寡核苷酸藥物（ Oligonucleotide Drugs，又名小核酸藥物）由于其直接作用于疾病的遺傳物質（DNA/RNA）靶點發(fā)揮治療作用，提供了更高的疾病靶向成藥性，具有高特異性和長藥效的優(yōu)勢，且合成方便、 臨床前研發(fā)周期短、不良反應可控。被稱為繼抗體藥物后的第三代創(chuàng)新藥物，在重大疾病治療中展現(xiàn)出巨大潛力。

圖1. 從遺傳信息傳遞到創(chuàng)新藥物

寡核苷酸藥物分為小干擾RNA(small interfering RNA, siRNA)、反義寡核苷酸(antisense oligonucleotide, ASO ）、微小RNA(microRNA, miRNA)、核酸適配體(Aptamer)等。目前，寡核苷酸藥物主要包括ASO和siRNA，二者主要作用于細胞質的mRNA，通過堿基互補識別和抑制靶mRNA，實現(xiàn)對蛋白表達的調控，達到治療疾病的目的。

表1.  常見的小核酸藥物

小核酸藥物為諸多棘手病癥提供了全新解決思路，包括罕見病、遺傳病、慢性?。ㄈ绺哐?、NASH）以及“不可成藥靶點”（如RNA剪接異常）。全球約7000種罕見病中，僅5%有有效治療手段，因此小核酸藥物（如ASO、siRNA）已成為研發(fā)熱點。

圖2. 2016-2025全球小核酸藥物市場規(guī)模（數(shù)據(jù)來源：弗若斯特沙利文）

寡核苷酸藥物的制備，目前多采用化學合成方法。工藝流程包括 ：1）靶序列篩選；2）寡核苷酸固相合成； 3）切割脫保護； 4）寡核苷酸純化； 5）濃縮(超濾)換液；6）凍干/制劑等步驟。

圖3. 寡核苷酸藥物生產(chǎn)流程

目前多采用亞磷酰胺固相合成法合成寡核苷酸。亞磷酰胺固相合成主要分為以下四步：

每次經(jīng)過以下四個步驟就可以在固相載體上添加一個序列，完整的合成周期是將一個核苷酸殘基添加到在固相載體上的不斷延長的寡核苷酸鏈上，理論上可以通過重復循環(huán)該步驟從3’端向5’端無限添加序列。

圖4. 固相合成寡核苷酸步驟

寡核苷酸合成，不僅受核酸單體品質、合成用的固定相載體、試劑質量、合成工藝參數(shù)、合成環(huán)境的影響，而且受合成設備影響。納微科技為滿足客戶合成需求，開發(fā)了寡核苷酸固相合成載體，各項性能指標接近進口水平；賽譜儀器基于現(xiàn)有專利技術，結合市場需求研發(fā)了寡核苷酸合成儀，各項性能指標可滿足客戶需求。

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寡核苷酸固相合成載體

核酸固相合成載體是寡核苷酸（小核酸藥物）化學合成中的關鍵材料，用于固定初始核苷酸，為后續(xù)復雜的鏈接反應提供穩(wěn)定的基礎，確保每一個核苷酸都能準確無誤地連接在一起，逐步構建起具有特定序列和功能的寡核苷酸。

NMOligo是納微科技基于多年的PS-DVB聚合物合成技術以及表面改性方法制備而成的高性能固相合成載體填料。該填料采用了納微科技獨有的制孔技術，具有比較均一的孔徑和粒徑分布以及優(yōu)化的交聯(lián)聚苯乙烯結構，可以實現(xiàn)高純度、高收率和高載量的寡核苷酸合成，降低固相合成成本。

圖5. NMOligo 固相合成載體顯微鏡圖

產(chǎn)品優(yōu)勢

• 高負載能力

• 卓越的批次穩(wěn)定性

• 多樣化的客戶定制

表2. NMOligo 固相合成載體參數(shù)表

注：NMOligo可以通過完全衍生化的方式加載到客戶要求的各種規(guī)格

合成案例：NMOligo-Unylinker350合成20mer DNA

固相載體的性能是合成過程的起跑線，極大影響著合成產(chǎn)物的收率和純度。納微科技固相合成載體性能優(yōu)異，測試某進口N品牌固相載體與納微科技固相載體同時合成短鏈DNA，且實驗條件不變的情況下，通過對比寡核苷酸粗產(chǎn)品純度、收率，結果顯示納微科技固相載體可達到進口水平。

圖6. NMOligo-Unylinker350 (紫色線)與進口品牌（黑色線）在實驗室規(guī)模上合成20merDNA的HPLC對比圖

表3. 實驗室規(guī)模NMOligo-Unylinker350合成20mer DNA結果對比

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寡核苷酸合成儀

TrueSynt^TM 核酸合成系統(tǒng)首款產(chǎn)品-STS0100核酸合成儀由賽譜儀器研發(fā)，是一套實驗室級別的、全自動的亞磷酰胺法寡核苷酸合成儀。采用高精度柱塞泵驅動，精確控制反應速度和接觸時間，精心設計的流路可顯著降低單體及試劑用量，保證了低成本、高效益、高質量的合成結果。該設備可應用于siRNA、miRNA、 ASO、Aptamer等寡核苷酸的合成，合成范圍為50μmol-9mmol 。

圖7. TrueSynt^TM 寡核苷酸合成儀

產(chǎn)品特點

• 精準控制，保證高合成效率；

• 兼容多種修飾核苷酸，滿足探針、引物、siRNA等不同應用需求；

• 可控合成規(guī)模，滿足研發(fā)及生產(chǎn)需求；

• 智能軟件控制合成全流程，減少人工干預和污染風險；

• 精確控制試劑用量，降低合成成本；

• 合成工藝簡單明了，易于線性放大；

• 提供專業(yè)的技術支持和售后服務，軟件終身免費升級服務。

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寡核苷酸純化填料

納微科技基于微球研發(fā)與藥物下游純化領域多年深耕，推出寡核苷酸純化解決方案：通常優(yōu)先選擇陰離子交換層析，當面臨挑戰(zhàn)性情況，可以保留DMT從而在反相層析或疏水層析上進行分離，優(yōu)選填料主要包括NanoQ-30L, NanoQ-15L, UniPS 10-300, UniPS 30-300, UniSil 30-120 C18, UniSil 10-120 C18。

表4. 寡核苷酸純化填料

純化案例一：NanoQ-15L離子交換層析純化寡核苷酸

圖8. NanoQ-15L用于20mer寡核苷酸純化

純化結果

在20 mer寡核苷酸的純化中，采用納微科技NanoQ-15L進行規(guī)模純化，粗品HPLC分析顯示主峰純度僅82.49%，主要雜質為N-1短鏈（12.7%）及DMT保護基殘留（4.8%）。經(jīng)優(yōu)化線性洗脫，純化后主峰純度顯著提升至97.45%，關鍵雜質控制達到：N-1<1.5%、DMT<0.3%。工藝得率約80%（按A260定量），符合cGMP要求的>70%標準。

純化案例二：UniPS 10-300聚合物反相層析純化寡核苷酸

圖9. UniPS 10-300用于寡核苷酸純化

純化結果

結果顯示，在25個堿基寡核苷酸純化中，采用納微科技UniPS 10-300反相層析純化，一步純化即可將純度由82.5%提升到98.9%，滿足質量要求。

純化案例三：UniSil 10-120 C18 硅膠反相層析純化寡核苷酸

圖10. UniSil 10-120 C18用于寡核苷酸純化

純化結果

結果顯示UniSil 10-120 C18純化寡核苷酸，一步純化最終純度從82.0%提高至96%以上，同時收率達75%。滿足其質量要求 。

• 寬應用范圍：獨立螺桿直驅雙柱塞泵，可覆蓋5μm至亞2μm全多孔及核殼應用；

• 樣品盤溫控：支持2mL樣品盤及96孔板，保證生物樣品在進樣過程的穩(wěn)定性；

• 簡化手動流程：全自動一鍵排空，簡化繁瑣手動操作，可實現(xiàn)無人值守的遠程控制；

• 智能溶劑管理：實時監(jiān)控流動相余量，并進行低液位報警；

• 人機交互設計：大尺寸觸摸屏與色譜工作站同步，實現(xiàn)遠程交換；

• 合規(guī)化工作站：基于數(shù)據(jù)庫架構，支持單機/網(wǎng)絡版部署，符合FDA 21 CFR Part 11、SDA GXP等合規(guī)性要求。

關于納微科技

蘇州納微科技股份有限公司（ 688690.SH）是一家專門從事高精度、高性能和高質量微球材料研發(fā)和生產(chǎn)的國家高新技術企業(yè)，是全球能提供多品種多規(guī)格微球產(chǎn)品的公司之一。

公司致力于建設全球領先的納米微球精準制備和應用平臺，產(chǎn)品涵蓋硅膠正相、反相、HILIC、手性填料、固相萃取、聚合物反相、離子交換、疏水層析、親和層析（Protein A、金屬螯合、苯硼酸）、復合模式、凝膠滲透色譜及特殊功能填料；提供色譜柱、磁珠、標準顆粒、分析檢測、分離純化實驗技能培訓及分離純化整體解決方案。

了解更多信息，敬請訪問 www.nanomicro.com。

關于

浙江福立分析儀器有限公司成立于1998年，是一家專注于色譜質譜研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務的高新技術企業(yè)，是國家重點扶持的專精特新“小巨人”企業(yè)，也是國產(chǎn)色譜儀器領軍企業(yè)，公司擁有現(xiàn)代化的生產(chǎn)基地和省級企業(yè)研究院，致力于為客戶提供高效、精準、可靠的分析儀器和解決方案。

公司聚焦色譜近三十年，從色譜零部件到整機，全產(chǎn)業(yè)鏈的色譜研發(fā)布局，承擔并順利完成了科技部國家重大科學儀器專項，突破色譜關鍵技術，引領國產(chǎn)色譜技術發(fā)展邁入新的篇章。

2023年6月，蘇州納微科技股份有限公司（股票代碼：SH 688690）入股，攜手打造集色譜填料、分析儀器及整體解決方案于一體的色譜質譜創(chuàng)新平臺，雙方戰(zhàn)略合作邁入全新階段，開啟色譜技術發(fā)展新征程。

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