全部

• 2023-06-05 11:52發(fā)布了行業(yè)資訊

  展會邀請|锘海誠邀您參加第七屆細(xì)胞生物產(chǎn)業(yè)大會

  433人看過

• 2023-04-19 14:07發(fā)布了行業(yè)資訊

  新聞速遞 | 锘海春季巡講系列講座及實操培訓(xùn)

  283人看過

• 2023-03-29 10:49發(fā)布了行業(yè)資訊

  锘海入選上海市2023年第一批科技型中小企業(yè)榜單

  334人看過

• 2023-03-23 11:24發(fā)布了行業(yè)資訊

  锘海LS18平鋪光片顯微鏡簡介

  390人看過

• 2023-03-22 11:13發(fā)布了行業(yè)資訊

  全新生物組織透明化試劑盒(水性)&生物組織膨脹試劑盒

  432人看過

• 2023-03-22 11:10發(fā)布了行業(yè)資訊

  如何實現(xiàn)納米藥物的靶向遞送？

  527人看過

• 2023-02-17 13:16發(fā)布了行業(yè)資訊

  核酸脂質(zhì)納米?？破铡猂NA-LNP包封率測定

  715人看過

• 2023-02-17 13:16發(fā)布了問答

  核酸脂質(zhì)納米?？破铡猂NA-LNP包封率測定

  自新冠mRNA疫苗成功上市以來，脂質(zhì)納米粒（Lipid nanoparticle，LNP）已成為mRNA、siRNA、pDNA等核酸的優(yōu)先遞送載體，廣泛用于mRNA疫苗及治愈。微流控技術(shù)是目前制備核酸脂質(zhì)納米粒常用的技術(shù)，包封率則是評價其制備效果的重要指標(biāo)之一，下面就為大家介紹使用RiboGreen測定RNA-LNP包封率的方法。1 RiboGreen檢測RNA-LNP包封率的原理1.1RNA-LNP包封率（Encapsulationefficiency，EE）：包裹在脂質(zhì)納米粒內(nèi)部的RNA占RNA-LNP溶液中全部RNA的比例。1.2 RiboGreen檢測RNA原理：RiboGreen是一種用于定量檢測溶液中RNA含量的超敏感熒光核酸染料，當(dāng)RiboGreen熒光染料處于溶液狀態(tài)時，幾乎沒有熒光活性，與RNA結(jié)合時，其熒光活性將增加1000倍。RiboGreen-RNA復(fù)合物的熒光激發(fā)波長約500nm，發(fā)射波長約525nm，通過酶標(biāo)儀，建立已知濃度RNA的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得到樣品RNA濃度。1.3 RiboGreen檢測包封率原理：分別測定LNP-RNA溶液中游離RNA濃度，以及用Triton-100破壞LNP結(jié)構(gòu)后，溶液中全部的RNA濃度，兩者的差值就是包封在LNP內(nèi)部的RNA濃度。通過以下公式即可計算得到包封率結(jié)果。圖1核酸脂質(zhì)納米顆粒的示意圖2操作要點2.1制備Buffer1X TE Buffer：使用試劑盒中20X TE Buffer稀釋。2% Triton-TE buffer：使用Triton-100與1X TE buffer以體積比1：50配制。2.2添加RNA-LNP樣品至全黑96孔板根據(jù)制備時RNA的量，可以大致計算需要稀釋的倍數(shù)。例如，已知 mRNA的原始質(zhì)量或濃度，使用銘汰MicroFlow S進(jìn)行RNA-LNP合成，根據(jù)稀釋、超濾等處理后的最終體積，即可估算大致總RNA濃度。同時，假設(shè)90%的包封率，即可估算游離RNA濃度。然后根據(jù)標(biāo)曲的濃度計算需要稀釋的大致倍數(shù)。這樣我們就可以使用1X TE buffer將RNA-LNP稀釋適合倍數(shù)以檢測LNP外游離RNA濃度，使用2% Triton-TE buffer將RNA-LNP稀釋適合倍數(shù)以檢測總RNA濃度，建議每項檢測至少兩個不同稀釋倍數(shù)。然后，分別移取100 μL稀釋后的樣本，添加到全黑96孔板。2.3標(biāo)樣添加一般直接使用試劑盒中100 μg/mL的RNA標(biāo)樣，也可以使用與待測樣本類似的RNA標(biāo)樣來建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。可以先用1X TE buffer將原始標(biāo)樣稀釋到工作濃度4 μg/mL，然后參考表1的體積比，配制為一定濃度梯度的標(biāo)樣。分別移取各濃度的標(biāo)樣100 μL，添加到全黑96孔板中。注：*最終RNA濃度考慮了步驟2.4添加RiboGreen染料后的濃度當(dāng)RNA-LNP樣品及特定濃度的標(biāo)樣添加到96孔板后，需要在37℃下避光孵育10 min，以使RNA-LNP在Triton buffer中充分裂解。2.4 RiboGreen染料添加把試劑盒中RiboGreen試劑，使用1X TE Buffer按照1：100的比例稀釋，例如需要2000 μL RiboGreen染料，可將20 μL的RiboGreen試劑添加到1980 μL的1X TE Buffer中。然后各取100 μL加入到已經(jīng)加有樣品的96孔板中，37℃下避光孵育5min。圖2 樣品添加2.5酶標(biāo)儀檢測打開酶標(biāo)儀，選擇熒光模式，激發(fā)光485nm，發(fā)射光528nm，讀數(shù)，記錄數(shù)據(jù)。 2.6數(shù)據(jù)處理及分析    將每個樣本測得的熒光值減去空白熒光值，即可得到實際熒光值。根據(jù)標(biāo)樣的熒光值和濃度梯度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。把樣品熒光值代入回歸方程，乘以稀釋倍數(shù)，即可得到樣本的RNA濃度。根據(jù)1.3中包封率公式計算得到包封率結(jié)果。圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線3 小結(jié)準(zhǔn)確的包封率測定對于評價RNA-LNP的包封效果至關(guān)重要，影響著后續(xù)細(xì)胞實驗和動物實驗的開展。RNA-LNP包封率測定一般使用商業(yè)化的試劑盒，雖然操作環(huán)節(jié)較多，但只要細(xì)心規(guī)范，操作起來也并不難，相信大家可以得到準(zhǔn)確的實驗結(jié)果。納米藥物制備系統(tǒng)應(yīng)用范圍：

  1182人看過

• 2023-02-13 10:39發(fā)布了行業(yè)資訊

  組織透明化與點擊化學(xué)相結(jié)合的新技術(shù)CATCH

  785人看過

• 2023-02-13 10:39發(fā)布了問答

  組織透明化與點擊化學(xué)相結(jié)合的新技術(shù)CATCH

  在完整組織中觀察藥物靶點相互作用的工具一直是理解體內(nèi)藥物作用的主要障礙。2022年發(fā)表在Cell上的題為“Insitu identification of cellular drug targets in mammalian tissue”的文章有突破性進(jìn)展，作者通過修改和整合點擊化學(xué)（CC）與組織透明化技術(shù)，開發(fā)了一種方法——透明輔助組織點擊化學(xué)（Clearing-Assisted Tissue Click Chemistry，簡稱CATCH），允許小分子藥物-靶點相互作用在亞細(xì)胞分辨率下進(jìn)行標(biāo)記和成像(圖1A)。該技術(shù)為組織中小分子的體內(nèi)相互作用可視化提供了一個有價值的平臺，并能夠識別藥物在哺乳動物組織中的分布和參與。圖1 CATCH技術(shù)的方法開發(fā)1.組織透明化極大地改善了哺乳動物組織中的化學(xué)標(biāo)記作者對小鼠給藥脂肪酸酰胺水解酶（FAAH）緩聚劑PF7845-yne（末端含炔基），通過CuAAC點擊化學(xué)反應(yīng)，炔基與熒光標(biāo)簽的疊氮化物反應(yīng)形成疊氮炔環(huán)，進(jìn)而引入熒光基團(tuán)。初始試圖直接成像藥物結(jié)合的FAAH，但由于信噪比較差，未能顯示細(xì)胞靶標(biāo)。因而猜測腦組織構(gòu)成復(fù)雜，其致密的脂膜可能影響點擊化學(xué)反應(yīng)，作者測試了基于聚丙烯酰胺的水凝膠組織透明化方法CLARITY，結(jié)果發(fā)現(xiàn)去除脂質(zhì)后顯著提升了成像的信噪比（圖1C、D）。作者同時也驗證了其他的透明化方法也得到了類似的效果（圖1E）。此外，作者還比較了不同的點擊化學(xué)配體（TBTA，BTTAA，BTTP）及不同的銅離子濃度下的反應(yīng)效率，發(fā)現(xiàn)使用BTTP，150 μM硫酸銅條件下可獲得高信噪比且穩(wěn)定的成像（圖1B）。2.CATCH實現(xiàn)了藥物-靶點接觸的全腦、亞細(xì)胞原位成像為了驗證CATCH應(yīng)用的廣泛性，作者對三種小分子藥物FAAH緩聚劑PF7845-yne、BIA10-2474-yne和單胺氧化酶（MAO）緩聚劑Pargyline-yne進(jìn)行CATCH成像，結(jié)果清晰展示了藥物-靶點在小鼠不同腦區(qū)的分布（圖2A-E）。另外，還可以展示這些分子主要靶向的細(xì)胞類型，F(xiàn)AAH緩聚劑主要靶向新皮質(zhì)和海馬中的神經(jīng)元樣結(jié)構(gòu);而Pargyline-yne主要結(jié)合全腦的血管樣結(jié)構(gòu)，少量下丘腦和腦橋內(nèi)稀疏但特異標(biāo)記的神經(jīng)元樣結(jié)構(gòu)（圖2F）。圖2 全腦藥物結(jié)合的可視化2.CATCH可與熒光標(biāo)記復(fù)合以識別靶細(xì)胞類型作者在給藥處理后進(jìn)行NeuN免疫染色，發(fā)現(xiàn)PF7845-yne和BIA10-2474-yne主要與新皮質(zhì)、海馬和杏仁核中的NeuN+神經(jīng)元共定位。而在腦橋中發(fā)現(xiàn)了一小群神經(jīng)元樣結(jié)構(gòu)，它們是NeuN陰性但被 pargyline-yne 靶向的（圖3A-D）。隨后作者洗脫NeuN并重新孵育TH抗體驗證該推測，確定了NeuN-，Pargyline-yne陽性的細(xì)胞的確是LC-NA神經(jīng)元（圖3E）。由此證明，CATCH可以和熒光標(biāo)記結(jié)合揭示了藥物結(jié)合的細(xì)胞類型，并且可以區(qū)分神經(jīng)元不同部分的藥物靶標(biāo)參與位點，可以支持多輪的藥物靶向細(xì)胞類型鑒定。圖3 藥物靶點的細(xì)胞型鑒定锘海團(tuán)隊自主研發(fā)的組織透明化試劑盒可以高效地進(jìn)行脫色脫脂，采用親水性溫和環(huán)境的設(shè)計，在組織熒光保護(hù)、樣本形態(tài)維持、降低自發(fā)熒光等方面表現(xiàn)出比較優(yōu)異的性能，適用范圍廣、操作簡便、速度快、效率高。

  313人看過

• 2023-02-07 16:17發(fā)布了行業(yè)資訊

  锘海成功入選“2022年上海創(chuàng)新型中小企業(yè)”

  294人看過

• 2023-02-07 16:17發(fā)布了問答

  锘海成功入選“2022年上海創(chuàng)新型中小企業(yè)”

  上海市經(jīng)濟(jì)和信息化委員會開展了2022年創(chuàng)新型中小企業(yè)評定工作，已于1月16日公示通過審核的企業(yè)名單，锘海生物科學(xué)儀器（上海）有限公司成功入選“2022年上海市松江區(qū)創(chuàng)新型中小企業(yè)”什么是創(chuàng)新型中小企業(yè)「上海市創(chuàng)新型中小企業(yè)」是根據(jù)《上海市優(yōu)質(zhì)中小企業(yè)梯度培育管理實施細(xì)則》（滬經(jīng)信規(guī)范〔2022〕8號），經(jīng)過嚴(yán)格的專家評審和綜合評估后，符合認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)并予以認(rèn)定、公示的一項重要資質(zhì)。該榜單的入選標(biāo)志著锘海進(jìn)入優(yōu)質(zhì)中小企業(yè)培育庫，展現(xiàn)出锘海具有較高專業(yè)化水平和較強(qiáng)創(chuàng)新能力和發(fā)展?jié)摿?，同時表明锘海主營業(yè)務(wù)和發(fā)展符合國家產(chǎn)業(yè)政策及相關(guān)要求。此次入選上海市創(chuàng)新型中小企業(yè)，是政府與行業(yè)對锘海技術(shù)水平、研發(fā)能力、業(yè)務(wù)發(fā)展及綜合實力等方面的認(rèn)可和肯定。锘海也將緊跟科技和產(chǎn)業(yè)發(fā)展前沿，持續(xù)加大研發(fā)投入，加快技術(shù)突破，為行業(yè)發(fā)展提供源源不斷的創(chuàng)新動能，一如既往的為用戶提供更加專業(yè)、便利的產(chǎn)品和服務(wù)。關(guān)于锘海锘海生命科學(xué)成立于2017年，2020年獲得國家高新技術(shù)企業(yè)資質(zhì)。總部位于上海漕河涇開發(fā)區(qū)松江園區(qū)內(nèi)，在北京，廣州，成都，沈陽等十余座城市設(shè)有辦事處。作為“生命科學(xué)的服務(wù)者，醫(yī)療創(chuàng)新的推動者“，致力于打造完整的生命科學(xué)儀器研發(fā)、制造、服務(wù)體系。我們積極推進(jìn)科學(xué)技術(shù)轉(zhuǎn)化，在大組織3D熒光成像中，處于光片顯微鏡行業(yè)的先進(jìn)地位，自主研發(fā)的LS18平鋪光片顯微鏡解決了傳統(tǒng)光片顯微鏡中空間分辨率、光學(xué)層析能力和成像視野大小之間的矛盾，滿足高通量、準(zhǔn)確定位的熒光成像分析需求。此外，锘海還有納米藥物制備系統(tǒng)及納米藥物制備、檢測服務(wù)—從篩選到制劑表征全線過程，適用于臨床前研究和符合GMP的臨床生產(chǎn)，目前，锘海已服務(wù)國內(nèi)多家知名藥企并具備成功申報臨床的案例。

  276人看過

• 2023-01-31 15:29發(fā)布了行業(yè)資訊

  凍干技術(shù)在mRNA疫苗領(lǐng)域的突破性應(yīng)用

  426人看過

• 2023-01-28 09:50發(fā)布了行業(yè)資訊

  光聲科普 | 光聲信號原理及常見顯影劑

  373人看過

• 2022-12-22 16:47發(fā)布了行業(yè)資訊

  锘海LS18平鋪光片顯微鏡榮獲2022年首屆“金燧獎”中國光電儀器品牌榜銀獎

  252人看過

• 2022-12-15 16:24發(fā)布了行業(yè)資訊

  锘海誠摯邀請您參加第十三屆華人生物學(xué)家協(xié)會2022雙年會

  289人看過

加載更多