單細(xì)胞樣本制備老失??？

流式實(shí)驗(yàn)得到數(shù)據(jù)不可靠？

流式圖不知道怎么分析？

「全線賦能“沃”的實(shí)驗(yàn)」之實(shí)驗(yàn)方法實(shí)戰(zhàn)教程

直播第四期將帶來(lái)

《流式細(xì)胞術(shù)》

從單細(xì)胞制備到流式細(xì)胞術(shù)，理論+實(shí)例

帶你快速get到其中的難點(diǎn)要點(diǎn)

直播時(shí)間

5月31日（周二）19：00

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主題：?jiǎn)渭?xì)胞懸液樣本的分類及制備

• 單細(xì)胞懸液樣本類型

• 制備注意事項(xiàng)

• 制備方法實(shí)例

講師：馮啟崢

瑞沃德高級(jí)產(chǎn)品方案經(jīng)理，專注動(dòng)物傳染病學(xué)和細(xì)胞與分子免疫學(xué)研究多年，在動(dòng)物疫苗研發(fā)、CRISPR的原核細(xì)胞應(yīng)用方面有著較為豐富的經(jīng)驗(yàn)，致力于為客戶提供專業(yè)的細(xì)胞與分子生物研究方案。

主題：流式細(xì)胞術(shù)的原理及應(yīng)用

• 儀器基本結(jié)構(gòu)解析

• 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)操講解

• 技術(shù)應(yīng)用介紹

講師：方晟

昆明理工大學(xué)碩士研究生，已發(fā)表SCI論文4篇，在載體構(gòu)建、藥物活性篩選、腫瘤模型構(gòu)建、單細(xì)胞數(shù)據(jù)分析等方面有著豐富的經(jīng)驗(yàn)，研究方向主要是抗腫瘤藥物的抗 癌機(jī)理和單細(xì)胞測(cè)序分析。

上期直播間互動(dòng)問(wèn)題

這次我們?nèi)繛樾』锇榻獯?/p>

1、做外周神經(jīng)損傷的小鼠能活多久？如何飼養(yǎng)？

外周神經(jīng)損傷一般不會(huì)造成動(dòng)物的死亡，但一些特殊情況會(huì)影響動(dòng)物的存活率，比如為了避免在手術(shù)部位引起不良組織炎癥，我們應(yīng)該盡量縮短手術(shù)時(shí)間，如果手術(shù)部位意外出血，要用棉簽適當(dāng)按壓。如果出血沒有停止，就不要對(duì)這只動(dòng)物進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。術(shù)后動(dòng)物應(yīng)該放進(jìn)干凈的鼠籠并分籠飼養(yǎng)，注意保溫。

2、脊髓損傷造模后，動(dòng)物出現(xiàn)功能障礙不能自主排尿該如何護(hù)理？

每日按壓排尿3次，以防泌尿系統(tǒng)感染；連續(xù)3天，每天兩次向腹腔注射相同劑量青霉素預(yù)防感染。

3、使用纖維蛋白膠修復(fù)的是外周神經(jīng)損傷的哪個(gè)類型或者說(shuō)等級(jí)呢?

纖維蛋白膠可以應(yīng)用于橫斷的神經(jīng)，幫助受傷神經(jīng)的近端和遠(yuǎn)端殘端緊密對(duì)齊，是神經(jīng)縫合技術(shù)的一種替代方式。

4、坐骨神經(jīng)擠壓的結(jié)扎力度如何把控？

有一些文獻(xiàn)上會(huì)使用帶有力值的工具進(jìn)行擠壓神經(jīng)，如果我們沒有這類的工具，可以使用血管夾對(duì)神經(jīng)進(jìn)行夾持，保證力度的一致性。

5、有專門評(píng)估大小鼠前肢抓取能力的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)嗎?

針對(duì)于前肢的抓取能力，爪抓力測(cè)試儀可以測(cè)動(dòng)物前肢，后肢的抓力，另外如果是判斷動(dòng)物前肢抓取食物的精細(xì)運(yùn)動(dòng)，可以用樓梯式抓取測(cè)試儀來(lái)進(jìn)行。

6、目前好像2D步態(tài)分析居多，慢慢也看到了3D步態(tài)分析，兩者相比各自有什么優(yōu)缺點(diǎn)呢?

步態(tài)沒有2D、3D的區(qū)別，國(guó)內(nèi)使用較多的步態(tài)有2種：第一種是依靠壓力感應(yīng)可以生成動(dòng)物腳掌受力的情況，判斷動(dòng)物的損傷情況；第二種是通過(guò)視頻記錄動(dòng)物足部在運(yùn)動(dòng)時(shí)的軌跡，通過(guò)足部的運(yùn)動(dòng)過(guò)程計(jì)算生成動(dòng)物活動(dòng)過(guò)程中四肢運(yùn)動(dòng)的各項(xiàng)指標(biāo)來(lái)判斷動(dòng)物的損傷情況。這兩種方法從2個(gè)不同的方面完善了步態(tài)的分析數(shù)據(jù)，但實(shí)際上無(wú)法互相替代。一般來(lái)說(shuō)大鼠步態(tài)用第一種壓力感應(yīng)測(cè)試的會(huì)多一些，小鼠步態(tài)則用視頻記錄的多一些。所謂的3D步態(tài)是通過(guò)從側(cè)面拍攝動(dòng)物運(yùn)動(dòng)時(shí)的腿部活動(dòng)，對(duì)動(dòng)物的步態(tài)運(yùn)動(dòng)進(jìn)行更為細(xì)致的評(píng)估，與傳統(tǒng)步態(tài)記錄的是2個(gè)維度的信息，無(wú)法進(jìn)行替代。由于需要識(shí)別動(dòng)物腿部的關(guān)節(jié)，目前無(wú)法與足底步態(tài)很好的融合結(jié)果。

7、這種轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)是可以大小鼠通用的嗎？如何檢測(cè)到掉落？

轉(zhuǎn)棒大小鼠主機(jī)通用，但是跑道是需要替換的。設(shè)備通過(guò)紅外感應(yīng)，電子感應(yīng)等自動(dòng)檢測(cè)動(dòng)物掉落情況，停止計(jì)時(shí)。

8、外周神經(jīng)損傷會(huì)導(dǎo)致疼痛致敏，在模型檢測(cè)中可以用什么疼痛檢測(cè)方法呢？

主要看測(cè)痛的部位，機(jī)械痛一般可以用vonfery針或電子測(cè)痛儀來(lái)進(jìn)行測(cè)試，針對(duì)不同部位也有面部疼痛測(cè)試儀（三叉神經(jīng)），壓感測(cè)痛儀（背部，較大的關(guān)節(jié)），鉗式測(cè)痛儀（整個(gè)腳，細(xì)小的關(guān)節(jié)），熱痛一般測(cè)試動(dòng)物足底或尾部，使用紅外測(cè)痛儀或者甩尾測(cè)痛儀。

9、怎么手動(dòng)排尿？

按摩膀胱。

10、每天需要按摩多久？

術(shù)后需輕輕按摩擠壓膀胱進(jìn)行排尿，每次按摩到排空，每天至少三次。

11、不規(guī)則梯和錯(cuò)步分析儀是不是指一個(gè)東西啊？

是一種類型的儀器，不同廠家的名稱，測(cè)試方法，輸出的指標(biāo)會(huì)略有不同。

12、轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)一直做不出差異怎么辦？

可能有2種原因：

①測(cè)試時(shí)動(dòng)物已經(jīng)恢復(fù)到與正常鼠一致的水平，所以做不出差異。

解決方法：將轉(zhuǎn)棒測(cè)試時(shí)間提前。

②測(cè)試難度過(guò)于簡(jiǎn)單或者過(guò)于困難，導(dǎo)致差異很小，從而統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果無(wú)差異。

解決方法：調(diào)整實(shí)驗(yàn)難度，直到可以做出差異的結(jié)果。新型轉(zhuǎn)棒儀除了原先的勻速和勻加速以外還增加了階段加速等測(cè)試方法，實(shí)驗(yàn)難度有了更大的調(diào)整空間。

13、兩爪及四爪攀爬實(shí)驗(yàn)有合適的實(shí)驗(yàn)設(shè)備嗎？

不規(guī)則梯結(jié)合自制實(shí)驗(yàn)設(shè)備。

14、脊髓損傷后有哪些評(píng)估手段？

脊髓損傷后可通過(guò)行為學(xué)對(duì)運(yùn)動(dòng)及感覺進(jìn)行評(píng)估。BBB法：一般用于觀察大鼠后肢行走及肢體活動(dòng)，評(píng)分分為三個(gè)部分，0-7分評(píng)判動(dòng)物后肢關(guān)節(jié)活動(dòng)情況，8-13分評(píng)判后肢步態(tài)及協(xié)調(diào)功能，14-21分評(píng)判運(yùn)動(dòng)中爪的精細(xì)活動(dòng)；BMS評(píng)分是在BBB評(píng)分基礎(chǔ)上針對(duì)小鼠的運(yùn)動(dòng)特點(diǎn)做出了完善和修改，是專門用于小鼠后肢功能的評(píng)分方法。其他運(yùn)動(dòng)相關(guān)行為學(xué)：步態(tài)分析系統(tǒng)用于評(píng)估步態(tài)動(dòng)力學(xué)、協(xié)調(diào)性分析、平衡性分析等；轉(zhuǎn)棒儀可評(píng)估動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性；行走障礙分析儀可分析簡(jiǎn)單步態(tài)及運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性等。感覺功能相關(guān)行為學(xué)：Vonfrey測(cè)痛針用于評(píng)估對(duì)觸碰的敏感性；冷熱盤用來(lái)測(cè)試動(dòng)物對(duì)冷熱刺激的敏感度。

15、平衡木也可以做小鼠嗎 ？

有小鼠平衡木可以進(jìn)行小鼠實(shí)驗(yàn)。

16、請(qǐng)問(wèn)外周神經(jīng)損傷后有哪些手段可以評(píng)價(jià)感覺功能的損失？

感覺功能相關(guān)行為學(xué)：機(jī)械痛一般可以用vonfery針或電子測(cè)痛儀來(lái)進(jìn)行測(cè)試，評(píng)估對(duì)觸碰的敏感性，針對(duì)不同部位也有面部疼痛測(cè)試儀（三叉神經(jīng)），壓感測(cè)痛儀（背部，較大的關(guān)節(jié)），鉗式測(cè)痛儀（整個(gè)腳，細(xì)小的關(guān)節(jié)），熱痛一般測(cè)試動(dòng)物足底或尾部，使用紅外測(cè)痛儀（用于量化對(duì)小鼠和大鼠后爪輻射或紅外熱刺激的熱閾值的方法）或者甩尾測(cè)痛儀（一種基于對(duì)嚙齒動(dòng)物中熱刺激回避反應(yīng)的潛伏期測(cè)量的疼痛實(shí)驗(yàn)）。

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為什么要構(gòu)建局灶性腦缺血模型？

世衛(wèi)組織《2020全 球衛(wèi)生估計(jì)》統(tǒng)計(jì)顯示，2019年10大死亡原因中有7個(gè)是非傳染性疾病。其中，中風(fēng)是第二大死亡原因，占總死亡人數(shù)的11%。中風(fēng)，又稱“腦卒中”、“腦血管意外”，是一種急性腦血管疾病，包括缺血性和出血性卒中，其中缺血性腦血管病占60-70%。

缺血性腦血管病嚴(yán)重危害人類的健康，建立一種與人腦梗塞類似的動(dòng)物模型使之適合溶栓治療研究具有重要的研究意義和實(shí)用價(jià)值。卒中又名大腦中動(dòng)脈栓塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO），是一種局灶性腦缺血模型，也是目前應(yīng)用最廣泛的腦缺血模型。其發(fā)病機(jī)理與人類缺血性腦卒中表現(xiàn)相似，對(duì)于制作模擬人腦缺血模型對(duì)腦缺血發(fā)病機(jī)制及藥物篩選有重要意義。

如何構(gòu)建局灶性腦缺血模型？

構(gòu)建局灶性腦缺血模型方式有很多種，栓塞法、線栓法及光化學(xué)方法等。小沃今天就教你如何運(yùn)用 線栓法 建立一個(gè)完美的局灶性腦缺血模型。

認(rèn)識(shí)線栓法

Koizumi于日本卒中會(huì)議(1985)首次報(bào)道了可逆性MCAO模型，解決了大鼠局灶腦缺血再灌流損傷研究的難題。分離暴露頸部血管，從ECA或CCA分叉處插入4～0尼龍線，進(jìn)入ICA，阻斷MCA起始端及其所有側(cè)支血液供應(yīng)，導(dǎo)致MCA區(qū)局灶缺血。一定時(shí)間后輕輕提拉插線，有阻力時(shí)提示絲線頭端已達(dá)ECA或CCA切口處，制做成再灌流模型，不需再次切開頸部。

線栓法分類

目前該模型具有代表性的方法有兩類，即Longa法川和Koizumi法。前者是把尼龍線頭端燒成球形，后者在尼龍線遠(yuǎn)端徐一層硅酮彈性體（長(zhǎng)度5 mm，直徑0.25 mm），便于插入ICA并脹緊血管。Laing對(duì)上述兩種方法做了對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)兩者腦缺血中心區(qū)細(xì)胞壞死和腦血流改變相差顯著，Koizumi法閉塞效果更好。

線栓法優(yōu)點(diǎn)

線栓法的優(yōu)點(diǎn)在于模型制作不用開顱，MCAO效果也比較理想，是目前普遍使用的能觀察再灌流損傷的局灶性腦缺血模型。

線栓法實(shí)操

詳細(xì)解說(shuō)用線栓法建立局灶性腦缺血模型的每一個(gè)流程，長(zhǎng)按圖片還可直接保存流程圖。圖文演示，讓你的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)不再困難。

動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)可以客觀性、科學(xué)性評(píng)價(jià)動(dòng)物的溝通行為、社交行為、學(xué)習(xí)行為和探索行為等，它可以幫助科研人員探索認(rèn)知、情緒和運(yùn)動(dòng)等復(fù)雜的生命現(xiàn)象，將其實(shí)驗(yàn)結(jié)果類比和推演到人，研究其行為信息的生理和病理意義。但在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，總會(huì)遇到一些大大小小的問(wèn)題

• 動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)種類很多，不知道用哪種研究手段？

• 做曠場(chǎng)、高架十字迷宮等實(shí)驗(yàn)時(shí)，不清楚有哪些注意事項(xiàng)？

• 在做行為學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析時(shí)，哪些數(shù)據(jù)有用、如何處理數(shù)據(jù)來(lái)支撐自己的研究？

“沃”的實(shí)驗(yàn)

全網(wǎng)最全的生命科學(xué)研究線上學(xué)習(xí)平臺(tái)

第四期內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行為評(píng)估

帶你get動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究方法

「“沃”的實(shí)驗(yàn)」——全網(wǎng)最全的生命科學(xué)研究線上學(xué)習(xí)平臺(tái)第四期，為大家分享實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行為評(píng)估方法，囊括學(xué)習(xí)記憶檢測(cè)、運(yùn)動(dòng)檢測(cè)、抑郁檢測(cè)、焦慮檢測(cè)、疼痛檢測(cè)和行為學(xué)分析方法，3位老師線上為你詳解超20種動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，助你輕松完成動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，從而提高研究效率與質(zhì)量。

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?學(xué)習(xí)記憶檢測(cè)

• 獎(jiǎng)賞相關(guān)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

• 自發(fā)活動(dòng)相關(guān)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

• 懲罰相關(guān)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

?運(yùn)動(dòng)檢測(cè)

• 損傷評(píng)估行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

• 耐力評(píng)估行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

• 協(xié)調(diào)評(píng)估行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

? 抑郁檢測(cè)

• 習(xí)得性無(wú)助實(shí)驗(yàn)介紹

• 懸尾實(shí)驗(yàn)介紹

• 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)介紹

• 糖水偏好實(shí)驗(yàn)介紹

• 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)介紹

• 新奇物體探索實(shí)驗(yàn)介紹

• 新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)介紹

?焦慮檢測(cè)

• 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)介紹

• O迷宮實(shí)驗(yàn)介紹

• 黑白箱實(shí)驗(yàn)介紹

• 飲水焦慮實(shí)驗(yàn)介紹

• 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)介紹

• 新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)介紹

? 疼痛檢測(cè)

• 疼痛分類及神經(jīng)通路

• 機(jī)械刺痛檢測(cè)方法

• 熱刺痛檢測(cè)方法

• 自發(fā)疼痛檢測(cè)方法

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以西班牙Panlab公司的行為學(xué)視頻記錄分析軟件Smart v3.0為例，介紹Smart v3.0軟件分析曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)視頻的操作過(guò)程，以及演示Smart v3.0軟件的特色功能

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福利，福利！限時(shí)免費(fèi) | UC Davis實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ZX主任及藥理系教授在線分享微循環(huán)研究成果和腦缺血模型制作經(jīng)驗(yàn)。

非常榮幸能邀請(qǐng)到Y(jié)i-Je (Jay) Chen和Madeline Nieves-Cintrón在線上與瑞沃德的VIP客戶進(jìn)行微循環(huán)研究學(xué)術(shù)交流。

本次課程，我們預(yù)留少量免費(fèi)名額，作為福利贈(zèng)送給儀器網(wǎng)的用戶，如果你正想了解【嚙齒類動(dòng)物性別、年齡與腦缺血相關(guān)關(guān)系】；【缺血性卒中炎癥損傷】；【正常與缺血狀態(tài)的血管功能調(diào)節(jié)機(jī)制】……那么千萬(wàn)不要錯(cuò)過(guò)這次交流會(huì)！機(jī)會(huì)難得，先到先得，趕快來(lái)鎖定席位吧！。

直播內(nèi)容

BBB與中風(fēng)相關(guān)研究成果分享--微循環(huán)研究學(xué)術(shù)交流會(huì) （中英文雙語(yǔ)交流會(huì)）

直播時(shí)間

2020/8/21上午10:00-11:30

直播形式

ZOOM在線學(xué)術(shù)報(bào)告+交流分享

主講嘉賓： Yi-Je (Jay) Chen  PhD

Assistant Professor 
Director of the Animal Models Core in the Cardiovascular Research Institute, 
UC Davis Medical School
加利福尼亞大學(xué)戴維斯分校 UC Davis 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)ZX主任

報(bào)告主題

Blood-Brain Barrier (BBB) Endothelial Cells：Pathophysiology in Ischemic Stroke

研究方向Research Interests
He studies Ion channels in BBB endothelial cells and their contributions to edema formation and inflammation in the early stages of ischemic stroke.

主要成果Research Output：

Article 22; Citations 437; h-Index 10; the highest Scopus citations up to 78.

2011年至今總計(jì)發(fā)表20+SCI論文，引用高達(dá)437次，h-Index高達(dá)10，有的Scopus citations達(dá)到78

主講嘉賓： Madeline Nieves-Cintron  PhD
Assistant Professor In Residence, UC Davis Medical School

加利福尼亞大學(xué)戴維斯分校 UC Davis 藥學(xué)系 副教授

報(bào)告主題：AKAP5 complex in hyperglycemia modulation of vascular function

研究方向Research Interests：She studies vascular smooth muscle ion channels, emphasizing ionic control of intracellular calcium and smooth muscle contractility, for their responses to health-relevant conditions such as diabetes, hypertension, and environmental pollutants. 

主要成果Research Output：

Article 30; Citations 1404; h-Index 17; the highest Scopus citations up to 283.
總計(jì)發(fā)表文獻(xiàn)30; 引用高1404; h-Index 高達(dá)17; 有的Scopus citations達(dá)到 283.

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