ZenoTOF電子活化解離(EAD)介紹
EAD是SCIEX高端的ZenoTOF質(zhì)譜上標(biāo)配的全新碎裂技術(shù),和碰撞誘導(dǎo)碎裂(CID)技術(shù)互為補充。EAD具備兩條協(xié)同作用的途徑:
其一是電子移除機制:
通過產(chǎn)生自由基陽離子,引發(fā)并傳遞超快自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng),從而生成診斷性碎片離子;
其二是電子激發(fā)機制:
將離子提升至激發(fā)態(tài),使其能夠發(fā)生競爭性裂解。
實驗設(shè)計與核心數(shù)據(jù)支撐
研究團隊先以15種二糖(覆蓋連接方式1-2/1-3/1-4/1-6、組成及α/β構(gòu)型異構(gòu)體)和103種黃酮(含黃酮醇、異黃酮等6類骨架,及O-糖/C-糖兩種糖苷類型)的標(biāo)準(zhǔn)品,基于SCIEX ZenoTOF 7600質(zhì)譜系統(tǒng),結(jié)合在線能量EAD采集模式開展實驗。
二糖異構(gòu)體鑒定
針對二糖母離子m/z 365([M+Na]?)的EAD-MS/MS分析(圖1)顯示,EAD生成碎片m/z 259可作為1-4/1-6糖苷鍵二糖特征碎片離子,如:麥芽糖(maltose)、異麥芽糖(isomaltose)均能檢測到m/z 259峰,而1-2/1-3糖苷鍵二糖(如曲二糖kojibiose、黑曲霉二糖nigerose)無此峰;蔗糖(glcα1-2fru)和松二糖(glcα1-3fru)則分別產(chǎn)生特征性斷環(huán)碎片m/z 261和m/z 275。上述信息能夠?qū)崿F(xiàn)不同鏈接方式二糖的精準(zhǔn)區(qū)分。
黃酮苷異構(gòu)體鑒定
對芹菜素O-葡萄糖苷m/z 433([M+H]?)的分析(圖2)表明,在8 eV KE下,芹菜素4'-O-葡萄糖苷可檢測到m/z 397([M+H]-2H?O)和m/z 295(0,2X?-H?O),而芹菜素7-O-葡萄糖苷并不產(chǎn)生任何高m/z的碎片離子;在KE 15 eV時,芹菜素5-O-葡萄糖苷則出現(xiàn)m/z 325(1,4X?-H?O)和m/z 359(3,5X?)特征碎片離子。
能量分辨質(zhì)譜(ER-MS)與算法驗證EAD區(qū)分同異構(gòu)體功能
研究通過能量分辨質(zhì)譜(ER-MS)構(gòu)建碎片離子強度-不同KE曲線圖,進一步驗證該方法的可行性(圖3)。例如,在圖(A,B)中特征碎片m/z 157,其能量依耐性曲線中,葡萄糖與半乳糖組成的二糖異構(gòu)體(如乳糖vs蜜二糖)曲線差異顯著,歸因于C4-OH取向引發(fā)的1,?A?裂解偏好;在圖(C,D)中的特征碎片m/z 245,則可區(qū)分α/β糖苷鍵(如α-麥芽糖vs β-纖維二糖),該結(jié)果體現(xiàn)了不同結(jié)構(gòu)異構(gòu)體在EAD介導(dǎo)的能量依賴性上的解離差異。
在實際樣品中,該體系對果皮中黃酮鑒定結(jié)果,其符合一級鑒定精度的鑒定準(zhǔn)確率達(dá)49.2%(MS-DIAL僅37.5%),米酒、啤酒中二糖鑒定結(jié)果,其符合一級鑒定精度的鑒定準(zhǔn)確率分別為44.4%、50.0%,且通過標(biāo)準(zhǔn)添加實驗,確認(rèn)米酒中含laminarities(glcβ1-3glc)、soporose(glcβ1-2glc)等5種二糖異構(gòu)體。
總結(jié)
SCIEX ZenoTOF 7600系統(tǒng)的EAD技術(shù)通過電子活化解離機制,為天然產(chǎn)物同分異構(gòu)體產(chǎn)生高效解離路徑,結(jié)合多維質(zhì)譜相似性算法,為結(jié)構(gòu)異構(gòu)體的鑒定打開了新的路徑,突破了傳統(tǒng)質(zhì)譜的技術(shù)瓶頸。該方法為生物標(biāo)志物挖掘、天然產(chǎn)物和合成生物天然產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)等領(lǐng)域的異構(gòu)體分析提供了可靠技術(shù)方案。
SCIEX ZenoTOF液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)簡介
SCIEX ZenoTOF 7600系統(tǒng)是由SCIEX公司推出的最新的高端高分辨系列質(zhì)譜,不但包含傳統(tǒng)的CID碎裂模式,還包含EAD碎裂模式。EAD碎裂模式和CID碎裂模式因其碎裂原理不同,其兩者碎片表現(xiàn)出強互補性,為結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確鑒定提供了進一步完善的解決方案。
EAD碎裂模式的電子動能 (KE,Electron Kenetic Energy,EAD參數(shù)) 可調(diào),保證了EAD技術(shù)可以在一臺儀器上實現(xiàn)ECD (Electron Capture Dissociation)、HotECD (Hot Electron Capture Dissociation) 和EIEIO三種裂解,從而使其能真正做到大分子和小分子應(yīng)用的全兼容。EAD因其碎裂模式的獨特性被廣泛應(yīng)用到蛋白質(zhì)從頭測序、免疫太祖學(xué)、蛋白翻譯后修飾精準(zhǔn)定位、二硫鍵位點鑒定、脂質(zhì)分子結(jié)構(gòu)精準(zhǔn)注釋(sn-位置、雙鍵定位、雙鍵順反等)和天然產(chǎn)物(代謝物)同分異構(gòu)體的定性和定量,在分析化學(xué)的進步發(fā)揮了獨特作用。
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https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.5c05440
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為什么不能直接用熱電偶測量冷熱沖擊試驗箱內(nèi)移動籃筐的溫度?
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