暗視野顯微鏡的采用的暗場聚光鏡。不讓光束由下至上的通過被檢物體，而是將光線改變途徑，使其斜射投向被檢物體，使照明光線不直接進入物鏡，利用被檢物體表面反射或衍射光而形成的明亮的圖象。因此，在暗視野顯微鏡鏡檢時。只能觀察到物體的存在，運動及外部形態(tài)，而很難分辨其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。

暗視野顯微鏡的使用方法

　　暗視野顯微鏡鏡檢，可使用研究用暗視野顯微鏡，或?qū)⑵胀ü鈱W(xué)顯微鏡上的聚光器取下，換上暗場聚光器。

　　暗視野顯微鏡的操作方法：

　　1、不論是使用干燥物鏡還是油浸物鏡，暗視野顯微鏡鏡檢時，都應(yīng)在聚光器的上透鏡上加一大滴香柏油。

　　2、將制作好的細(xì)菌懸滴標(biāo)本片置于載物臺上，上升聚光器至頂部使油與載玻片接觸。

　　3、放大光源。

　　4、進行聚光器光軸調(diào)節(jié)及調(diào)焦。用10×物鏡找到被檢物像，關(guān)小聚光器虹彩光圈至可在視野中看到視場光闌的輪廓，再上下緩慢調(diào)整聚光器，這樣會使視場光闌的像變得清晰，如視場光闌不在場ZY，利用聚光器外側(cè)的兩個調(diào)節(jié)鈕進行調(diào)整，當(dāng)亮光點調(diào)到場ZY后，再將其開大，即可進行觀察。

　　暗視場聚光器的使用：

　　1、暗視場聚光器安裝：從聚光器座架上卸下明視場聚光器，然后將暗視場聚光器安裝到位并固緊。

　　2、將被檢樣品的玻片標(biāo)本置于載物臺上，需用油浸的暗視場聚光器，要在聚光器上透鏡與載玻片之間滴加香柏油，使之密接。

　　3、聚光器合軸調(diào)中：用低倍物鏡對樣品聚焦，隨之用聚光器升降螺旋上下調(diào)節(jié)聚光器位置，當(dāng)在暗視場中清晰地窺見一光環(huán)或圓形光點時，停止升降聚光器，用聚光器調(diào)中螺桿移動聚光器，使光環(huán)或光點調(diào)至視場ZX位置。

　　4、調(diào)節(jié)聚光器焦點：轉(zhuǎn)動聚光器升降螺旋，使視場中的光環(huán)調(diào)成一Z小的圓形光點。此刻聚光器的焦點恰好位于樣品處。

　　5、更換需用的高倍物鏡進行暗視野顯微鏡鏡檢觀察。

　　暗視場光擋的制作方法：

　　1、轉(zhuǎn)動聚光器升降螺旋，使聚光器達到Zgao位置。

　　2、用低倍物鏡對樣品聚焦。

　　3、暗視野顯微鏡聚光器合軸調(diào)中。

　　4、將欲使用的物鏡旋入光路，然后對樣品聚焦。

　　5、取出一個目鏡。

　　6、通過暗視野顯微鏡目鏡筒向下觀察，在物鏡透鏡中的后焦面處，可見聚光器孔徑光闌的影像。往復(fù)旋轉(zhuǎn)孔徑光闌調(diào)節(jié)環(huán)或撥動調(diào)節(jié)桿，使孔徑光闌開孔的內(nèi)緣與物鏡孔徑的內(nèi)緣完全重合時為止。

　　7、根據(jù)所測得的直徑，用黑紙制作暗視場光擋，粘貼于濾色鏡ZY部位并放于濾色鏡支架上(黑紙朝下)，檢查暗視野效果并進行調(diào)整，使光擋的ZX準(zhǔn)確地位于顯微鏡光軸的軸心部位。

　　9、暗視野觀察。

暗視場顯微鏡使用注意事項

　　1、制作暗視場光擋時，若光擋直徑過小或光擋的ZX位置不正，則不能全部擋掉直射光，視野不暗，樣品與背景的明暗反差不明顯;若光擋直徑過大，聚焦到樣品上的光線不足，使暗視野顯微鏡觀察到的樣品亮度不佳，影響觀察效果。

　　2、使用暗視野顯微鏡時，照明光源的照明強度要高，否則樣品的反射光強度不夠，影響觀察效果。

　　3、若視場中樣品與背景明暗反差不強時，可以上下調(diào)節(jié)聚光器的位置，使視場內(nèi)的反差提高。

　　4、要求使用的載玻片和蓋玻片必須無劃痕且無灰塵，物鏡前透鏡也必須清潔無塵。載玻片與蓋玻片的厚度應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)。載玻片太厚，聚光器的焦點將落在載玻片內(nèi)，達不到被檢物體的平面上;使用油鏡頭時，由于物鏡的工作距離很短，甚至無法調(diào)焦，從而看不到或看不清被檢物體。

　　5、載玻片的厚度要適宜，照明光束經(jīng)暗視野顯微鏡聚光器后，產(chǎn)生空心照明光錐，即ZX為暗區(qū)。而反射光的焦點在聚光器上透鏡表面之上，很短的距離。因此，載玻片的適宜厚度為0.8～1.2mm。

　　6、物鏡的數(shù)值孔徑必須小于聚光器的數(shù)值孔徑，否則會因物鏡的孔徑角大于暗視野顯微鏡聚光器所形成的照明光束ZX暗區(qū)的角度，致使部分照明光線射入物鏡，破壞或降低了暗視場的照明。

　　7、暗視野顯微鏡鏡檢時室內(nèi)要暗，如果沒有這樣的條件，應(yīng)盡可能使用遮光裝置，以阻止目鏡周圍的光線射入。

　　8、在進行油鏡鏡檢時，由于油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡的漫反射，會妨礙暗視野顯微鏡鏡檢效果，所以要求盡可能地除掉油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡。