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2025-01-21 09:29:31病毒載體疫苗: “病毒載體疫苗”這個(gè)問(wèn)題與我的專業(yè)領(lǐng)域不完全吻合。病毒載體疫苗利用改造的病毒為載體，攜帶目標(biāo)病毒基因片段送入人體細(xì)胞，激發(fā)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體。具有高效、安全、易于生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，在傳染病防控中有廣泛應(yīng)用。如需更多信息，建議查閱生物技術(shù)或醫(yī)學(xué)相關(guān)文獻(xiàn)。

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病毒載體疫苗資訊

響應(yīng)科技部號(hào)召全國(guó)數(shù)家機(jī)構(gòu)開啟多種技術(shù)的新冠疫苗研究

2月1日，科技部啟動(dòng)的“新型冠狀病毒感染的肺炎疫情科技應(yīng)對(duì)”中關(guān)于疫苗研發(fā)的應(yīng)急攻關(guān)項(xiàng)目經(jīng)過(guò)前期摸底和申報(bào)，正式開啟。

858
2020-02-24
新冠疫苗科技應(yīng)對(duì) mRNA疫苗重組蛋白疫苗病毒載體疫苗
新一代疫苗及藥物遞送載體——病毒樣顆粒（VLPs）

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2025-02-27

病毒載體疫苗產(chǎn)品

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病毒載體疫苗問(wèn)答

2022-09-10 14:33:21光散射技術(shù)在疫苗和基因載體中的應(yīng)用: 光散射技術(shù)解決方案：疫苗和基因載體的關(guān)鍵質(zhì)量屬性表征和質(zhì)量控制01會(huì)議詳情主題：光散射技術(shù)在疫苗和基因載體中的應(yīng)用時(shí)間：2022年9月15日 19:00內(nèi)容：SEC-MALS、DLS原理講解DLS、HT-DLS實(shí)例應(yīng)用：AAV/LVSEC-MALS的AAV分析（Vg/Cp）方法FFF-MLAS與SEC-MALS的對(duì)比：LNP分析02參加會(huì)議會(huì)議鏈接：https://paj.h5.xeknow.com/sl/2gT5z2或掃碼加入會(huì)議

2023-05-26 09:34:24如何確保疫苗安全有效？: 疫苗Vaccine疫苗有過(guò)負(fù) 面報(bào)道，但是國(guó)產(chǎn)新冠疫苗遠(yuǎn)銷海內(nèi)外，三年疫苗接種老少男女上億人次，事實(shí)證明，國(guó)產(chǎn)疫苗能浴火重生、安全可靠。1、如何確保防疫針劑有效和安全？藥理有效性需要通過(guò)液相質(zhì)譜儀等儀器查驗(yàn)。2、如何確保疫苗針劑的西林瓶密封無(wú)破損？在歐洲、美國(guó)和印度制藥廠都采用雙光源X射線檢測(cè)，特別是凍干粉針劑無(wú)法通過(guò)燈檢來(lái)檢出西林瓶中的碎玻璃。Thermo Scientific? Xpert? 側(cè)射型 X 射線檢查系統(tǒng)3、如何保證注射的劑量是安全和有效呢？為什么有的孩子注射后會(huì)有不良反應(yīng)？是否超過(guò)安全劑量？生產(chǎn)疫苗制劑已經(jīng)采用全自動(dòng)生產(chǎn)流水線，凍干粉和水針劑都采用自動(dòng)灌裝，灌裝后的劑量檢測(cè)是采用動(dòng)態(tài)檢重秤設(shè)備，一般疫苗要求控制重量誤差為10至30毫克；而傳統(tǒng)檢重秤稱量臺(tái)帶有電機(jī)、軸承和滾軸會(huì)產(chǎn)生振動(dòng)影響稱量，無(wú)法保證一年后動(dòng)態(tài)稱量精度達(dá)到10-30毫克，如同汽車開了一年需要保養(yǎng)才能上路，五年后的保養(yǎng)成本會(huì)越來(lái)越高，而且不能達(dá)到新車狀態(tài)。核心技術(shù)Core technology賽默飛世爾科技公司成功突破了高速和高精度的瓶頸，其核心采用松帶專利技術(shù)：稱重傳感器采用工業(yè)級(jí)、動(dòng)態(tài)響應(yīng)迅速的應(yīng)變電阻稱重傳感器。Thermo Scientific Versa Rx選用的是針對(duì)動(dòng)態(tài)檢重秤應(yīng)用的應(yīng)變電阻稱重傳感器，其松帶技術(shù)使稱量臺(tái)上沒(méi)有電機(jī)。首先，徹底消除電機(jī)振動(dòng)，其次實(shí)現(xiàn)了稱量臺(tái)自重輕巧，可以忽略稱量臺(tái)本身重量，只考慮最大產(chǎn)品重量，相對(duì)而言稱量臺(tái)的有效稱量精度提高到0.01%。換而言之，達(dá)到與電磁補(bǔ)償式稱重傳感器一樣的稱量精度，實(shí)現(xiàn)了高速高精度的夢(mèng)想，在600件/分鐘時(shí)，根據(jù)包裝袋的大小不同，最佳動(dòng)態(tài)精度可達(dá)到10-30mg。應(yīng)用要點(diǎn)Application key points在醫(yī)藥行業(yè)采用檢重秤（或稱為：分選秤）主要用于檢測(cè)說(shuō)明書缺損和確保灌裝量。要求測(cè)量速度高：一般在300件/分鐘以上；動(dòng)態(tài)檢測(cè)精度高：一般要求正負(fù)偏差在100mg至300mg。影響檢重秤動(dòng)態(tài)精度的因素除了機(jī)器本身的機(jī)械振動(dòng)影響以外，產(chǎn)品長(zhǎng)度、產(chǎn)品內(nèi)部晃動(dòng)以及環(huán)境因素都會(huì)影響精度。在相同稱量臺(tái)長(zhǎng)度條件下產(chǎn)品長(zhǎng)度越長(zhǎng)，稱量時(shí)間越短精度會(huì)越差，克服方法是加長(zhǎng)稱量段長(zhǎng)度。01、消除不利檢重秤的環(huán)境因素基礎(chǔ)不堅(jiān)固，基礎(chǔ)振動(dòng)，檢重秤支撐腳懸空，檢重秤輸入端與前端輸送機(jī)之間的空隙過(guò)大，運(yùn)行時(shí)輸入/輸出皮帶碰到秤量段和各種方向的氣流影響都會(huì)影響檢重秤的動(dòng)態(tài)稱量。氣流影響可以通過(guò)增加防風(fēng)罩解決。中包裝段所處位置經(jīng)常有叉車或液壓車裝卸貨物，因此基礎(chǔ)振動(dòng)對(duì)檢重秤影響較大。02、克服基礎(chǔ)振動(dòng)Thermo Scientific的Versa Rx檢重秤應(yīng)用了DBSVAC(Dynamic broad spectrum vibration analysis and compensation) 動(dòng)態(tài)寬頻振動(dòng)分析和補(bǔ)償專利技術(shù)，通過(guò)分析和補(bǔ)償基礎(chǔ)振動(dòng)消除了基礎(chǔ)振動(dòng)對(duì)檢重秤影響。03、消除產(chǎn)品內(nèi)部晃動(dòng)液體藥品內(nèi)部的藥水晃動(dòng)可以影響檢重秤動(dòng)態(tài)精度，Thermo Scientific的VersaRx檢重秤從輸入段到稱量段到輸出段采用刀口設(shè)計(jì)，使液體藥品非常平滑進(jìn)入稱量臺(tái)，從而克服了藥水晃動(dòng)的稱量的影響。

2023-05-26 14:41:07有了它們——疫苗檢測(cè)更進(jìn)一步: 疫苗檢測(cè)：人生就像一段旅程，這段路程有時(shí)精彩，有時(shí)荊棘，我們?cè)诰手芯`放自我，在荊棘中奮勇前進(jìn)。而在這段旅程中，保駕護(hù)航的疫苗不僅在傳染病領(lǐng)域提供了預(yù)防功能，新型疫苗在一些醫(yī)學(xué)疑難雜癥的預(yù)防和治療領(lǐng)域有了新的突破。疫苗因其組成復(fù)雜，結(jié)構(gòu)龐大，工藝繁瑣，使得其檢測(cè)和分析更有挑戰(zhàn)。今天我們從疫苗中主成分檢測(cè)，工藝監(jiān)控和載體檢測(cè)三個(gè)角度分享一下疫苗檢測(cè)中的創(chuàng)新應(yīng)用。HPLC方法檢測(cè)疫苗中的主成分蛋白質(zhì)疫苗在預(yù)防肝炎，帶狀皰疹病毒，HPV感染，新冠病毒和其他病毒感染起到了非常重要的應(yīng)用，除了經(jīng)典的酶聯(lián)免疫的方法。液相色譜法因檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，越來(lái)越多應(yīng)用于蛋白總量的測(cè)定。核酸疫苗的研發(fā)和生產(chǎn)中，HPLC技術(shù)的應(yīng)用也解決了一些檢測(cè)難題。SEC方法檢測(cè)目標(biāo)蛋白總量-BIOBASIC SEC 120 BIOASIC SEC-120色譜柱檢測(cè)分子量比較小的用于豬的疫苗蛋白總含量測(cè)定，重復(fù)性良好。優(yōu)于酶聯(lián)免疫法偏差較大的結(jié)果。SEC方法檢測(cè)人免疫球蛋白二聚體-MAbPac SEC-1SEC方法是檢測(cè)蛋白類制劑中的聚體分析的經(jīng)典方法。5 μm的300?孔徑的MAbPac SEC-1色譜柱可以快速分析人血白蛋白的聚體和單體。疫苗分子量，結(jié)構(gòu)和組成不同，我們有不同排阻范圍的柱子選擇，下面是我們可以用于疫苗檢測(cè)的一些SEC柱子信息，可以用于快速蛋白純度測(cè)定和含量測(cè)定。RP方法檢測(cè)蛋白組成-MAbPac RP蛋白類疫苗需要檢測(cè)目標(biāo)蛋白的含量，對(duì)于抗體類蛋白，可以采用親和色譜法快速定量，重組蛋白常用電泳法，免疫化學(xué)法等方法，很少使用反相色譜法進(jìn)行。因?yàn)橐呙绯煞直容^復(fù)雜，常規(guī)的硅膠基質(zhì)反相色譜柱，孔徑比較小，不耐堿洗等因素。新型的耐堿性聚合物基質(zhì)的MAbPac RP色譜柱，可以在檢測(cè)該重組疫苗蛋白，在0.1 mg/mL-2.5 mg/mL范圍內(nèi)線性良好。用于蛋白疫苗定量檢測(cè)。SEC方法檢測(cè)mRNA聚體-BIOBASIC SEC 1000尺寸排阻色譜法（SEC）是用于聚體分析的經(jīng)典方法，硅膠基質(zhì)的BIOBSIC SEC 1000可以將該2000 nt的聚體與單體分開。RP方法檢測(cè)mRNA雜質(zhì)-DNAPac RP反相色譜法是在變性條件下分析mRNA的雜質(zhì)，DNAPac RP 1500?的孔徑，可以用于不同堿基對(duì)大小的mRNA的分離。IEC方法檢測(cè)mRNA雜質(zhì)-DNAPac PA200離子交換色譜法在非變性條件下分析mRNA雜質(zhì)，可以用于監(jiān)控mRNA工藝中雜質(zhì)的去除情況。也可以用于成品中mRNA完整性的檢測(cè)。HPLC方法檢測(cè)疫苗生產(chǎn)中的工藝組分疫苗生產(chǎn)過(guò)程中會(huì)引入各類潛在風(fēng)險(xiǎn)物質(zhì)，在生產(chǎn)過(guò)程中會(huì)引進(jìn)一些滅活劑，裂解劑，凍干保護(hù)劑等制劑，為了增加免疫持久性，調(diào)節(jié)親和力會(huì)加入一些佐劑，賦型劑，防腐劑等組分。特色液相色譜柱在CAD檢測(cè)器下可以快速進(jìn)行這類組分的檢測(cè)。RP方法檢測(cè)戊二醛-Acclaim 120 C18戊二醛具有甲醇含量低，無(wú)致畸變，無(wú)積毒的特點(diǎn)，越來(lái)越被廣泛用于滅活。DNPH衍生后的戊二醛可以產(chǎn)生兩個(gè)衍生產(chǎn)物，兩個(gè)產(chǎn)物都可以在Acclaim 120 C18柱上得到很好的分離，在戊二醛在0.4 μg/mL-10.0 μg/mL范圍內(nèi)線性良好。陰離子交換反相方法檢測(cè)去氧膽酸-Acclaim Surfactant去氧膽酸是一種裂解劑，可以裂解病毒顆粒后經(jīng)過(guò)純化去除部分病毒成分，有效降低不良反應(yīng)。Acclaim Surfactant Plus色譜柱采用陰離子交換和RP雙重保留機(jī)理，可以在CAD檢測(cè)器下分離和定量不同的去氧膽酸。陰離子交換反相色譜法快速檢測(cè)吐溫80-Retain AX 吐溫80也可以用于裂解病毒顆粒，分光光度法因其萃取時(shí)間較長(zhǎng)，導(dǎo)致分析時(shí)間比較長(zhǎng)，使用Hypersep Retain AX色譜柱可以避免復(fù)雜的樣品前處理，直接定量生物制劑中的吐溫80含量。陰離子交換，RP色譜法分析PEG組成-Accliam Surfactant Plus對(duì)聚乙二醇（PEG）評(píng)估時(shí)，希望在色譜上對(duì)其進(jìn)行盡可能的分離，以獲得指紋譜圖，進(jìn)行更好的質(zhì)量控制。Acclaim? Surfactant Plus是一款表面活性劑專用柱，尤其適合分析聚合物類的輔料，在對(duì)不同聚合度的PEG分析時(shí)，都能夠獲得優(yōu)秀的峰型和分離度。HILIC分析蔗糖-Hypersil APS-2蔗糖，乳糖添加在活性物質(zhì)濃度較低的疫苗中，減少冷凍干燥時(shí)被升華的氣流帶走并且使凍干后的產(chǎn)品能形成較理想的團(tuán)塊。Hypersil APS-2在分析蔗糖，乳糖時(shí)，峰對(duì)稱度好，定量準(zhǔn)確。RP分析膽固醇、DPPC、Lyso-PC和皂苷分析-Hypersil Gold PFPHPLC方法檢測(cè)疫苗載體RP分析納米脂質(zhì)體組成-Acclaim 300 C18RP分析納米脂質(zhì)體組成-Accucore C30納米脂質(zhì)體是一種非常有前景的藥物載體，可以有效保護(hù)mRNA等藥物運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞中，脂質(zhì)體的組成和比例會(huì)影響藥物的包裹率和穩(wěn)定性，300?的Acclaim C18色譜柱和80?的Accucore C30色譜柱可以將納米脂質(zhì)體中的幾種組分分開。IEC分析AAV包裹率-ProPac3R SAX AAV用于藥物載體中，其包裹率通常通過(guò)超速離心的方法測(cè)定，但是檢測(cè)時(shí)間比較長(zhǎng)，儀器成本也比較高。新型的，單分散的3um的強(qiáng)陰離子交換柱ProPac 3R SAX可以將不同亞型的包裹的AAV與空殼的AAV分開，并且可以得到雜質(zhì)峰。疫苗接種是預(yù)防控制傳染病最有效的手段，新冠疫情中多種不同技術(shù)路徑的疫苗均用于防疫中，其中核酸疫苗帶來(lái)重要變革。相信新的檢測(cè)手段和方法會(huì)在疫苗領(lǐng)域有更廣泛的應(yīng)用。

2023-02-15 14:27:47腫瘤疫苗生物學(xué)活性評(píng)估: 腫瘤疫苗背景腫瘤疫苗，是一種具有預(yù)防和治療潛力的有吸引力的替代免疫治療選擇，是近年研究的熱點(diǎn)之一。針對(duì)腫瘤相關(guān)抗原（Tumor-associated antigen,TAA）或腫瘤特異性抗原 (Tumor specific antigen,TSA) 的疫苗可以特異性地攻擊和破壞抗原過(guò)表達(dá)的惡性細(xì)胞，并由于免疫記憶而實(shí)現(xiàn)慢性治療反應(yīng)。因此，與其他免疫療法相比，癌癥疫苗提供了特異性、安全性和可耐受的治療。根據(jù)腫瘤抗原的組分，癌癥疫苗大致可以分為四種類型：基于 DNA 的疫苗，基于 RNA 的疫苗，基于多肽的疫苗和基于免疫細(xì)胞的疫苗。FDA 批準(zhǔn)的首個(gè)個(gè)性化腫瘤疫苗 PROVENGE (Sipuleucel-T) 是一種基于免疫細(xì)胞的疫苗，用于激素難治性前列腺癌的治療。除此之外，Moderna，BioNTech 都在布局基于 mRNA 的腫瘤疫苗。圖 1 腫瘤疫苗抗原呈遞平臺(tái)示意圖腫瘤疫苗有效性評(píng)估方法生物體接種疫苗后，腫瘤抗原被帶到淋巴結(jié)，進(jìn)而激活抗原特異性的 B 細(xì)胞和 T 細(xì)胞，活化的 B 細(xì)胞產(chǎn)生的抗體及活化的效應(yīng) T 細(xì)胞會(huì)使腫瘤內(nèi)脹并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡。圖 2 腫瘤疫苗誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)示意圖如何有效的評(píng)估腫瘤疫苗的有效性是一個(gè)非常值得探討的問(wèn)題，常用的腫瘤疫苗有效性驗(yàn)證的方法，包括細(xì)胞因子檢測(cè)、CTL 活性檢測(cè)、T 細(xì)胞活化標(biāo)志物檢測(cè)、抗體滴度檢測(cè)、ADCC 檢測(cè)等。1、細(xì)胞因子檢測(cè)細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞經(jīng)過(guò)刺激而合成并分泌的小分子蛋白質(zhì)，在免疫應(yīng)答中起著非常重要的作用，因此可以通過(guò)細(xì)胞因子的分泌能力來(lái)反應(yīng)疫苗誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫的水平。常見的細(xì)胞因子有白介素 (IL) 、干擾素 (IFN)、腫瘤壞死因子 (TNF) 等。下面比較了幾種常見的檢測(cè)方法。ELISA 是一種非常經(jīng)典的細(xì)胞因子的檢測(cè)方法，例如在王曉東等人發(fā)表的關(guān)于胃癌疫苗研究的文章中，提到了用 ELISA 的方法檢測(cè)接種疫苗后小鼠骨髓源樹突狀細(xì)胞（BMDCs）分泌細(xì)胞因子的能力，檢測(cè)方法如下：BMDCs 在含有 10ng/mL GM-CSF 和 10ng/mL IL-4 的 X-vivo 15 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，37℃下培養(yǎng) 6 天，然后以每孔 5×104 細(xì)胞的密度在 96 孔板中接種。以 5μM 或 10μM 的最終濃度加入疫苗抗原，孵育 24 小時(shí)。使用小鼠 TNF-α 和 IL-12 p70 ELISA Ready-SET-Go 試劑組定量培養(yǎng)上清中的 TNF-α 和 IL-12 。首先在 4℃下用捕獲抗體包被 ELISA 板過(guò)夜，然后在室溫下依次加入阻斷液、細(xì)胞培養(yǎng)上清和檢測(cè)抗體，孵育 1h 。最后加入終止液和顯色劑，用酶標(biāo)儀 (BioTek) 在 450nm 處記錄 OD 值。檢測(cè)結(jié)果如下：從檢測(cè)結(jié)果可以看出，T7（TLR7 激動(dòng)劑）的存在可以顯著提升 ML/MB 抗原誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)。圖 3 ELISA 法測(cè)定小鼠骨髓樹突狀細(xì)胞 (BMDCs) 分泌TNF-α (a) 和 IL-12 (b) 的水平Ankita Leekha 等人發(fā)表的關(guān)于 SRAS-COV2 疫苗文章中，提到了用 ELISPOT 的方法評(píng)估細(xì)胞因子的分泌水平，可以作為參考。具體方法如下：從小鼠中分離脾細(xì)胞和肺細(xì)胞，使用小鼠 IFNγ ELISpot 基礎(chǔ)試劑盒和小鼠 IL4 ELISpot 基礎(chǔ)試劑盒 (Mabtech, VA, USA) 進(jìn)行 IFNγ 和 IL4 ELISpot 檢測(cè)。在 37℃ 下，在預(yù)包被抗體的 ELISpot 板中，用抗原刺激脾細(xì)胞和肺細(xì)胞，培養(yǎng) 16-18 小時(shí)。第二天，洗掉細(xì)胞，加入生物素化的檢測(cè)抗體。洗板后，加入 1:30000 稀釋的 Extravidi-ALP 偶聯(lián)物，室溫孵育 1 小時(shí)。洗板后，每孔添加 70μL 顯色液，孵育 20-30min，形成斑點(diǎn)，然后用水清洗，干燥。使用 Cytation 7 (BioTek) 對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行量化。每個(gè)點(diǎn)對(duì)應(yīng)一個(gè)單獨(dú)的細(xì)胞因子分泌細(xì)胞。檢測(cè)結(jié)果如下：圖 4 ELIPSOT 方法檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞和肺細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的水平2、CTL 活性檢測(cè)疫苗誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞 (CTL) 可以直接殺傷腫瘤細(xì)胞，起到抗腫瘤的作用，因此可以通過(guò)檢測(cè) CTL 的殺傷效應(yīng)來(lái)反應(yīng)疫苗的效果。常用的檢測(cè)細(xì)殺傷效應(yīng)的方法有很多，下表列舉了一些常用的方法。王曉東等人發(fā)表的文章中提到了 LDH 檢測(cè)，檢測(cè)方法如下：從接種疫苗小鼠的脾臟中分離淋巴細(xì)胞（效應(yīng)細(xì)胞）。EAC 腫瘤細(xì)胞（靶細(xì)胞）與淋巴細(xì)胞（效應(yīng)細(xì)胞-靶細(xì)胞比例為 50:1）共培養(yǎng) 4h，使用乳酸脫氫 (LDH) 法測(cè)定細(xì)胞毒性。將培養(yǎng) 4h 后的培養(yǎng)上清加入在 ELISA 板中，室溫下加入底物溶液，孵育 30min。最后，加入終止液終止反應(yīng)，并用酶標(biāo)儀 (BioTek) 在 490nm 處檢測(cè)光密度。檢測(cè)結(jié)果如下：相對(duì)于 PBS 對(duì)照組來(lái)說(shuō)，T7-MB 組 CTL 細(xì)胞具有顯著的殺傷效應(yīng)。圖 5 LDH 法測(cè)定 CTL 介導(dǎo)的 EAC 靶細(xì)胞的裂解水平3、抗體滴度及親和力檢測(cè)腫瘤疫苗除了可以誘導(dǎo)細(xì)胞免疫之外，也可誘導(dǎo)體液免疫，對(duì)此可通過(guò)對(duì)抗體滴度及親和力進(jìn)行檢測(cè)來(lái)反應(yīng)疫苗抗腫瘤的效果，ELISA 是一種非常經(jīng)典的檢測(cè)方法。上述關(guān)于胃癌疫苗的文章中通過(guò) ELISA 方法測(cè)定小鼠接種疫苗后血清中總 IgG 含量，具體檢測(cè)過(guò)程如下：小鼠接種疫苗后收集血液樣本，通過(guò) 3000g 離心 15 分鐘獲得血清樣本。ELISA 板預(yù)先在 4℃ 包被 BSA-MG1 過(guò)夜，然后在室溫下依次加載封閉溶液 2h，血清樣品 (1:50 稀釋) 和檢測(cè)抗體 1h。最后，在體系中加入 p-NPP 底物 (Millipore) 和終止液，用酶標(biāo)儀 (BioTek) 在 405nm 處記錄 OD 值。檢測(cè)結(jié)果如下：相對(duì)于 PBS 對(duì)照組來(lái)說(shuō)，T7-MB 組抗體含量明顯上升。圖6 ELISA法測(cè)定疫苗誘導(dǎo)的血清抗體水平除此之外，在 Emily C. Gale 等人發(fā)表的關(guān)于 mRNA 遞送系統(tǒng)及輔劑研究的文章中，通過(guò) ELISA 的方法測(cè)定了 mRNA OVA 模式疫苗誘導(dǎo)的 OVA 特異性抗體的絕對(duì)含量及其親和力。具體檢測(cè)方法如下：抗體濃度：小鼠接種加強(qiáng)疫苗后，采集血液樣品，血清按照 1:100 000 進(jìn)行稀釋。采用 anti-OVA mouse IgG1 ELISA (Cayman Chemicals) 試劑，按照試劑廠家的說(shuō)明進(jìn)行 ELISA 實(shí)驗(yàn)。使用 Synergy H1 Microplate Reader (BioTek) 在 450nm 處記錄 OD 值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清抗體濃度，表示 mg/mL?？贵w親和性：將 12 個(gè)梯度稀釋的血清與恒定濃度標(biāo)記 HRP 的 anti-OVA 抗體 (3nM) 混合，并在 OVA 抗原包被的板中室溫孵育 2 小時(shí)，洗板后用 TMB 底物孵育，用 HCl 停止反應(yīng)。測(cè)定 450nm 處的 OD 值。根據(jù)業(yè)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的單克隆抗體的共同親和力，假設(shè)對(duì)照抗體的 KD 為 1nM 對(duì)實(shí)驗(yàn)組的 KD 值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。這一假設(shè)僅影響報(bào)告的絕對(duì) KD 值，而不影響實(shí)驗(yàn)組之間的相對(duì)差異。檢測(cè)結(jié)果如下：pIC 為雙鏈 RNA 結(jié)構(gòu)模擬物，圖E中比較了可溶性的 pIC 和不同納米顆粒遞送系統(tǒng)誘導(dǎo)的絕對(duì)抗體含量，從圖 E 中可以看出 2B 遞送系統(tǒng)誘導(dǎo)的 OVA 特異性抗體含量最高。從F和G可以看出 2B 遞送系統(tǒng)相對(duì)于可溶性 pIC 來(lái)說(shuō)誘導(dǎo)的 IgG 親和力也顯著升高。圖 7 pIC/PBAE NPs 增強(qiáng)體液免疫4、ADCC 檢測(cè)疫苗誘導(dǎo)體液免疫產(chǎn)生的抗體能夠捕捉目標(biāo)抗原，阻斷這個(gè)靶分子的功能，也可以引導(dǎo)其他免疫細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞）殺死表達(dá)抗原的靶細(xì)胞，在腫瘤治療中，特別是血液腫瘤中，抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用 (ADCC) 起著關(guān)鍵作用，ADCC 常用的檢測(cè)方法包括細(xì)胞活力檢測(cè)、LDH 檢測(cè)、工程細(xì)胞株、Delfia、RTCA、細(xì)胞成像檢測(cè)等。王曉東等人發(fā)表的關(guān)于胃癌疫苗研究的文章中，提到了 LDH 方法檢測(cè) ADCC，檢測(cè)方法如下：小鼠接種疫苗后，采集其血清樣本（1:25 稀釋），然后與 EAC 細(xì)胞（靶細(xì)胞）在 37°C 孵育 30min。使用小鼠 NK 細(xì)胞分離試劑盒從正常 BALB/c 小鼠中分離出自然殺傷 (NK) 細(xì)胞（效應(yīng)細(xì)胞），與抗體標(biāo)記的 EAC 細(xì)胞以效靶比 50:1 共培養(yǎng) 4 小時(shí)。采用 LDH 法 (Promega) 測(cè)定細(xì)胞毒性，檢測(cè)方法與之前提到的 CTL 活性檢測(cè)的方法一致。檢測(cè)結(jié)果如下：相對(duì)于 PBS 對(duì)照組來(lái)說(shuō)，T7-MB 組產(chǎn)生的抗體具有顯著的殺傷效應(yīng)。圖 8 LDH 法測(cè)定血清抗體介導(dǎo)的 EAC 靶細(xì)胞的裂解水平腫瘤疫苗生物學(xué)活性檢測(cè)解決方案推薦本文介紹了腫瘤疫苗活性檢測(cè)的常用方法，包括細(xì)胞因子檢測(cè)、CTL 活性檢測(cè)、抗體滴度及親和力檢測(cè)、ADCC 檢測(cè)等方法，涉及到了酶標(biāo)儀、成像系統(tǒng)、流式、RTCA、洗板分液系統(tǒng)等設(shè)備。Agilent 細(xì)胞分析事業(yè)部可以從多個(gè)角度為用戶提供從樣品處理，到結(jié)果檢測(cè)再到數(shù)據(jù)分析的全面解決方案。

2023-05-23 11:20:04方案 | IKA 中試產(chǎn)品助力疫苗生產(chǎn): 疫苗的誕生被譽(yù)為人類醫(yī)學(xué)最偉大的發(fā)明之一，它為人類筑起了一道預(yù)防疾病的綠色屏障。例如，由于天花疫苗的研發(fā)和接種，使得天花成為了被人類消滅的第一種傳染病。隨著脊髓灰質(zhì)炎疫苗的大規(guī)模接種，脊髓灰質(zhì)炎病例在過(guò)去三十年中減少了99.9%以上。而人乳頭瘤病毒（HPV）疫苗的出現(xiàn)，讓宮頸癌變成了人類歷史上第一種能夠通過(guò)疫苗預(yù)防的癌癥。病毒性細(xì)胞滅活疫苗制造工藝流程示意圖在上期IKA推文中提到流感疫苗的制備過(guò)程中，細(xì)胞培養(yǎng)這一步強(qiáng)烈推薦使用IKA HABITAT生物反應(yīng)器。而疫苗的大規(guī)模生產(chǎn)還需要許多大型的實(shí)驗(yàn)設(shè)備，以病毒性細(xì)胞滅活疫苗生產(chǎn)工藝流程為例，在生產(chǎn)過(guò)程中，多次涉及溶液的配制，溶液的混勻乳化等操作，我們推薦如下設(shè)備：IKA 工業(yè)級(jí)磁力攪拌器Midi MR 1 digital最大轉(zhuǎn)速：1000 rpm最大處理量(水)：50 LMaxi MR 1 digital最大轉(zhuǎn)速：600 rpm最大處理量(水)：150 LI-MAG最大轉(zhuǎn)速：1500 rpm最大處理量(水)：300 LI-MAG 工業(yè)級(jí)磁力攪拌器專為大體積液體的攪拌應(yīng)運(yùn)而生：強(qiáng)勁的攪拌動(dòng)力，轉(zhuǎn)速最高1500 rpm攪拌底座與控制面板分離式設(shè)計(jì)，使操作更靈活便捷不銹鋼攪拌盤面，防護(hù)等級(jí)高達(dá)IP64，不懼液體飛濺可正反轉(zhuǎn)和間歇運(yùn)行操作，可外接腳踏開關(guān)控制運(yùn)行可預(yù)設(shè)10種攪拌程序，擁有定時(shí)功能，輕松實(shí)現(xiàn)無(wú)人值守操作擁有以太網(wǎng)，USB和RS 232多種接口，可連接軟件實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)程控制具有溫和軟啟動(dòng)，防跳子監(jiān)測(cè)，安全鎖屏等安全功能，實(shí)現(xiàn)多重保護(hù)IKA 中試級(jí)頂置式攪拌器EUROSTAR 200 control最大轉(zhuǎn)速：2000 rpm最大處理量(水)：100 LEUROSTAR 400 control最大轉(zhuǎn)速：2000 rpm最大處理量(水)：150 LRW 47 digital最大轉(zhuǎn)速：1300 rpm最大處理量(水)：200 LEUROSTAR 400 control頂置式攪拌器特色優(yōu)勢(shì)：最大攪拌粘度高達(dá)100,000mPas配移動(dòng)無(wú)線控制器實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)程遙控控制標(biāo)配H67.60外置溫度傳感器，可測(cè)樣品溫度可顯示扭矩變化趨勢(shì)曲線，監(jiān)測(cè)樣品的粘度變化馬達(dá)過(guò)壓過(guò)載保護(hù)，擁有定時(shí)功能，可實(shí)現(xiàn)無(wú)人值守操作擁有USB 和RS 232 接口，可連接軟件遠(yuǎn)程控制和讀取數(shù)值IKA 中試級(jí)均質(zhì)分散機(jī)T 50 digital最大轉(zhuǎn)速：10000 rpm最大處理量(水)：30 LT 65 digital最大轉(zhuǎn)速：9500 rpm最大處理量(水)：50 LUTL 25 digital 在線分散機(jī)最大轉(zhuǎn)速：25000 rpm最大處理量(水)：無(wú)限制樣品輸送流速：11.6 L/minT 65 digital 分散機(jī)適用于中試級(jí)別液體的高速乳化分散：大功率分散機(jī)，符合工業(yè)用電要求的三相電源設(shè)計(jì)無(wú)級(jí)調(diào)速，轉(zhuǎn)速數(shù)字顯示可選滾珠軸承分散刀具用于在真空或壓力環(huán)境下處理樣品電機(jī)過(guò)載保護(hù)，IP54的防護(hù)等級(jí)，安全有保障IKA 在混合分散技術(shù)上擁有深厚的積累，提供多款從中試到生產(chǎn)規(guī)模的磁力攪拌器、頂置攪拌器、均質(zhì)分散機(jī)產(chǎn)品來(lái)助力疫苗的研發(fā)生產(chǎn)。