jìn)行選擇。

通過對含有單細(xì)胞的液滴進(jìn)行分離來實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分選。將一個超高頻電晶體配備在流動室的噴口上，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，在這些液滴之中分散待測定細(xì)胞。將正負(fù)不同的電荷充入這些液滴中，當(dāng)液滴從帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板流經(jīng)時，在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn)，往各自的收集容器中落入，往中間的廢液容器落入不予充電的液滴，從而使得細(xì)胞的分離實(shí)現(xiàn)。