- 2025-01-10 10:52:26定向刨花板
- 定向刨花板,又稱OSB板,是一種以多層交叉定向排列的刨花為主要原料,通過施加膠粘劑后熱壓而成的板材。其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,握釘力強,具有較好的抗彎強度和承重能力。定向刨花板因原料易得、加工簡便、性能優(yōu)越而廣泛應(yīng)用于建筑、家具、包裝等領(lǐng)域。其環(huán)保性能也符合現(xiàn)代家居裝修對綠色建材的需求,是一種性價比較高的板材選擇。
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定向刨花板問答
- 2019-07-03 14:25:10利用NimbleGen序列捕獲技術(shù)實現(xiàn)定向RNA-Seq
- Z近在Nature Protocols雜志上在線發(fā)表的一篇文章1介紹了利用NimbleGen序列捕獲技術(shù)進行轉(zhuǎn)錄組定向測序,用于RNA研究中基因發(fā)現(xiàn)和表達定量。 RNAseq技術(shù)在基因表達研究中得到了廣泛的應(yīng)用,可對表達基因進行無偏見的采樣。相比定量PCR可以對更廣泛的基因同步分析,相比芯片方法RNAseq測序結(jié)果準確性也更高。然而,真核細胞的表達譜具有轉(zhuǎn)錄本數(shù)量眾多、可變剪切情況復(fù)雜,且表達量高低差異大的特點。RNAseq測序結(jié)果分散在整個基因組中,不同基因測序深度差異顯著,對轉(zhuǎn)錄水平偏低的轉(zhuǎn)錄本往往測序深度不足,為進行特定基因的可變剪切體拼接及定量研究造成阻礙。而序列捕獲技術(shù)通過寡合苷酸探針雜交,富集研究所感興趣的基因或基因組區(qū)段,實現(xiàn)了定向測序。將此技術(shù)與RNAseq結(jié)合,即對RNAseq的測序文庫先進行序列捕獲實驗富集感興趣的轉(zhuǎn)錄本,再進行測序,實現(xiàn)定向RNAseq或RNA捕獲測序(CaptureSeq)。這一方法可以提高目標轉(zhuǎn)錄本的測序深度,進行靈敏的基因發(fā)現(xiàn)、有效的轉(zhuǎn)錄本組裝和準確的基因表達定量。文中介紹的實驗步驟主要包括探針設(shè)計、捕獲測序和數(shù)據(jù)分析如轉(zhuǎn)錄本拼接及定量。實驗選用了羅氏NimbleGen探針用于目標捕獲。NimbleGen可同時生產(chǎn)2萬種探針,可覆蓋多達200Mb的基因組中的分散區(qū)域或連續(xù)的區(qū)域,可以應(yīng)對復(fù)雜的真核生物轉(zhuǎn)錄組。文章指出,在探針設(shè)計時,僅針對目標轉(zhuǎn)錄本的部分序列設(shè)計探針,通過這些探針即可捕獲全長轉(zhuǎn)錄本,也可發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄本中的新外顯子。當需對特定剪切方式的轉(zhuǎn)錄本進行定向研究時,可在探針設(shè)計包括連接兩個外顯子片段的探針,專門捕獲這些異構(gòu)體。此外,實驗設(shè)計了用于質(zhì)控的探針。質(zhì)控探針包括:1. 非轉(zhuǎn)錄的基因間區(qū)的探針,以排除gDNA污染;2. 其他可能造成實驗室污染如大腸桿菌等的序列捕獲探針,以排除實驗室污染;3. 數(shù)個質(zhì)控基因的探針,可用于進行測序前qPCR富集分析,或用于數(shù)據(jù)分析參數(shù)的測試;4. 針對摻入樣本的ERCC RNA設(shè)計的探針。 ERCC RNA Spike-in standards由92個in vitro轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄本組成,表達量跨越一個106的范圍,這一些標準品被摻入到Z初的RNA樣品中進行捕獲測序,用于判斷測序量是否充足,以及計算捕獲off-target rate。另外,將各轉(zhuǎn)錄本獲得的測序深度,與ERCC RNA Spike-in standards的測序深度比較,可以推算出樣本中各轉(zhuǎn)錄本的數(shù)量。文章作者指出,這個方法應(yīng)用于轉(zhuǎn)錄水平較低的基因的富集,富集率與基因數(shù)量相關(guān),如1000個隨機選擇的基因預(yù)期55倍富集效率。5微克的總RNA約可生成250ng cDNA文庫,可將多個樣本的文庫混合后根據(jù)Roche NimbleGen的實驗手冊進行捕獲實驗?;旌喜东@的實驗方案可以對大量樣本進行低成本的測序。測序后的分析步驟包括比對、拼接、去除非目標序列、新基因(外顯子)發(fā)現(xiàn)、定量等。通過這一實驗,可以對樣本中特定基因的表達進行研究。該方法既RNASeq相比其他表達譜研究方法的優(yōu)勢,又可以進行有目的性的、多樣本的研究。尤其在對于表達水平中低等的轉(zhuǎn)錄本研究中,可以更好地拼接全長轉(zhuǎn)錄本、發(fā)現(xiàn)新基因以及定量分析。1. Tim R Mercer, Michael B Clark, Joanna Crawford, Marion E Brunck, Daniel J Gerhardt, Ryan J Taft, Lars K Nielsen, Marcel E Dinger, John S Mattick. Targeted sequencing for gene discovery and quantification using RNA CaptureSeq. Nature Protocols. 9, 9891009 (2014) doi:10.1038/nprot.2014.058僅用于科研,不用于診斷
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