本文由 上海盈公生物技術有限公司 整理匯編

2018-09-27 10:00 652閱讀次數(shù)

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• 免疫組化Elivison二步法

  1、石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）。2、取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’。（注：不是所有的抗體都需要微波修復的，視具體情況而定）3、每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’。4、除去PBS液，每張切片加1滴相應的**抗體（相應稀釋倍數(shù)），室溫下孵育2小時。5、PBS沖洗3×5’。除去PBS液，每張切片加1滴聚合物增強劑，室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3’。6、除去PBS液，每張切片加1滴酶標抗鼠/兔聚合物，室溫下孵育30分鐘。PBS沖洗3×5’。7、除去PBS液，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液（二氨基聯(lián)苯胺），顯微鏡下觀察5分鐘。8、蘇木素復染，0.1%HCl分化，自來水沖洗，藍化，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固，晾干后觀察。[詳細]

  2018-09-27 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 免疫組化問題解答

  免疫組化問題解答[詳細]

  2013-12-21 00:00

  安裝說明

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• 免疫組化基礎知識

  免疫組織化學的概念：免疫組化是利用抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學。免疫組化實驗所用的抗體有哪些？免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體，應用細胞融合雜交瘤技術免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后，從動物血中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。免疫組化實驗所用的組織和細胞標本有哪些？實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本Z常用、Z基本的方法，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察；還能長期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進行抗原修復，是免疫組化中的組織標本制作方法。石蠟切片為什么要做抗原修復？有哪些方法？石蠟切片標本均用甲醛固定，使得細胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇，同時蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進行IHC染色時，需要先進行抗原修復或暴露，即將固定時分子之間所形成的交聯(lián)破壞，而恢復抗原的原有空間形態(tài)。常用的抗原修法有微波修復法，高壓加熱法，酶消化法，水煮加熱法等，常用的修復液是pH6.0的0.01mol/L的檸檬酸鹽緩沖液。免疫組化常用的染色方法有哪些？根據(jù)標記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標法，親和組織化學法，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗體）在細胞或亞細胞水平的定位，其中生物素抗生物素染色法Z常用?？贵w交叉反應的原因：指抗體除與其相應的抗原發(fā)生特異性反應外還與其它抗原發(fā)生反應。產(chǎn)生的原因有以下幾個方面：1.抗原特異性指用于免疫動物的抗原性物質(zhì)中含有多種抗原分子，它引起動物產(chǎn)生針對多種抗原分子特異性的相應抗體。任何其它物質(zhì)只要含有一種或多種與上述物質(zhì)相同的抗原分子，必將與上述多特異性的抗血清發(fā)生交叉反應。2.共同決定簇即兩種抗原分子中都含有相同的抗原決定簇。3.決定簇相似，兩種不同的抗原決定簇，如果結構大致相同，由于空間構象關系，某一決定簇的相應抗體可以與大致相同的決定簇發(fā)生交叉反應。當然抗原一抗體之間構象相似時的結合力小于吻合時的結合力。多抗和單抗特性比較：1.均一性。一種單抗中，每個抗體的化學結構和氨基酸順序都相同，只有一種Ig亞類。即單抗是一種純度很高的均一抗體。而從不同動物，不同時期所得到的多抗，各有不同的化學組成。多抗是多種種類和亞類Ig的混合物。2.穩(wěn)定性。單抗的穩(wěn)定較差，對PH變化敏感，對熱不穩(wěn)定，提純過程中易變性，而多抗的穩(wěn)定性則較好。3.特異性。單抗是單一地針對抗原的某一決定簇，所以用它進行血清學反應時，特異性強，敏感性高，一般不發(fā)生交叉反應。而多抗能與抗原上的多種抗原決定簇結合，所以特異性較差，較易引起交叉反應。4.重復性。單抗的重復性好，而多抗每批都不一樣。5.沉淀反應。多抗由于與抗原多價結合容易形成網(wǎng)絡樣沉淀，而單抗只與抗原結合產(chǎn)生二聚體，不能直接形成抗原抗體沉淀物?？贵w的保存：抗體儲存容器應由不吸附蛋白質(zhì)的材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如儲存的抗體中蛋白濃度很低（10-100mg/L），就應另加隔離蛋白以減少容器對抗體蛋白的吸附，隔離蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。絕大多數(shù)已稀釋的抗體應存在4℃-8℃條件下，以免凍融對抗體蛋白產(chǎn)生有害效應?？贵w原液和已分離的免疫球蛋白組分應保存于-20℃條件下，并避免反復凍融。冷凍的抗體溶液應置于室溫中緩慢地解凍，應避免用高溫快速解凍。被細菌污染的抗體常會出現(xiàn)假陽性結果，應將污染的抗體溶液及其他試劑棄之。為防止細菌污染，可于抗體溶液中加入0.01%疊氮鈉?？贵w經(jīng)真空冷凍干燥后置-20℃以下可保存3-5年。保存稀釋后的單抗應加入0.1%疊氮鈉濃度。大多數(shù)稀釋抗體可進行冷凍保存，少數(shù)抗體可能會丟失抗原活性。大多數(shù)單抗，只要蛋白濃度適當，可在4℃下保存數(shù)月。[詳細]

  2018-09-27 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 免疫組化技術總結

  資料轉(zhuǎn)自丁香園：文檔為免疫組化全園資料整理、經(jīng)驗和教訓總結、親身案例講述、難題集錦等等，多是原創(chuàng)經(jīng)驗和心得體會，難得的免疫組化技術文檔。[詳細]

  2018-10-20 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• CD90免疫組化試劑盒

  CD90免疫組化試劑盒該試劑盒以HRP標記的鏈霉親和素復合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）為基礎，可用于檢測細胞、組織內(nèi)的特異性CD90抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的CD90一抗與相應靶抗原結合后，用生物化二抗與一抗特異性結合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復合物，顯微鏡下觀察成像。試劑盒所含試劑：試劑A通透液：0.1%Triton-X10010mL（選用）試劑B封閉緩沖液（封閉用）20mL試劑C（原裝進口分裝）已稀釋的即用型CD90一抗（2.5ml）試劑D（原裝進口分裝）生物素化羊抗兔IgG1支（濃度1.5mg/mL，稀釋比為1:300~1:500）50μL+抗體稀釋液20ml試劑EHRP-SA復合物1支（濃度1μM，稀釋比1:50~1:200）100μL試劑FDAB顯色液5ml用戶自備試劑：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羥基氨基甲烷1.21g氯化鈉7.6g加蒸餾水800mL，濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%體積比）2．抗原修復液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復液）10mMpH6.0檸檬酸緩沖液檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL，濃鹽酸調(diào)pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修復液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水700mL，用10mMNaOH調(diào)pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.緩沖甘油封固劑10mL4.Tween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實驗步驟（建議方案）：石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片：將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr；2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修復：根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫度達到98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗滌（2×2min）（具體修法見附1）*注：有些抗原勿需修復，直接進入第5步封閉。5.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育30min；6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2hr或4℃；7.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；8.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30min；10.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；11.封閉：滴加試劑Tween20，37℃濕盒孵育封閉20min；12.加HRP-SA：滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20nM），37℃濕盒中孵育30min；13.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min），TBS洗滌（2×5min）；14.顯色：應用DAB溶液（試劑F）顯色；15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明；16.封片：待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；17.觀察成像：顯微鏡下觀察成像。注意事項：1.修復后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導致結晶或抗原封閉。2.緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復使用。3.若試劑為微量濃縮液，用前應低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。4.封片前一定要換用TBS充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween20，否則會影響結果觀察。5.如須復染細胞核，則在封片前復染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封片。附1：抗原修法常用抗原修復液：檸檬酸緩沖液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修復液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修復法切片脫蠟水化處理，TBS沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復法微波盒中加入抗原修復液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或繼續(xù)微波10~15min，取出微波盒冷卻至室溫后，自來水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異，須自行調(diào)整。三、直接高壓抗原修復法取修復液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。四、隔水式高壓抗原修復法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰，微波盒中加入修復液于微波爐中加熱至沸騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣后計時4~8min即可關閉熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。[詳細]

  2018-10-31 10:00

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• 免疫組化試劑盒說明書

  免疫組化試劑盒以HRP標記的鏈霉親和素復合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）為基礎，可用于檢測血液,細胞、組織內(nèi)的特異性Dazl抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的Dazl一抗與相應靶抗原結合后，用生物化二抗與一抗特異性結合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復合物，顯微鏡下觀察成像。用戶自備試劑：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羥基氨基甲烷1.21g氯化鈉7.6g加蒸餾水800mL，濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%體積比）2．抗原修復液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復液）10mMpH6.0檸檬酸緩沖液檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL，濃鹽酸調(diào)pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修復液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g加蒸餾水700mL，用10mMNaOH調(diào)pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.緩沖甘油封固劑10mL4.Tween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實驗步驟（建議方案）：石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片：將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr；2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修復：根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫度達到98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗滌（2×2min）（具體修法見附1）*注：有些抗原勿需修復，直接進入第5步封閉。5.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育30min；6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2hr或4℃過一夜；7.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；8.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30min；10.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；11.封閉：滴加試劑Tween20，37℃濕盒孵育封閉20min；12.加HRP-SA：滴加用試劑C稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20nM），37℃濕盒中孵育30min；13.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min），TBS洗滌（2×5min）；14.顯色：應用DAB溶液（試劑F）顯色；15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明；16.封片：待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；17.觀察成像：顯微鏡下觀察成像。注意事項：1.修復后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導致結晶或抗原封閉。2.緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復使用。3.若試劑為微量濃縮液，用前應低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。4.封片前一定要換用TBS充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween20，否則會影響結果觀察。5.如須復染細胞核，則在封片前復染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封片。附1：抗原修法常用抗原修復液：檸檬酸緩沖液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修復液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修復法切片脫蠟水化處理，TBS沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復法微波盒中加入抗原修復液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或繼續(xù)微波10~15min，取出微波盒冷卻至室溫后，自來水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異，須自行調(diào)整。三、直接高壓抗原修復法取修復液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。四、隔水式高壓抗原修復法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰，微波盒中加入修復液于微波爐中加熱至沸騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣后計時4~8min即可關閉熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。[詳細]

  2018-11-18 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 免疫組化染色試劑盒說明書

  免疫組化染色試劑盒說明書[詳細]

  2014-06-23 00:00

  課件

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• 小鼠 Thy1 免疫組化試劑盒

  小鼠ELISA試劑盒該試劑盒以HRP標記的鏈霉親和素復合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）為基礎，可用于檢測細胞、組織內(nèi)的特異性Thy1抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的Thy1一抗與相應靶抗原結合后，用生物化二抗與一抗特異性結合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復合物，顯微鏡下觀察成像。試劑盒所含試劑：試劑A通透液：0.1%Triton-X10010mL（選用）試劑B封閉緩沖液（封閉用）20mL試劑C（原裝進口分裝）已稀釋的即用型Thy1一抗（2.5ml）試劑D（原裝進口分裝）生物素化羊抗兔IgG1支（濃度1.5mg/mL，稀釋比為1:300~1:500）50μL+抗體稀釋液20ml試劑EHRP-SA復合物1支（濃度1μM，稀釋比1:50~1:200）100μL試劑FDAB顯色液5ml用戶自備試劑：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羥基氨基甲烷1.21g氯化鈉7.6g加蒸餾水800mL，濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%體積比）2．抗原修復液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復液）10mMpH6.0檸檬酸緩沖液檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL，濃鹽酸調(diào)pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修復液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水700mL，用10mMNaOH調(diào)pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.緩沖甘油封固劑10mL4.Tween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實驗步驟（建議方案）：石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片：將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr；2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修復：根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫度達到98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗滌（2×2min）（具體修法見附1）*注：有些抗原勿需修復，直接進入第5步封閉。5.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育30min；6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2hr或4℃7.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；8.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30min；10.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；11.封閉：滴加試劑Tween20，37℃濕盒孵育封閉20min；12.加HRP-SA：滴加用試劑C稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20nM），37℃濕盒中孵育30min；13.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min），TBS洗滌（2×5min）；14.顯色：應用DAB溶液（試劑F）顯色；15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明；16.封片：待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；17.觀察成像：顯微鏡下觀察成像。小鼠ELISA試劑盒注意事項：1.修復后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導致結晶或抗原封閉。2.緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復使用。3.若試劑為微量濃縮液，用前應低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。4.封片前一定要換用TBS充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween20，否則會影響結果觀察。5.如須復染細胞核，則在封片前復染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封片。附11：抗原修法常用抗原修復液：檸檬酸緩沖液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修復液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修復法切片脫蠟水化處理，TBS沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復法微波盒中加入抗原修復液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或繼續(xù)微波10~15min，取出微波盒冷卻至室溫后，自來水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異，須自行調(diào)整。三、直接高壓抗原修復法取修復液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。四、隔水式高壓抗原修復法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰，微波盒中加入修復液于微波爐中加熱至沸騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣后計時4~8min即可關閉熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。[詳細]

  2018-09-27 10:00

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• 人IL-29 免疫組化試劑盒

  該試劑盒以HRP標記的鏈霉親和素復合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）為基礎，可用于檢測細胞、組織內(nèi)的特異性IL-29抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的IL-29一抗與相應靶抗原結合后，用生物化二抗與一抗特異性結合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復合物，顯微鏡下觀察成像。注：本產(chǎn)品僅供實驗室科學研究。本步驟是根據(jù)我們長期實驗得出的有效步驟，不一定是Zyou方法，請客戶根據(jù)具體科研實驗情況進行調(diào)整和優(yōu)化，并歡迎客戶和我們探討。[詳細]

  2018-10-01 10:00

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• 免疫組化試劑盒使用說明書

  上海哈靈生物科技有限公司免疫組化試劑盒使用說明書保存方法：2-8℃保存。有效期：一年。生產(chǎn)日期：見封口。工作原理：辣根過氧化物酶（HRP）的分子量（40000），它不會遮蓋抗原的結合部位，具有較高活性及特異性，可溶性佳，生成的產(chǎn)物不擴散，可作用于多種底物，產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強，易進入細胞內(nèi)。DAB在H2O2存在的情況下，可以作為HRP的電子供體，產(chǎn)生褐色的不溶顆粒，可作為顯色的試劑。試劑盒內(nèi)容：名稱規(guī)格10.01mol/LpH6.0枸櫞酸鹽緩沖液0.5L2PBS緩沖液1L3廣譜二抗1.5mL430%H2O25mL5DAB顯色液I0.3mL6DAB顯色液II0.3mL自備試劑：無水乙醇、蘇木素。操作步驟：1.60℃常規(guī)脫蠟至水后，將石蠟切片先后浸入二甲苯Ⅰ，二甲苯Ⅱ各10min。然后逐級降濃度酒精入水，每次3-5min。①無水酒精3－5min②90%酒精3－5min③85%酒精3－5min④75%酒精3－5min⑤PBS洗滌3次每次5min2.熱修復抗原：將切片置于0.01mol/LpH6.0枸櫞鈉緩沖液，微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5-10min后，反復1-2次，置于室溫自然冷卻。0.01mol/LpH7.0左右的PBS洗滌3次，每次5min3.消除內(nèi)源性過氧化物酶：用3%H2O2室溫孵育5-10min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次，每次5min；4.滴加一抗：滴加適當稀釋的一抗到切片上，37℃孵育一定時間或者4℃隔天，pH7.4的PBS洗滌3次，每次5min。（一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度、背景有直接關系。一般來說，陽性染色強度不夠時，可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時間；背景過高時，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時間。）5.加入廣譜二抗，37℃孵育一段時間，取出后PBS洗滌3次，每次5min。6.DAB顯色：取DAB顯色液I及II各50微升加至入1mL的水中，配成DAB工作液，滴加到切片上，室溫顯色，鏡下控制反應時間。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。蒸餾水充分洗滌以終止反應。7..觀察顯色后自來水沖，蘇木精復染1-2min，，自來水沖10min，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，干燥，分析拍照[詳細]

  2024-10-08 14:03

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• 四步法消除SYBR Green Ⅰ實時定量RT

  四步法消除SYBR Green Ⅰ實時定量RT[詳細]

  2016-04-26 00:00

  專利

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• 恒遠小貼士：動脈血氣分析三步法

  動脈血氣分析三步法簡單地講，三步法包括：**步，病人是否存在酸中毒或堿中毒？第二步，酸/堿中毒是呼吸性還是代謝性？第三步，如果是呼吸性酸/堿中毒，是單純呼吸因素，還是存在代謝成分？具體方法如下：**步，看PH值，正常值為7.4±0.05。PH≤7.35為酸中毒，PH≥7.45為堿中毒。第二步，看PH值和PCO2改變的方向。同向改變（PCO2增加，PH值也升高，反之亦然）為代謝性，異向改變?yōu)楹粑浴５谌?，如果是呼吸性的，再看PH值和PCO2改變的比例。正常PCO2為40±5mmHg，單純呼吸性酸/堿中毒，PCO2每改變10mmHg，則PH值反方向改變0.08±0.02。例如，如果PCO2是30mmHg（降低10mmHg），那么PH值應該是7.48（增加0.08）；如果PCO2為60mmHg（增加20mmHg），則PH值應為7.24（降低2×0.08）。如果不符合這一比例，表明還存在第二種因素，即代謝因素。這時，第三步就應比較理論上的PH值與實際PH值，如果實際PH值低于理論PH值，說明同時存在有代謝性酸中毒，反之，如果實際PH值高于理論PH值，則說明同時有代謝性堿中毒。需注意，根據(jù)公式推算出來的PH值，可以有±0.02的波動。實例例1：病人的PH值為7.58，PCO2為20mmHg，PO2為110mmHg。分析：**步,PH值大于7.45，提示為堿中毒。第二步，PCO2和PH值異向改變，表明為呼吸性。第三步，PCO2降低20mmHg，PH值應升高2×0.08（±0.02）即為7.56±0.02，與實際PH值相符，因此該病人為單純性呼吸性堿中毒。結論：此病人為單純性呼吸性堿中毒。例2：病人的PH值為7.16，PCO2為70mmHg，PO2為80mmHg。分析：動脈血氣分析三步法簡單地講，三步法包括：**步，病人是否存在酸中毒或堿中毒？第二步，酸/堿中毒是呼吸性還是代謝性？第三步，如果是呼吸性酸/堿中毒，是單純呼吸因素，還是存在代謝成分？具體方法如下：**步，看PH值，正常值為7.4±0.05。PH≤7.35為酸中毒，PH≥7.45為堿中毒。第二步，看PH值和PCO2改變的方向。同向改變（PCO2增加，PH值也升高，反之亦然）為代謝性，異向改變?yōu)楹粑?。第三步，如果是呼吸性的，再看PH值和PCO2改變的比例。正常PCO2為40±5mmHg，單純呼吸性酸/堿中毒，PCO2每改變10mmHg，則PH值反方向改變0.08±0.02。例如，如果PCO2是30mmHg（降低10mmHg），那么PH值應該是7.48（增加0.08）；如果PCO2為60mmHg（增加20mmHg），則PH值應為7.24（降低2×0.08）。如果不符合這一比例，表明還存在第二種因素，即代謝因素。這時，第三步就應比較理論上的PH值與實際PH值，如果實際PH值低于理論PH值，說明同時存在有代謝性酸中毒，反之，如果實際PH值高于理論PH值，則說明同時有代謝性堿中毒。需注意，根據(jù)公式推算出來的PH值，可以有±0.02的波動。實例例1：病人的PH值為7.58，PCO2為20mmHg，PO2為110mmHg。分析：**步,PH值大于7.45，提示為堿中毒。第二步，PCO2和PH值異向改變，表明為呼吸性。第三步，PCO2降低20mmHg，PH值應升高2×0.08（±0.02）即為7.56±0.02，與實際PH值相符，因此該病人為單純性呼吸性堿中毒。結論：此病人為單純性呼吸性堿中毒。例2：病人的PH值為7.16，PCO2為70mmHg，PO2為80mmHg。分析：**步，PH值小于7.35，提示為酸中毒。第二步，PCO2和PH值異向改變，表明為呼吸性。第三步，PCO2增加30mmHg，PH值應降低3×0.08（±0.02）即為7.16±0.02，而該病人的實際PH值恰好為7.16。結論：此病人為單純性呼吸性酸中毒。例3：病人的PH值為7.50，PCO2為50mmHg，PO2為100mmHg。分析：**步,PH值大于7.45，提示為堿中毒。第二步，PCO2和PH值同向改變，表明為代謝性。第三步，不用，因該病人不是呼吸性酸堿平衡失調(diào)。結論：此病人為代謝性堿中毒。**步，PH值小于7.35，提示為酸中毒。第二步，PCO2和PH值異向改變，表明為呼吸性。第三步，PCO2增加30mmHg，PH值應降低3×0.08（±0.02）即為7.16±0.02，而該病人的實際PH值恰好為7.16。結論：此病人為單純性呼吸性酸中毒。例3：病人的PH值為7.50，PCO2為50mmHg，PO2為100mmHg。分析：**步,PH值大于7.45，提示為堿中毒。第二步，PCO2和PH值同向改變，表明為代謝性。第三步，不用，因該病人不是呼吸性酸堿平衡失調(diào)。結論：此病人為代謝性堿中毒。上海恒遠生物科技有限公司主營產(chǎn)品/服務:ELISA試劑盒，免疫組化試劑盒，放免試劑盒，標準品，血清，抗體，培養(yǎng)基，細胞，生物試劑，實驗耗材等服務承諾：1.所購產(chǎn)品均質(zhì)量保證，有任何質(zhì)量方面的問題，一律免費包換！2.試劑盒方面全程提供技術指導，還有免費代測的務！3.本公司出售的任何產(chǎn)品均提供完善的售后服務，客戶有任何疑問，均是一個工作日，給出解決方案！歡迎聯(lián)系，聯(lián)系電話：021-60515410,18221290082！[詳細]

  2018-11-15 10:03

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• 小鼠IL-10 免疫組化試劑盒說明書

  小鼠IL-10免疫組化試劑盒說明書該試劑盒以HRP標記的鏈霉親和素復合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）為基礎，可用于檢測細胞、組織內(nèi)的特異性IL-10抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的IL-10一抗與相應靶抗原結合后，用生物化二抗與一抗特異性結合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復合物，顯微鏡下觀察成像。小鼠IL-10免疫組化試劑盒所含試劑：試劑A通透液：0.1%Triton-X10010mL（選用）試劑B封閉緩沖液（封閉用）20mL試劑C（原裝進口分裝）已稀釋的即用型IL-10一抗（2.5ml）試劑D（原裝進口分裝）生物素化羊抗兔IgG1支（濃度1.5mg/mL，稀釋比為1:300~1:500）50μL+抗體稀釋液20ml試劑EHRP-SA復合物1支（濃度1μM，稀釋比1:50~1:200）100μL試劑FDAB顯色液5ml用戶自備試劑：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羥基氨基甲烷1.21g氯化鈉7.6g加蒸餾水800mL，濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%體積比）2．抗原修復液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復液）10mMpH6.0檸檬酸緩沖液檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL，濃鹽酸調(diào)pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修復液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水700mL，用10mMNaOH調(diào)pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.緩沖甘油封固劑10mL4.Tween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實驗步驟（建議方案）：小鼠IL-10免疫組化試劑盒石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片：將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr；2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修復：根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫度達到98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗滌（2×2min）（具體修法見附1）*注：有些抗原勿需修復，直接進入第5步封閉。5.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育30min；6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2hr或4℃7.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；8.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30min；10.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；11.封閉：滴加試劑Tween20，37℃濕盒孵育封閉20min；12.加HRP-SA：滴加用試劑C稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20nM），37℃濕盒中孵育30min；13.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min），TBS洗滌（2×5min）；14.顯色：應用DAB溶液（試劑F）顯色；15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明；16.封片：待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；17.觀察成像：顯微鏡下觀察成像。注意事項：1.修復后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導致結晶或抗原封閉。2.緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復使用。3.若試劑為微量濃縮液，用前應低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。4.封片前一定要換用TBS充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween20，否則會影響結果觀察。5.如須復染細胞核，則在封片前復染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封片。附1：抗原修法常用抗原修復液：檸檬酸緩沖液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修復液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修復法切片脫蠟水化處理，TBS沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復法微波盒中加入抗原修復液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或繼續(xù)微波10~15min，取出微波盒冷卻至室溫后，自來水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異，須自行調(diào)整。三、小鼠IL-10免疫組化試劑盒直接高壓抗原修復法取修復液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。四、隔水式高壓抗原修復法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰，微波盒中加入修復液于微波爐中加熱至沸騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣后計時4~8min即可關閉熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。[詳細]

  2018-11-04 10:00

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• 免疫組化的方法和優(yōu)點

  上海恒遠生物科技有限公司專業(yè)供應各種屬elisa試劑盒，提供免費代測服務，保證實驗結果客觀真實性。我公司對試劑盒質(zhì)量1**%保證，若存在質(zhì)量問題，我們無條件包退換。若需要了解試劑盒的詳細信息，請來的咨詢：電話：021-60520498業(yè)務QQ:1005074258何經(jīng)理免疫組化的方法和優(yōu)點一、免疫組化技術的基本原理應用免疫學及組織化學原理，對組織切片或細胞標本中的某些化學成分進行原位的定性、定位或定量研究，這種技術稱為免疫組織化學技術或免疫細胞化學技術。眾所周知，抗體與抗原之間的結合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細胞中的某些化學物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實驗動物，制備特異性抗體，再用這種抗體（**抗體）作為抗原去免疫動物制備第二抗體，并用某種酶（常用辣根過氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結合，將抗原放大，由于抗體與抗原結合后形成的免疫復合物是無色的，因此，還必須借助于組織化學方法將抗原抗體反應部位顯示出來（常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒）。通過抗原抗體反應及呈色反應，顯示細胞或組織中的化學成分，在顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應產(chǎn)物，從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布、含量。組織或細胞中凡是能作抗原或半抗原的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應的特異性抗體進行檢測。二、免疫組織化學染色方法1、按標記物質(zhì)的種類，如熒光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶）、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、酶標法和免疫金銀法等。2、按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步、三步或多步法）;與直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多。3、按結合方式可分為抗原抗體結合，如過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法和親和連接，如卵白素-生物素-過氧化物酶復合物（ABC）法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結（SP）法等，其中SP法是Z常用的方法。三、幾種常用免疫組織化學方法的原理1、免疫熒光方法是Z早建立的免疫組織化學技術。它利用抗原抗體特異性結合的原理，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。由于免疫熒光技術特異性強、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗中應用比較廣。2、免疫酶標方法免疫酶標方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技術?；驹硎窍纫悦笜擞浀目贵w與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內(nèi)的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是目前Z常用的技術。本方法與免疫熒光技術相比的主要優(yōu)點是：定位準確，對比度好，染色標本可長期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標記方法，且隨著方法的不斷改進和創(chuàng)新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的當屬PAP法、ABC法、SP法等。3、免疫膠體金技術免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針，就能對組織或細胞內(nèi)的抗原進行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進行光鏡觀察。如應用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。四、免疫組化技術的優(yōu)點1、特異性強免疫學的基本原理決定了抗原與抗體之間的結合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細胞成分。只有當組織細胞中存在交叉抗原時才會出現(xiàn)交叉反應。2、敏感性高在應用免疫組化的起始階段，由于技術上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術，那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細胞中與抗原結合，這樣高敏感性的抗體抗原反應，使免疫組化方法越來越方便地應用于常規(guī)病理診斷工作。3、定位準確、形態(tài)與功能相結合該技術通過抗原抗體反應及呈色反應，可在組織和細胞中進行抗原的準確定位，因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察，這樣就可以進行形態(tài)與功能相結合的研究，對病理學研究的深入是十分有意義的。人集落刺激因子（CSF）ELISAKitHumancolony-stimulatingfactor,CSFELISAKit人激動異構酶/細胞分裂素MB（CKMB）ELISAKitHumancytokininMB,CKMBELISAKit人肌細胞生成素（MYOG）ELISAKitHumanmyogenin,MYOGELISAKit人γ干擾素誘導單核細胞因子（MIGF/CXCL9）ELISAKitHumanmonocyteinterferongammainducingfactor,MIGFELISAKit人干擾素誘導T細胞趨化因子（ITAC/CXCL11）ELISAKitHumanInterferoninducibleT-cellChemoattractant,I-TACELISAKit人白細胞分化抗原14（CDl4）ELISAKitHumanclusterOfdifferentiation,CDl4ELISAKit人肥大細胞類胰蛋白酶（MCT）ELISAKitHumanmastcelltryptase,MCTELISAKit人凋亡誘導因子（AIF）ELISAKitHumanapoptosisinducingfactor,AIFELISAKit人凋亡蛋白酶激活因子1（ICAD）ELISAKitHumanapoptosisproteaseactivatingfactor-1,ICADELISAKit人白細胞共同抗原（LCA/CD45）ELISAKitHumanleukocytecommonantigen,LCA/CD45ELISAKit人白細胞分化抗原4（CD4）ELISAKitHumanclusterOfdifferentiation,CD4ELISAKit小鼠正常T細胞表達和分泌因子（RANTES/CCL5）ELISAKitMouseregulatedonactivationinnormalT-cellexpressedandsecreted,RANTESELISAkit人信號轉(zhuǎn)導分子（Smad1）ELISAKitHumansignaltransduction-Smad1ELISAKit人信號轉(zhuǎn)導分子7（Smad7）ELISAKitHumansignaltransduction-Smad7ELISAKit[詳細]

  2018-11-16 10:02

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• α-SMA免疫組化ELISA試劑盒說明

  α-SMA免疫組化ELISA試劑盒說明[詳細]

  2024-09-29 06:59

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• 兔子說明書CD134 免疫組化試劑盒說明書

  兔子說明書CD134 免疫組化試劑盒說明書[詳細]

  2016-07-06 00:00

  安裝說明

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• 人PR免疫組化試劑盒實驗方法

  人PR免疫組化試劑盒實驗方法[詳細]

  2015-06-15 00:00

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• 即用型IL-1β免疫組化染色試劑盒

  www.biokanu.com即用型小鼠IL-1β免疫組化染色試劑盒產(chǎn)品編號：QD82108試劑的保存：短期于4℃保存，長期于-20℃保存。工作原理IL-1β，白介素1β。在免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應過程中起ZX作用。類風濕、結腸炎等病癥也和IL-1β的產(chǎn)生過多有關。IL-1α和IL-1β有25%的同源性。合成IL-1β的細胞很廣泛，包括單核細胞、巨噬細胞、星形細胞、NK細胞、角化細胞、內(nèi)皮細胞等。兩者合成時都是31KDa的前體，經(jīng)剪切后成為17.5KDa的成熟蛋白質(zhì)。IL-1β前體在細胞內(nèi)合成，并無生物學活性。被IL-1β轉(zhuǎn)化酶（ICE）剪切為成熟形態(tài)后排出到細胞外。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，分子量47000。同親和素一樣，對生物素分子有極高的親和力，是一般抗原抗體親和力的一百萬倍。親和素是一個堿性蛋白質(zhì)（IP=10），經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點接近中性，IP=6.0~6.5，對組織和細胞的非特異吸附很低，基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。根據(jù)研究，SP（StreptAvidin-BiotinComplex）大約可形成上百個左右的過氧化物酶和數(shù)十個左右的鏈霉親和素所構成的復合物。應用范圍適用于免疫組織化學方法以顯示待測抗原的分布，本試劑盒適用于常規(guī)石蠟包埋切片、冰凍切片，培養(yǎng)固定的細胞切片以及新鮮制備的血涂片、爬片等。試劑盒中內(nèi)容山羊血清封閉液：1ml(效價1：10，臨用前用TBS或PBS稀釋10倍)。用于組織切片的封閉。二抗：1ml（效價1：10，臨用前用抗體稀釋液稀釋10倍)。親和純化抗體，標記長臂生物素，生物素標記抗兔IgG。SP：1ml（效價1：10，臨用前用SP稀釋液稀釋10倍）。鏈酶親和素-過氧化物酶復合物。用戶自備試劑：粘片劑APES或Poly-L-Lysine。0.01MPBS，0.01M枸櫞酸鹽緩沖液。DAB顯色試劑盒。免疫組化染色程序的選擇：用戶需根據(jù)抗原/抗體的特點確定程序，多數(shù)情況下要先比較各程序染色結果。石蠟切片染色程序:載玻片防脫片劑處理:可選擇APES或Poly-Lysine。撈片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片緊密粘附。切片常規(guī)脫蠟至水。3%H2O21份+蒸餾水10份混合,室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。酶消化程序:滴加復合消化液5-10分鐘。蒸餾水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。熱修復抗原:將切片浸入0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（PH6.0）,電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5-10分鐘后，反復1-2次。冷卻后PBS（pH7.2-7.6）洗滌1-2次。滴加封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體,不洗。適當稀釋的一抗，37℃2小時左右或4℃夜。PBS（pH7.2-7.6）洗2分鐘×3次。（一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度、背景有直接關系。一般來說，陽性染色強度不夠時，可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時間；背景過高時，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時間。）加生物素化二抗,37℃30分鐘。PBS（pH7.2-7.6）洗2分鐘×3次。滴加試劑SP,37℃30分鐘。PBS（pH7.2-7.6）洗5分鐘×4次。DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒。取1ml蒸餾水,加試劑盒中A,B,C試劑各50ul,混勻后加至切片。室溫顯色,顯微鏡下觀察顯色反應，時間一般在5-30分鐘之間。達到合適著色強度時（陽性較強，背景較低），即可終止反應（用蒸餾水洗滌切片）。蘇木素輕度復染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。注意事項：如果染色背景過高，在SP反應之后，DAB顯色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS（pH7.2-7.6）洗滌切片4次，單純PBS洗2次，然后DAB顯色。警告：DAB為可疑致癌物，請采取必要的防范措施。熱修復抗原可選0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS等多種緩沖液。脫蠟不徹底，容易出現(xiàn)非特異性背景染色，建議免疫組化切片脫蠟與常規(guī)H.E脫蠟分開。如果將本試劑盒用于肝臟與腎臟等含內(nèi)源性生物素含量豐富的組織切片，需要進行封閉的特殊處理。在超過有效期的試劑盒中一種或多種試劑活性可能降低，因此不得使用過期的試劑盒，不同批號間的試劑盒也不能交叉混用。[詳細]

  2018-09-22 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 即用型SABC免疫組化染色試劑盒

  www.biokanu.com即用型SABC免疫組化染色試劑盒大鼠IgG使用說明書產(chǎn)品編號：QD82102試劑的保存：短期4℃可保存，長期-20℃。工作原理S-Avidin(鏈霉親和素)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，分子量47000。同親和素一樣，對生物素分子有極高的親和力，是一般抗原抗體親和力的一百萬倍。親和素是一個堿性蛋白質(zhì)（IP=10），經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點接近中性，IP=6.0~6.5，對組織和細胞的非特異吸附很低，基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即StreptAvidinBiotinComplex,。根據(jù)研究，SABC大約可形成上百個左右的過氧化物酶和數(shù)十個左右的鏈霉親和素所構成的復合物。SABC兼具高敏感性，低背景和操作簡便的優(yōu)點。應用范圍適用于免疫組織化學方法以顯示待測抗原的分布，本試劑盒適用于常規(guī)石蠟包埋切片、冰凍切片，培養(yǎng)固定的細胞切片以及新鮮制備的血涂片、爬片等。試劑盒中內(nèi)容山羊血清封閉液：1ml(效價1：10，臨用前用TBS或PBS稀釋10倍)。用于組織切片的封閉。二抗：1ml（效價1：10，臨用前用抗體稀釋液稀釋10倍)。親和純化抗體，標記長臂生物素，生物素標記抗大鼠IgG。SABC：1ml（效價1：10，臨用前用SABC稀釋液稀釋10倍）。鏈酶親和素-過氧化物酶復合物。用戶自備試劑：粘片劑APES或Poly-L-Lysine。0.01MPBS，0.01M枸櫞酸鹽緩沖液。DAB顯色試劑盒。免疫組化染色程序的選擇：用戶需根據(jù)抗原/抗體的特點確定程序，多數(shù)情況下要先比較各程序染色結果。石蠟切片染色程序:載玻片防脫片劑處理:可選擇APES或Poly-Lysine。撈片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片緊密粘附。切片常規(guī)脫蠟至水。30%H2O21份+蒸餾水10份混合,室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。酶消化程序:滴加復合消化液5-10分鐘。蒸餾水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。熱修復抗原:將切片浸入0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（PH6.0）,電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5-10分鐘后，反復1-2次。冷卻后PBS（pH7.2-7.6）洗滌1-2次。滴加封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體,不洗。適當稀釋的一抗（大鼠IgG），37℃2小時左右或4℃夜。PBS（pH7.2-7.6）洗2分鐘×3次。（一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度、背景有直接關系。一般來說，陽性染色強度不夠時，可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時間；背景過高時，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時間。）加生物素化抗大鼠IgG,37℃30分鐘。PBS（pH7.2-7.6）洗2分鐘×3次。滴加試劑SABC,37℃30分鐘。PBS（pH7.2-7.6）洗5分鐘×4次。DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒。取1ml蒸餾水,加試劑盒中A,B,C試劑各50ul,混勻后加至切片。室溫顯色,顯微鏡下觀察顯色反應，時間一般在3-30分鐘之間。達到合適著色強度時（陽性較強，背景較低），即可終止反應（用蒸餾水洗滌切片）。蘇木素輕度復染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。注意事項：如果染色背景過高，在SABC反應之后，DAB顯色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS（pH7.2-7.6）洗滌切片4次，單純PBS洗2次，然后DAB顯色。警告：DAB為可疑致癌物，請采取必要的防范措施。熱修復抗原可選0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS等多種緩沖液。脫蠟不徹底，容易出現(xiàn)非特異性背景染色，建議免疫組化切片脫蠟與常規(guī)H.E脫蠟分開。如果將本試劑盒用于肝臟與腎臟等含內(nèi)源性生物素含量豐富的組織切片，需要進行封閉的特殊處理。在超過有效期的試劑盒中一種或多種試劑活性可能降低，因此不得使用過期的試劑盒，不同批號間的試劑盒也不能交叉混用。[詳細]

  2018-09-22 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 人PR免疫組化試劑盒實驗說明書

  人PR免疫組化試劑盒該試劑盒以HRP標記的鏈霉親和素復合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）為基礎，可用于檢測細胞、組織內(nèi)的特異性PR抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的PR一抗與相應靶抗原結合后，用生物化二抗與一抗特異性結合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復合物，顯微鏡下觀察成像。試劑盒所含試劑：試劑A通透液：0.1%Triton-X10010mL（選用）試劑B封閉緩沖液（封閉用）20mL試劑C（原裝進口分裝）已稀釋的即用型PR一抗（2.5ml）試劑D（原裝進口分裝）生物素化羊抗兔IgG1支（濃度1.5mg/mL，稀釋比為1:300~1:500）50μL+抗體稀釋液20ml試劑EHRP-SA復合物1支（濃度1μM，稀釋比1:50~1:200）100μL試劑FDAB顯色液5ml用戶自備試劑：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羥基氨基甲烷1.21g氯化鈉7.6g加蒸餾水800mL，濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%體積比）2．抗原修復液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復液）10mMpH6.0檸檬酸緩沖液檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL，濃鹽酸調(diào)pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修復液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水700mL，用10mMNaOH調(diào)pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.緩沖甘油封固劑10mL4.Tween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實驗步驟（建議方案）：石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片：將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr；2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修復：根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫度達到98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗滌（2×2min）（具體修法見附1）*注：有些抗原勿需修復，直接進入第5步封閉。5.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育30min；6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2hr或4℃過一夜；7.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；8.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30min；10.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；11.封閉：滴加試劑Tween20，37℃濕盒孵育封閉20min；12.加HRP-SA：滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20nM），37℃濕盒中孵育30min；13.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min），TBS洗滌（2×5min）；14.顯色：應用DAB溶液（試劑F）顯色；15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明；16.封片：待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；17.觀察成像：顯微鏡下觀察成像。注意事項：1.修復后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導致結晶或抗原封閉。2.緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復使用。3.若試劑為微量濃縮液，用前應低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。4.封片前一定要換用TBS充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween20，否則會影響結果觀察。5.如須復染細胞核，則在封片前復染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封片。附1：抗原修法常用抗原修復液：檸檬酸緩沖液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修復液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修復法切片脫蠟水化處理，TBS沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復法微波盒中加入抗原修復液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或繼續(xù)微波10~15min，取出微波盒冷卻至室溫后，自來水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異，須自行調(diào)整。三、直接高壓抗原修復法取修復液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。四、隔水式高壓抗原修復法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰，微波盒中加入修復液于微波爐中加熱至沸騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣后計時4~8min即可關閉熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。[詳細]

  2018-11-16 10:02

  產(chǎn)品樣冊

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