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SCIEX ZenoTOF 7600能量分辨質(zhì)譜(ER-MS)實現(xiàn)天然產(chǎn)物異構(gòu)體鑒定

來源:SCIEX(愛博才思) 更新時間:2025-12-11 13:45:27 閱讀量:197
導(dǎo)讀:SCIEX ZenoTOF? 7600能量分辨質(zhì)譜(ER-MS)實現(xiàn)天然產(chǎn)物異構(gòu)體鑒定


結(jié)構(gòu)異構(gòu)體鑒定一直是化學(xué)、藥學(xué)和生化領(lǐng)域的分析難點。近期,中國科學(xué)院上海有機化學(xué)研究所郭寅龍研究員團隊在《Analytical Chemistry》上發(fā)表研究成果,報道基于ZenoTOF 7600系統(tǒng)的電子活化解離(EAD)技術(shù)開發(fā)了一種創(chuàng)新性方法,即借助EAD功能實現(xiàn)的能量分辨質(zhì)譜(ER-MS),實現(xiàn)結(jié)構(gòu)異構(gòu)體質(zhì)譜鑒定,成功鑒定了二糖和黃酮苷的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體,如:糖苷鍵異構(gòu)體、組成異構(gòu)體和構(gòu)象異構(gòu)體,鑒定準(zhǔn)確度高達(dá)93.8%。

該結(jié)果表明:基于EAD技術(shù)的ER-MS結(jié)合多維質(zhì)譜相似性算法大大提高了結(jié)構(gòu)異構(gòu)體鑒定的深度和準(zhǔn)確度,解決了傳統(tǒng)質(zhì)譜對結(jié)構(gòu)相似異構(gòu)體“鑒別盲區(qū)”的難題。


ZenoTOF電子活化解離(EAD)介紹


EAD是SCIEX高端的ZenoTOF質(zhì)譜上標(biāo)配的全新碎裂技術(shù),和碰撞誘導(dǎo)碎裂(CID)技術(shù)互為補充。EAD具備兩條協(xié)同作用的途徑:


其一是電子移除機制:

通過產(chǎn)生自由基陽離子,引發(fā)并傳遞超快自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng),從而生成診斷性碎片離子;


其二是電子激發(fā)機制:

將離子提升至激發(fā)態(tài),使其能夠發(fā)生競爭性裂解。


這兩種機制恰好彌補了傳統(tǒng)CID,基于鍵能斷裂和碎裂不充分的劣勢。因此,EAD技術(shù)已被用于小分子異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)區(qū)分,特別是在脂質(zhì)結(jié)構(gòu)精準(zhǔn)表征和側(cè)鏈結(jié)構(gòu)異構(gòu)體的分析上。在ZenoTOF儀器中,EAD的電子動能(KE)在0-50 eV區(qū)間可調(diào),獲得多重碎裂信息,通過碎片信息與信號強度等多維度表征異構(gòu)體結(jié)構(gòu)。



實驗設(shè)計與核心數(shù)據(jù)支撐


研究團隊先以15種二糖(覆蓋連接方式1-2/1-3/1-4/1-6、組成及α/β構(gòu)型異構(gòu)體)和103種黃酮(含黃酮醇、異黃酮等6類骨架,及O-糖/C-糖兩種糖苷類型)的標(biāo)準(zhǔn)品,基于SCIEX ZenoTOF 7600質(zhì)譜系統(tǒng),結(jié)合在線能量EAD采集模式開展實驗。



二糖異構(gòu)體鑒定

針對二糖母離子m/z 365([M+Na]?)的EAD-MS/MS分析(圖1)顯示,EAD生成碎片m/z 259可作為1-4/1-6糖苷鍵二糖特征碎片離子,如:麥芽糖(maltose)、異麥芽糖(isomaltose)均能檢測到m/z 259峰,而1-2/1-3糖苷鍵二糖(如曲二糖kojibiose、黑曲霉二糖nigerose)無此峰;蔗糖(glcα1-2fru)和松二糖(glcα1-3fru)則分別產(chǎn)生特征性斷環(huán)碎片m/z 261和m/z 275。上述信息能夠?qū)崿F(xiàn)不同鏈接方式二糖的精準(zhǔn)區(qū)分。


圖1. 二糖異構(gòu)體[M+Na]?(m/z 365)的

正離子模式EAD-MS/MS譜圖。

各譜圖對應(yīng)的二糖為:(A)曲二糖,(B)黑曲霉二糖,(C)麥芽糖,(D)異麥芽糖,(E)蔗糖,(F)松二糖,(G)麥芽酮糖,及(H)帕拉金糖;以及(I)曲二糖和(J)黑曲霉二糖。



黃酮苷異構(gòu)體鑒定

對芹菜素O-葡萄糖苷m/z 433([M+H]?)的分析(圖2)表明,在8 eV KE下,芹菜素4'-O-葡萄糖苷可檢測到m/z 397([M+H]-2H?O)和m/z 295(0,2X?-H?O),而芹菜素7-O-葡萄糖苷并不產(chǎn)生任何高m/z的碎片離子;在KE 15 eV時,芹菜素5-O-葡萄糖苷則出現(xiàn)m/z 325(1,4X?-H?O)和m/z 359(3,5X?)特征碎片離子。


圖2. 芹菜素O-葡萄糖苷異構(gòu)體[M+H]?(m/z 433)的

正離子EAD-MS/MS譜圖。

(A)-(C)譜圖對應(yīng)的異構(gòu)體分別為:(A)芹菜素-7-O-葡萄糖苷,(B)芹菜素-4′-O-葡萄糖苷,(C)芹菜素-5-O-葡萄糖苷(電子動能均為15 eV);(D)為電子動能8 eV條件下的譜圖。


能量分辨質(zhì)譜(ER-MS)與算法驗證EAD區(qū)分同異構(gòu)體功能


研究通過能量分辨質(zhì)譜(ER-MS)構(gòu)建碎片離子強度-不同KE曲線圖,進一步驗證該方法的可行性(圖3)。例如,在圖(A,B)中特征碎片m/z 157,其能量依耐性曲線中,葡萄糖與半乳糖組成的二糖異構(gòu)體(如乳糖vs蜜二糖)曲線差異顯著,歸因于C4-OH取向引發(fā)的1,?A?裂解偏好;在圖(C,D)中的特征碎片m/z 245,則可區(qū)分α/β糖苷鍵(如α-麥芽糖vs β-纖維二糖),該結(jié)果體現(xiàn)了不同結(jié)構(gòu)異構(gòu)體在EAD介導(dǎo)的能量依賴性上的解離差異。


圖3. 不同二糖及黃酮苷異構(gòu)體的診斷離子的能量依賴性碎片曲線。

(A,B)m/z 157:在(A)中對應(yīng)乳糖(黑色)、纖維二糖(紅色)和麥芽糖(藍(lán)色);在(B)中對應(yīng)蜜二糖(黑色)、異麥芽糖(藍(lán)色)和龍膽二糖(紅色)。

(C,D)m/z 245:在(C)中對應(yīng)乳糖(黑色)、纖維二糖(紅色)和麥芽糖(藍(lán)色);在(D)中對應(yīng)蜜二糖(黑色)、異麥芽糖(藍(lán)色)和龍膽二糖(紅色)。

(E)m/z 303及(F)m/z 465:槲皮素3-O-新橙皮糖苷(黑色)、槲皮素3-O-蕓香糖苷(紅色)和槲皮素3-O-刺槐二糖苷(藍(lán)色)。


在實際樣品中,該體系對果皮中黃酮鑒定結(jié)果,其符合一級鑒定精度的鑒定準(zhǔn)確率達(dá)49.2%(MS-DIAL僅37.5%),米酒、啤酒中二糖鑒定結(jié)果,其符合一級鑒定精度的鑒定準(zhǔn)確率分別為44.4%、50.0%,且通過標(biāo)準(zhǔn)添加實驗,確認(rèn)米酒中含laminarities(glcβ1-3glc)、soporose(glcβ1-2glc)等5種二糖異構(gòu)體。


總結(jié)


SCIEX ZenoTOF 7600系統(tǒng)的EAD技術(shù)通過電子活化解離機制,為天然產(chǎn)物同分異構(gòu)體產(chǎn)生高效解離路徑,結(jié)合多維質(zhì)譜相似性算法,為結(jié)構(gòu)異構(gòu)體的鑒定打開了新的路徑,突破了傳統(tǒng)質(zhì)譜的技術(shù)瓶頸。該方法為生物標(biāo)志物挖掘、天然產(chǎn)物和合成生物天然產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)等領(lǐng)域的異構(gòu)體分析提供了可靠技術(shù)方案。


SCIEX ZenoTOF液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)簡介


SCIEX ZenoTOF 7600系統(tǒng)是由SCIEX公司推出的最新的高端高分辨系列質(zhì)譜,不但包含傳統(tǒng)的CID碎裂模式,還包含EAD碎裂模式。EAD碎裂模式和CID碎裂模式因其碎裂原理不同,其兩者碎片表現(xiàn)出強互補性,為結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確鑒定提供了進一步完善的解決方案。


EAD碎裂模式的電子動能 (KE,Electron Kenetic Energy,EAD參數(shù)) 可調(diào),保證了EAD技術(shù)可以在一臺儀器上實現(xiàn)ECD (Electron Capture Dissociation)、HotECD (Hot Electron Capture Dissociation) 和EIEIO三種裂解,從而使其能真正做到大分子和小分子應(yīng)用的全兼容。EAD因其碎裂模式的獨特性被廣泛應(yīng)用到蛋白質(zhì)從頭測序、免疫太祖學(xué)、蛋白翻譯后修飾精準(zhǔn)定位、二硫鍵位點鑒定、脂質(zhì)分子結(jié)構(gòu)精準(zhǔn)注釋(sn-位置、雙鍵定位、雙鍵順反等)和天然產(chǎn)物(代謝物)同分異構(gòu)體的定性和定量,在分析化學(xué)的進步發(fā)揮了獨特作用。


原文下載鏈接

https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.5c05440


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