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2025-01-21 09:31:20冷凍干燥法
冷凍干燥法，簡稱凍干，是通過冷凍和減壓的方式去除物料中水分的技術(shù)。它先將物料冷凍至冰點以下，然后在真空環(huán)境中使冰直接升華成水蒸氣，從而達到干燥目的。該法能較好保持物料的原有結(jié)構(gòu)和活性成分，適用于藥品、食品、生物制品等領(lǐng)域的干燥保存。其優(yōu)點包括產(chǎn)品質(zhì)地疏松、復(fù)水性好、穩(wěn)定性高等。

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2024-01-17 16:05:50免疫層析法和膠體金法的區(qū)別
免疫層析法和膠體金法是兩種常用的生物檢測技術(shù)，它們在原理、應(yīng)用和優(yōu)缺點等方面存在顯著差異。 ①原理區(qū)別：免疫層析法是一種基于抗原-抗體反應(yīng)的生物檢測技術(shù)，利用標記有熒光物質(zhì)、酶、膠體金等物質(zhì)的抗體或抗原，檢測樣品中是否存在相應(yīng)的抗原或抗體。當樣品中的抗原與標記的抗體結(jié)合后，可以通過層析作用將結(jié)合物分離并檢測。而膠體金法則是利用膠體金作為標記物，通過免疫學(xué)方法檢測樣品中的生物分子。膠體金是一種由氯金酸水溶液在還原劑作用下形成的金顆粒，這些金顆粒分散在溶液中形成膠體溶液。當生物分子與膠體金結(jié)合后，可以通過顯色反應(yīng)判斷是否存在該生物分子。 ②應(yīng)用區(qū)別：免疫層析法主要應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷、食品安全、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域。例如，用于檢測尿液、血液、組織液等生物樣品中的病毒、細菌、蛋白質(zhì)等物質(zhì)。膠體金法則主要應(yīng)用于免疫分析、生物傳感器等領(lǐng)域。由于膠體金法操作簡便、靈敏度高、特異性好等特點，被廣泛應(yīng)用于臨床診斷、生物制品質(zhì)量控制等方面。 ③優(yōu)缺點區(qū)別：免疫層析法和膠體金法在優(yōu)缺點方面也存在差異。免疫層析法的優(yōu)點在于其高特異性、高靈敏度、高重復(fù)性等特點，能夠快速準確地檢測出樣品中的目標物質(zhì)。但是免疫層析法的操作較為繁瑣，需要經(jīng)過多個步驟才能完成檢測，而且成本較高。膠體金法的優(yōu)點在于其操作簡便、快速、無需特殊設(shè)備等特點，能夠在短時間內(nèi)完成大量樣品的檢測。但是膠體金法的缺點在于其靈敏度相對較低，對于低濃度目標物質(zhì)的檢測可能會出現(xiàn)假陽性或假陰性的情況。 總的來說，免疫層析法和膠體金法各有其優(yōu)缺點，具體應(yīng)用應(yīng)根據(jù)實際情況選擇。在某些情況下，可以將兩種方法結(jié)合使用，以獲得更好的檢測效果。例如，在檢測病毒抗原時，可以先使用免疫層析法進行初篩，然后再用膠體金法進行確認，以提高檢測的準確性和特異性。 總之，免疫層析法和膠體金法是兩種常用的生物檢測技術(shù)，它們在原理、應(yīng)用和優(yōu)缺點等方面存在顯著差異。在實際應(yīng)用中，應(yīng)根據(jù)具體情況選擇合適的方法，以達到最-佳的檢測效果。同時，隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，相信這兩種方法將會在未來的生物檢測領(lǐng)域發(fā)揮更加重要的作用。蛋白層析純化詳情：https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification義翹神州：蛋白與抗體的專業(yè)引領(lǐng)者，歡迎通過百度搜索“義翹神州”與我們?nèi)〉寐?lián)系。 
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2023-03-09 13:37:48四環(huán)凍干機—真空冷凍干燥特性參數(shù)測量與分析（八）
4.6 凍干產(chǎn)品的貯藏與復(fù)水4.6.1 真空或充氣包裝已干燥產(chǎn)品是一種疏松的多孔物質(zhì)，有很大的內(nèi)表面積。如果暴露于空氣之中，就會吸收空氣中的水分而潮解，增加產(chǎn)品的殘余水分含量。其次，空氣中的氧、二氧化碳與產(chǎn)品接觸，一些活性基團就會很快與氧結(jié)合產(chǎn)生不可逆的氧化作用。此外，空氣中如含有雜菌，還會污染產(chǎn)品。因此，在產(chǎn)品干燥后，能直接在真空箱內(nèi)密封，使之不與外界空氣接觸?，F(xiàn)在比較先進的凍干機都具有這種功能。因此，凍干產(chǎn)品的貯藏應(yīng)該從第二階段干燥結(jié)束以后開始。由解吸等溫線可知，在平衡條件下，產(chǎn)品中吸附水分的量在給定溫度下是水蒸氣壓力的函數(shù)，如圖4-53所示。在給定溫度下，在很短的時間內(nèi)可近似認為是平衡狀態(tài)，在第二階段的工作壓力應(yīng)該小于平衡蒸氣壓，例如，當溫度為+40℃，預(yù)期殘余水分小于1%時，pch應(yīng)該為幾帕。如果產(chǎn)品（血漿）的溫度只有+20℃，則工作壓力應(yīng)該比1Pa還小。通常情況，延長干燥時間不能降低殘余含水量——只有升高溫度才能降低殘余含水量。要想得到較低的含水量，吸濕性的產(chǎn)品應(yīng)防止在干燥室中再次吸入已被干燥除去的水分。如果使用小瓶，應(yīng)在干燥室中密封。如果是散裝的物料或食品，干燥后應(yīng)該往干燥室中充入干燥空氣或惰性氣體。在+20℃，相對濕度為70%時，空氣中的水分約為1.3×10-2gH20/L。往體積為200L的干燥室充入該氣體時，將引入2.6g的水蒸氣。如果干燥室中有300個小瓶，每個小瓶裝有固體含量為10%的1cm3的物料，則殘余含水量將增加約9%。如果固體含量只有1%，則殘余含水量增加到90%。充入氣體的露點應(yīng)該與第二階段的最終壓力相對應(yīng)，例如，最終壓力為2Pa,氣體的露點應(yīng)為-55℃，最小應(yīng)為-50℃。 因此，凍干產(chǎn)品應(yīng)在二次干燥結(jié)束后采用真空或充氮氣包裝，包裝材料的滲透性差，貯藏運輸過程應(yīng)避光。4.6.2 凍干產(chǎn)品的復(fù)水理論上，凍干制品復(fù)水后能恢復(fù)原有的性質(zhì)和形狀。實際上要讓凍干后的產(chǎn)品完全恢復(fù)原有的特性，不僅受冷凍干燥過程影響，復(fù)水條件也是很重要的，比如復(fù)水液，復(fù)水速率，復(fù)水溫度，復(fù)水率等都會影響復(fù)水后制品的特性。如人紅細胞、角膜等在凍干過程中，大部分水分都被除去，要恢復(fù)其基本生理功能，必須進行復(fù)水，為細胞創(chuàng)造一個與體內(nèi)細胞生存環(huán)境基本相符的條件。牛肉，方便米飯，牡蠣、海參等凍干的食品在食用的時候應(yīng)復(fù)水恢復(fù)其原有的形狀，色澤及口感等。咖啡、青霉素等藥品在使用的時候應(yīng)能速溶。不同的物料復(fù)水條件和過程都不一樣，通常用實驗的方法確定。
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2023-03-02 15:07:01四環(huán)凍干機—真空冷凍干燥特性參數(shù)測量與分析（七）
4.5.2 凍干產(chǎn)品的質(zhì)量及其變化假設(shè)凍干本身是在最優(yōu)條件下進行的，而且在凍干過程結(jié)束時產(chǎn)品達到了預(yù)期的質(zhì)量，凍干產(chǎn)品在存儲過程，其質(zhì)量變化至少受三個因素的影響：殘余水分，存儲溫度及混合在包裝袋里的氣體。與其中一種因素有關(guān)的或在更多情況下與三種因素都有關(guān)的變化可分成以下四種情況：①在與水分子的重組過程發(fā)生的變化和/或溶解性；②干燥產(chǎn)品的化學(xué)反應(yīng)；③產(chǎn)品生物-醫(yī)學(xué)活性的惡化；④產(chǎn)品物理結(jié)構(gòu)的變化，例如：由非晶形轉(zhuǎn)變?yōu)椴糠只蛉烤w結(jié)構(gòu)的形式。通常發(fā)生的變化可由這幾種變化中的某幾種解釋。下面給出了幾個典型例子。Liu和Langer證明BSA，卵清蛋白、葡萄糖、氧化酶和β—乳球蛋白在37℃時溶解性迅速減小，并且如果在已干產(chǎn)品中加入了30%（質(zhì)量分數(shù)）生理鹽水緩沖液，則在24h內(nèi)97%的產(chǎn)品將變?yōu)榉侨芙庑缘?。由于水分而引起的聚集歸因于分子間的S一S鍵。對于給定的白蛋白，如果RM為最優(yōu)值則可減少聚集。Zhang等人研究了在keratonocyte增長因子(KGF)重組過程重組介質(zhì)對形成聚集的影響。若干添加劑可使聚集明顯地減小，調(diào)節(jié)重組介質(zhì)離子的強度發(fā)現(xiàn)也有類似的作用。優(yōu)化重組條件可增加蛋白質(zhì)可溶性的恢復(fù)；對于KGF，蛋白質(zhì)溶解性的恢復(fù)與本身的、單節(jié)顯性的組成有關(guān)。此外，Zhang等人還發(fā)現(xiàn)當用純水重組時，白細胞素-2(Ⅰ)和核糖核酸酶（Ⅱ）在+45℃的溫度下存儲時聚集相當大。如果在重組水中加入肝磷脂或磷酸鹽可明顯減少聚集的長度。Shalaev等人研究了在RM0.5g/g蛋白質(zhì)時蛋白質(zhì)質(zhì)子的聚集和T?都將減小。Vromans和Schalks利用非晶形維庫溴銨研究了水敏性藥品的穩(wěn)定性。在制劑中其分解主要取決于水的活度αW，而不是水分的多少。賦形劑的玻璃化不僅有低溫保護作用，而且起穩(wěn)定作用。Cleland等人發(fā)現(xiàn)當蔗糖和蛋白質(zhì)具有適當?shù)姆肿颖嚷蕰r，在40℃可穩(wěn)定保存人類單克隆抗體重組細胞(ruhMAb HER2)33個月。360：1的摩爾比率可成功地穩(wěn)定蛋白質(zhì)。這比通常的制劑中所用的等滲濃度低3～4倍。Souillac等人比較了凍干和物理混合的h-Dnase、rh-GH和rH-IGF-1和甘露醇、蔗糖、海藻糖和右旋糖苷的焓。對物理混合物，發(fā)現(xiàn)焓與蛋白質(zhì)的百分含量呈線性關(guān)系；對凍干的混合物此關(guān)系是非線性的。作者得出的結(jié)論是在凍干的混合物中蛋白質(zhì)和碳水混合物之間會直接發(fā)生反應(yīng)。Hsu等人發(fā)現(xiàn)已包裝的產(chǎn)品也有可能發(fā)生分解。設(shè)想凍干結(jié)束時只具有單分子層的水，且不是均勻分布的，但是在有些位置分子可能連成串。在干燥和存儲過程這些水提供的保護以防止變性。這點是由基因技術(shù)產(chǎn)生的兩種產(chǎn)品證明的：太少的水，比單分子層還少，造成tPA和高鐵血紅蛋白在物理上的不穩(wěn)定，然而較高含量的水卻導(dǎo)致存儲過程生物上的不穩(wěn)定。To和Flink以及van Scoik和Carstensen闡述了四種變化的例子：依To和FIink的觀點，非晶形到晶體的轉(zhuǎn)變或者是因為存儲溫度T(T>TC)太高，或者是因為吸收了水。（注：較多的水增加了非晶形固體的流動性，促進了晶體的成核和增長）。Van Scoik和Carstensen交流了他們關(guān)于蔗糖晶體成核和增長的經(jīng)驗。討論了溫度和殘余水分這兩個成核參數(shù)，建議用添加劑可停止、延緩或加速成核。用來清洗裝有小瓶的干燥室的氣體和加入產(chǎn)品的包裝袋里的氣體的影響尚且不清楚。只是氧氣在多數(shù)情況下被排除。Spiess建議用干空氣存儲花椰菜和藍莓，然而胡蘿卜和辣椒粉應(yīng)該存儲在氧氣含量
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2023-02-24 14:47:07四環(huán)凍干機—真空冷凍干燥特性參數(shù)測量與分析（六）
4.5.1.3 熱重分析法熱重分析法(TG，TG/MS)是在程序控溫下，測量物質(zhì)的質(zhì)量隨溫度（或時間）的變化關(guān)系，用來研究材料的熱穩(wěn)定性和組分。檢測質(zhì)量最常用的辦法就是天平。熱重分析儀如圖4-47所示。May等人描述了在稱量過程中，如何區(qū)分質(zhì)譜儀的讀數(shù)是解吸出來的水的還是揮發(fā)性物質(zhì)的，揮發(fā)性物質(zhì)有可能來自殘余溶劑或部分產(chǎn)品的分解。當前鹵素快速水分測定儀是一種新型快速的水分檢測儀器，其原理就是利用熱重分析法。May等人用TG，TG/MS，KF法和一種命名為“蒸氣壓濕度測量法”(VPM)的新型測量方法研究了α-干擾素和美國標準百日咳疫苗的殘余水分(RM)。VPM測量密閉小瓶中物料上面的空間中水的蒸氣壓。來自紅外二極管的光線穿過小瓶到達圖像探測器。小瓶的溫度從室溫以固定的速率冷卻到一55℃。當水蒸氣冷凝的時候，由于凝結(jié)物使光束變暗，從而改變圖像探測器的信號。凝結(jié)溫度可轉(zhuǎn)化為壓力，從而可計算出頂部空間中水的微觀圖。圖4-48表示α-干擾素的TG值。抽取的三種不同樣品中，發(fā)現(xiàn)RM的平均值為1.15%土0.15%。利用KF法發(fā)現(xiàn)一種樣品中的RM為1.28%。圖4-49表示百日咳疫苗樣品9的相應(yīng)數(shù)據(jù)。水的最終解吸溫度和開始分解的溫度由重量隨時間變化的函數(shù)的導(dǎo)數(shù)曲線確定(%/mi)；當導(dǎo)數(shù)曲線偏離水平線時可認為水的解吸結(jié)束。在表4-1總結(jié)了不同方法我得的結(jié)果，VMP不能提供關(guān)于產(chǎn)品RM的值息。該方法可重復(fù)測量同樣的小瓶在一段時間內(nèi)產(chǎn)品上空的水分，從而確定水分的變化量。4.5.1.4 紅外光譜學(xué)Lin和Hsu描述了用近紅外線(NIR)光譜學(xué)確定密封的玻璃瓶中蛋白質(zhì)類藥品的殘余水分的方法。研究了五種蛋白質(zhì)：人類單克隆抗體重組細胞(ruhMAb)E25、ru- hMAb HER2、rubMAb CDI1a、TNKase和rt-PA，在小瓶壁的水平位置上加入適量的MilliQ水可使殘余水分的量增加，使水蒸氣擴散到已干產(chǎn)品。一般情況下，1～2天后可達到平衡狀態(tài)。利用常用的三種數(shù)學(xué)工具來確定復(fù)雜光譜（不同成分的重合部分或它們之間的化學(xué)反應(yīng))。研究了下列因素對IR標準的影響結(jié)果：賦形劑的濃縮，塊狀產(chǎn)品的疏松度，厚度和直徑以及賦形劑和蛋白質(zhì)的比率，Karl Fischer滴定數(shù)（也叫RF)被用來作為與NIR數(shù)相比較的標準。圖4-50中(a)～(e)表示5種產(chǎn)品RF和RNIF之間的關(guān)系。Karl Fischer滴定法依每日的操作者的不同其波動范圍為士0.5%。因此，RF和RNIR之間的差別≤0.5%認為是較好的。在30～100mg/mL之間疏松度的變化≤0.5%。塊狀物的尺寸必須超過NIR的透深，否則測得的RNIR太小。制劑成分允許有小的變化，然而變化較大時，例如，蔗糖由42.5mmo/L變?yōu)?70mmol//L，隨著濃度的增加吸收率增加（圖4-51）。因此對85mmol/L的RNIR的標準不能用于蔗糖的濃度較低(42.5mmo/L)或較高(>120mm0l/L)的情況；在520cm-1時水的信號隨著產(chǎn)品信號的改變而變化。通常情況下，對于給定的制劑和產(chǎn)品尺寸RNIR標準是一定的，只有在NIR測量對于充足的被反射光線具有足夠長的光程以及校準產(chǎn)品的光譜隨組分濃度的改變沒有被改變的情況下，變化才是允許的。4.5.1.5 殘余水分測量方法的比較干燥產(chǎn)品中的水以多種形式結(jié)合：如存在于表面的水，或多或少與干物質(zhì)結(jié)合的水或以結(jié)晶水的形式存在著的水。因此，對于不同的物質(zhì)，各種方法有可能會產(chǎn)生不同的結(jié)果。利用重量分析法和Karl Fischer滴定法測得的有些物質(zhì)的RM值幾乎是沒什么不同的。May等人提供了四種這類物質(zhì)的例子，但是如表4-2所示，利用重量分析法得到的RM值比Karl Fischer滴定法得到的小0.3%～0.6%，然而，用熱重分析方法得到的RM值在誤差范圍內(nèi)與Karl Fischer滴定法得到的值是非常接近的。在圖4-52中比較了在第二階段干燥過程，利用KF測得的RM和利用DR值計算得到的dW值。用于KF測量的小瓶當時是封閉的，上面的圖表示出了平均值以及誤差條。同樣的藥品在同一臺設(shè)備上，在相同的工藝條件和相同的裝載量的情況下進行了三次試驗過程。利用KF測得的RM值在MD轉(zhuǎn)變?yōu)镾D后以士1%改變，約21h后減少為土0.5%。三次試驗過程dW值都在SD階段開始后以士0.5%改變，在21h后小于0.05%。上下曲線表明，到達最終溫度后，進一步的干燥不可能再降低RM的值0.5%。根據(jù)dW也可得到相同的信息：在21h后水的解吸可忽略，由于其小于0.02%/h。此產(chǎn)品在所選的工藝條件下，用KF法測得1.5%的水分在此溫度下及可接受的時間內(nèi)不能用解吸法除去。
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2023-02-15 14:58:53四環(huán)凍干機—真空冷凍干燥特性參數(shù)測量與分析（五）
4.3 凍干過程中物料含水量的測量(1)稱重法   這是一種古老的方法，也是直接測量法。在凍干箱內(nèi)設(shè)置稱重機構(gòu)，小凍干機內(nèi)可以設(shè)置天平，大型凍干機內(nèi)可以設(shè)置地秤或吊秤，實現(xiàn)邊抽真空邊觀察重量的變化。這種方法的優(yōu)點是簡單易學(xué)；缺點是不夠準確。(2)取樣法   在抽真空干燥過程中，通過設(shè)置在凍干機上的裝置，取出樣品，在大氣環(huán)境下測量產(chǎn)品的含水量這種方法比較麻煩，但是比較準確。取出的樣品可以用直接稱重法，也可以用水分測量儀測量。圖4-44是一種常用的水分測量儀，稱為鹵素快速水分測定儀，它是一種新型快速的水分檢測儀器，其原理為利用熱重分析法。圖4-44為OHAUS MB45型鹵素水分測定儀，其測量精度可達0.001g/0.01%。(3)在線測量法凍干過程水分在線測量是一種最準確、快速、經(jīng)濟的測量方法，只可惜目前還沒有上市的產(chǎn)品。4.4 凍干終點的判斷凍干過程結(jié)束的判斷很重要，它涉及凍干產(chǎn)品的質(zhì)量、產(chǎn)量和經(jīng)濟效益。但是，到目前為止，還沒有科學(xué)的儀器和方法，現(xiàn)有的判斷方法還是經(jīng)驗法，不夠準確。（1）溫度判斷法   在凍干過程中通常都需要測量擱板溫度和物料溫度，并且繪出溫度曲線。當測出的擱板溫度與物料溫度相接近時，即可以認為干燥過程接近結(jié)束。（2）壓力判斷法   在凍干過程中應(yīng)該不斷的測量凍干箱內(nèi)的壓力（真空度），當測得的壓力長時間穩(wěn)定不變（根據(jù)凍干產(chǎn)品的品種、數(shù)量不同，通常在1~2個小時即可），認為凍干過程可以結(jié)束。（3）濕度判斷法   這是一種理論上可行，但實際操作比較困難的方法。這種方法需要在凍干箱內(nèi)裝上濕度計，測出凍干箱內(nèi)氣氛的濕度，進而判斷干燥工藝是否可以結(jié)束。4.5 凍干產(chǎn)品的質(zhì)量分析      4.5.1 殘余水分的測量                       產(chǎn)品殘余水分的測量應(yīng)除去從周圍環(huán)境中吸收的水分。將干燥產(chǎn)品裝入其他容器時，或稱量的時候都應(yīng)該在充滿干燥氣體的箱子或隔離器中進行。箱子應(yīng)該能容納P2O5，或可用干燥氣體清洗。在隔離器中進行的時候應(yīng)帶上固定在隔離器上的手套。干燥氣體中用來稱量的天平需要做一些調(diào)整以避免靜電荷，這有可能導(dǎo)致相當大的錯誤。      4.5.1.1 重量分析法                          正如美國食品和藥品操作規(guī)范第21項610.13條中所說的，在前幾年，這種方法成為強制性的規(guī)范。被稱的樣品存儲在溫度在十20～十30℃之間的干燥室中，連同P2O5被反復(fù)稱量直到質(zhì)量不變?yōu)橹埂悠返淖钚×繎?yīng)該大于100mg，若有必要可取自多個小瓶。較高的溫度可使達到質(zhì)量不變的時間縮短，但是會引起更多的結(jié)合水解吸甚至使產(chǎn)品變質(zhì)。利用這種方法，在+20～+30℃時，發(fā)現(xiàn)水很少被凝固到固體上。      4.5.1.2 Karl Fischer(KF)法             利用這種方法被稱量的干產(chǎn)品被溶解在甲醇中，用Karl Fischer溶液滴定直到顏色由棕色變?yōu)辄S色。視覺觀察可由電流計代替，當?shù)味ńY(jié)束時，電流突然增加，這種方法樣品的重量可比重量分析法減小2一4倍。為了完全地避免視覺觀察產(chǎn)生的誤差，利用電解可產(chǎn)生碘，用庫侖定律計算水的含量，這種儀器（見圖4-45）在商業(yè)上是可得到的。用這種方法可測得的水的最小量為l0μg。Wckx和DeKlejin說明了如何使Karl Fisher法被直接使用于小瓶裝的已干產(chǎn)品。Karl Fischer法不能直接用于在Karl Fischer試劑中能和碘起反應(yīng)或不能溶于甲醇或水分無法被甲醇吸取的產(chǎn)品。Karl Fischer儀器如圖4-46所示。
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