本文由 北京中科微納精密儀器有限公司 整理匯編

2024-09-20 13:38 329閱讀次數(shù)

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• 塑料滑動摩擦磨損試驗原理及步驟

  塑料滑動摩擦磨損試驗原理及步驟 1. 實驗目的 （1）了解塑料摩擦、磨損的概念及表征方法。 （2）采用磨損實驗機，測定塑料的滑動摩擦、磨損性能，主要測定磨損量及摩擦因素。 2. 實驗原理 工程塑料常用來制造各種機械的減摩耐磨零件，在設計各種零件之，必須選擇合適的材料，對工程塑料的摩擦與磨損性能必須有所了解。因此，測試工程塑料的摩擦、磨損性能十分重要。摩擦性能主要是指材料的摩擦因素。磨損性能主要是指摩擦過程中，材料的表面不斷損失的性能。[詳細]

  2024-09-14 21:11

  其它

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• 塑料滑動摩擦磨損試驗原理及步驟

  1.實驗目的 (1)了解塑料摩擦、磨損的概念及表征方法 (2)采用磨損實驗機，測定塑料的滑動摩擦、磨損性能，主要測定磨損量及摩擦因素 2.實驗原理 工程塑料常用來制造各種機械的減摩耐磨零件，在設計各種零件之，必須選擇合適的材料，對工程塑料的摩擦與磨損性能必須有所了解。因此，測試工程塑料的摩擦、磨損性能十分重要。摩擦性能主要是指材料的座擦因素。磨損性能主要是指摩擦過程中，材料的表面不斷損失的性能。摩擦磨損定義 (1)摩擦:兩物體接觸表面間產(chǎn)生阻礙切向相對移動的現(xiàn)象稱為摩擦 (2)滑動摩擦:兩接觸物體接觸點具有不同速度時之摩擦。 (3)摩擦力:兩物體摩擦時相對移動的阻力 (4)摩擦系數(shù):阻礙兩物體相對運動的摩擦力對作用到物體表面的法向力之比。 (5)磨損:物體相對運動時相互接觸表面的物質(zhì)不斷損失或產(chǎn)生殘余變形稱為磨損。 3.實驗步驟 (1)圓環(huán)應清除油污，貯存于干燥缸內(nèi)以防生銹。 (2)試樣經(jīng)狀態(tài)調(diào)節(jié)后用感量為0.1毫克的分析天平稱取其質(zhì)量(m1)。 (3)把試樣裝進夾具，摩擦面用角尺校正并使它與圓環(huán)的交線處于試樣正中。裝好摩擦力拒記錄紙，開機校好委點。[詳細]

  2024-09-20 13:38

  其它

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• GB-T3960-1983塑料滑動摩擦磨損試驗方法.pdf

  GB-T3960-1983塑料滑動摩擦磨損試驗方法.pdf[詳細]

  2015-04-02 00:00

  標準

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• GB 3960-1983 塑料滑動摩擦磨損試驗方法

  GB 3960-1983 塑料滑動摩擦磨損試驗方法[詳細]

  2015-03-14 00:00

  其它

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• GB3960-1983滑動摩擦磨損試驗方法 國家標準下載

  產(chǎn)品名稱：塑料滑動摩擦磨損試驗機型號：M-200一、滑動摩擦磨損試驗機特點：適用于塑料制品及橡膠制品或其他復合材料的滑動摩擦，摩損性能測試。也可對試驗中試樣的摩擦力、摩擦系數(shù)和摩損量進行測定。制造標準：GB3960塑料滑動摩擦磨損試驗方法二、滑動摩擦磨損試驗機主要適用范圍及功能本儀器是按照GB3960設計并制造。適用于塑料制品及橡膠制品或其他復合材料的滑動摩擦，摩損性能測試。也可對試驗中試樣的摩擦力、摩擦系數(shù)和摩損量進行測定。本機采用16位單片機電子處理系統(tǒng)，使得本儀器各項測試指標精度非常高。由于集成程度很高，所以設備本身的穩(wěn)定性極好，本機具有一次設置，全自動運行，實驗結(jié)束后自動停機，并檢測摩損程度。是各個科研單位，大學，企業(yè)實驗室的必備檢測設備。三、滑動摩擦磨損試驗機功能特點：1、試樣尺寸：30mm*7mm*6mm±0.1mm2、轉(zhuǎn)動速度：0-200轉(zhuǎn)/分連續(xù)可調(diào)到500轉(zhuǎn)/分3、負荷：196N±0.2%（可擴充到392N）4、摩擦環(huán)尺寸：￠40×10mm倒角0.5×45°外圓表面與內(nèi)圓同心度偏差小于0.015、摩擦力矩：0--4Nm±0.5%6、計數(shù)器：0-9999小時7、砝碼重量：4KG砝碼一件，1KG砝碼4件，可實現(xiàn)重量疊加功能。四、滑動摩擦磨損試驗機精度：1、速度精度：1%2、負荷精度：0.5%3、摩擦力矩精度：1%4、計數(shù)器精度：1S5、傳感器測量精度：1%FS五、滑動摩擦磨損試驗機主要配置：1、主機一臺2、高精度扭矩傳感器一只3、彩晶顯示控制系統(tǒng)箱一臺4、4Kg砝碼兩件（備用一套）5、標準磨擦環(huán)四件（備用兩件）6、臺式微型打印機一臺7、產(chǎn)品使用說明書一份8、產(chǎn)品合格證9、產(chǎn)品裝箱單一份10、整機重量：約45公斤六、滑動摩擦磨損試驗機主要技術(shù)規(guī)格：1、Zda試驗力：2000N2、試驗力示值相對誤差:在滿量程的10%以上，不超過±2%3、試驗力示值重復性相對誤差：在滿量程的10%以上，不超過2%4、摩擦力矩測量范圍：0-15N.m5、摩擦力矩示值相對誤差：在滿量程的10%以上，不超過±3%6、摩擦力矩示值重復性相對誤差：在滿量程的10%以上，不超過3%7、下試樣軸轉(zhuǎn)速：400，200r/min可選擇（無級調(diào)速）8、上試樣軸轉(zhuǎn)速：360，180r/min9、上試樣軸向Zda移動距離：±4mm10、時間控制范圍：數(shù)顯控制1s-9999min11、轉(zhuǎn)數(shù)控制范圍:數(shù)顯控制1-99999912、曲線記錄及數(shù)據(jù)處理：由HX專用計算機實現(xiàn)對各個參數(shù)的測量顯示及數(shù)據(jù)處理，可時實顯示時間-摩擦力矩等多種曲線[詳細]

  2018-08-23 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 塑料滑動摩擦磨損試驗機的結(jié)構(gòu)和工作原理

  塑料滑動摩擦磨損試驗機的結(jié)構(gòu)和工作原理[詳細]

  2016-03-21 00:00

  課件

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• 塑料滑動摩擦磨損試驗機簡介

  適用范圍 符合標準：GB/ T 3960-2017 塑料滑動摩擦磨損試驗方法 GB/T 9141.8-1999 柔性石墨板材滑動摩擦系數(shù)測試方法 適用于塑料制品、橡膠制品、石墨板材或其他復合材料的滑動摩擦，磨損性能測試，也可對試驗中試樣的磨擦力、磨擦系數(shù)和磨損量進行測定。 產(chǎn)品功能 本儀器融合了當前Z新的智能電路系統(tǒng)進行控制，并結(jié)合老式 M-200A摩擦磨損試驗機的功能進行升級改造而成，本儀器具有測控精度高，操作便捷等優(yōu)勢，是科研院所、質(zhì)檢機構(gòu)、實驗室研究的試驗設備。 M-200A型摩擦磨損試驗機主要由試驗主機及智能控制系統(tǒng)兩大部分構(gòu)成，通過微機控制系統(tǒng)進行操作試驗，在試驗過程中同時可以顯示數(shù)值、扭矩、時間曲線，并可以隨意設定試驗次數(shù)，顯示當前試驗數(shù)值，設定時間及當前試驗時間等多種功能，隨機配備彩色打印機，可以打印出帶有曲線、表格數(shù)據(jù)等標準要求的試驗報告。 產(chǎn)品優(yōu)勢 （1）試驗完畢后，可以隨意設定并獲?。耗硶r間段內(nèi)的試驗數(shù)據(jù) （2）曲線顯示：時間—溫度、時間—摩擦系數(shù)、溫度—摩擦系數(shù)、轉(zhuǎn)速—溫度等[詳細]

  2024-09-11 18:03

  其它

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• 橡膠塑料滑動摩擦試驗機的組成部分和使用的詳細步驟

  橡膠塑料滑動摩擦試驗機是一種用于測量材料之間摩擦性能的專業(yè)儀器。該設備主要由加載系統(tǒng)、傳感器、控制系統(tǒng)和數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)組成，具有高精度、高可靠性和高自動化水平。 一、原理 橡膠塑料滑動摩擦試驗機的工作原理基于典型的滑動摩擦學理論。該理論認為，兩個表面接觸的物體在受到力的作用下，會產(chǎn)生相對運動，并且在兩個物體之間形成滑動摩擦力。橡膠和塑料等非金屬材料的摩擦性能通常受到多種因素的影響，如受力狀況、溫度、濕度和表面潤滑劑等。通過加載系統(tǒng)施加一定的壓力和速度，測量材料之間的摩擦力和摩擦系數(shù)，從而評估材料的摩擦特性。 二、由以下部分組成： 1.加載系統(tǒng)：該系統(tǒng)用于施加壓力和速度，通常包括電機、螺桿、導軌和氣缸等。 2.傳感器：傳感器用于測量材料之間的摩擦力和摩擦系數(shù)。常見的傳感器有負載傳感器和位移傳感器。 3.控制系統(tǒng)：控制系統(tǒng)用于控制測試過程中的各項參數(shù)，例如壓力、速度等，以及采集傳感器的數(shù)據(jù)。 4.數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)：數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)用于記錄測試過程中的數(shù)據(jù)，并通過計算機軟件進行數(shù)據(jù)處理和分析。[詳細]

  2023-11-10 15:19

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• 微機控制塑料滑動摩擦磨損試驗機

  微機控制塑料滑動摩擦磨損試驗機適用于塑料制品、橡膠制品、石墨板材或其他復合材料的滑動摩擦，磨損性能測試，也可對試驗中試樣的磨擦力、磨擦系數(shù)和磨損量進行測定。符合標準：GB/T3960-1983塑料滑動摩擦磨損試驗方法GB/T9141.8-1999柔性石墨板材滑動摩擦系數(shù)測試方法.試驗機主要由試驗主機及智能控制系統(tǒng)兩大部分構(gòu)成，通過微機控制系統(tǒng)進行操作試驗，在試驗過程中同時可以顯示數(shù)值、扭矩、時間曲線，并可以隨意設定試驗次數(shù)，顯示當前試驗數(shù)值，設定時間及當前試驗時間等多種功能，隨機配備彩色打印機，可以打印出帶有曲線、表格數(shù)據(jù)等標準要求的試驗報告。產(chǎn)品名稱微機控制塑料滑動摩擦磨損試驗機型號MM-200試樣尺寸30mm×7mm×6mm轉(zhuǎn)動速度0-200轉(zhuǎn)/分（可調(diào)）負荷196N±0.1%（可增至392N）摩擦環(huán)尺寸￠40×10mm，倒角0.5×45°，外圓表面與內(nèi)圓同心度偏差小于0.01摩擦環(huán)材質(zhì)45號鋼,淬火,熱處理HRC40-45,外圓表面光潔度8摩擦力矩0--4Nm砝碼重量4KG砝碼一件，1KG砝碼4件，可實現(xiàn)重量疊加功能。速度精度1%負荷精度0.5%摩擦力矩精度1%計數(shù)器精度1S傳感器測量精度1%FS[詳細]

  2018-08-23 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 塑料m-200滑動摩擦磨損試驗機產(chǎn)品樣冊

  塑料m-200滑動摩擦磨損試驗機產(chǎn)品樣冊[詳細]

  2024-09-28 00:00

  標準

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• COD分析儀工作原理及程序步驟

  COD分析儀工作原理及程序步驟[詳細]

  2012-10-12 00:00

  標準

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• 密煉機的操作步驟及工作原理

  密煉機的操作步驟及工作原理[詳細]

  2024-09-18 11:19

  產(chǎn)品樣冊

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• 塑料密度計操作步驟詳解

  塑料密度計操作步驟詳解[詳細]

  2015-09-25 00:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 紡織品垂直燃燒試驗儀實驗原理及試驗步驟

  紡織品垂直燃燒試驗儀實驗原理及試驗步驟[詳細]

  2016-05-24 00:00

  標準

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• 有關(guān)BJH的測試原理、計算步驟及適用范圍

  BJH方法作為介孔孔徑分布的計算模型，也是目前被普遍接受的介孔孔徑分布計算模型。BJH法在吸附等溫線上的取點計算的傳統(tǒng)范圍是0.05-1之間，但在這種方法使用了60年后，隨著MCM-41模板孔徑分子篩的問世，人們突然發(fā)現(xiàn)該方法在10nm以下會低估孔徑，4nm以下孔徑分析誤差可達20%。，所以目前建議的取點適用范圍是0.35-1之間。[詳細]

  2024-09-12 16:00

  標準

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• 魚甲狀腺素（T4）ELISA試劑盒操作步驟及實驗原理

  魚甲狀腺素（T4）ELISA試劑盒操作步驟及實驗原理[詳細]

  2015-04-22 00:00

  操作手冊

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• 塑料球壓痕硬度計的操作步驟

  塑料球壓痕硬度計的操作步驟 實驗步驟： 1．按GB／T1039—92中的規(guī)定檢查和處理試樣，并按GB2918—82 調(diào)節(jié)試驗環(huán)境。 2．檢測各負荷下機架的變形量。由于在負荷下，機架也產(chǎn)生微量變形，從而使壓痕深度指示值大于實際壓痕深度，這樣就必須定期檢查各負荷下機架的變形量。測定時卸下壓頭，升起工作臺位其與主軸接觸，加上初負荷，調(diào)節(jié)深度指示儀表為零，再加上試驗負荷，直接由壓痕深度指示儀表中讀取相應負荷下機架變形量h 2 mm 。 3．根據(jù)材料硬度，選擇適宜的試驗負荷，裝上壓頭，并把試樣放在工作臺上、使測試表面與加荷方向垂直，無沖擊加上韌負荷后，把深度指示儀表調(diào)到零點。 4．在2一３s內(nèi)將所選擇適宜的負荷平穩(wěn)加到試樣上，保持負荷30s，立即讀取壓痕深度h1mm 。 5．必須壓痕深度在0.15 一0.35mm的范圍內(nèi)，若壓痕深度不在規(guī)定范圍內(nèi)，則應改變試驗負荷，使達到規(guī)定的深度范圍。 6．每組試樣不少于兩塊，測量點數(shù)不少于10 點。 [詳細]

  2024-09-11 18:02

  實驗操作

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• ELISA的概念、原理、操作步驟

  ELISA的概念、原理、操作步驟ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領(lǐng)域?！　。ㄒ唬≡怼　LISA是以免疫學反應為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的GX催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法（圖a）、用于檢測抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法?！　。ǘ〔僮鞑襟E方法一　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:　　1.　包被：用0.05MPH9.碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）?！　?.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）?！　?.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。　　4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。　　5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性?！　》椒ǘ∮糜跈z測未知抗體的間接法：　　　1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。2、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,Z后一遍用DDW（超純水）洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。3.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。4.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。5.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。（三）　試劑器材　　1.　試劑　　（1）　包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）:　　　　NaCO31.59克　NaHCO3　2.93克　　加蒸餾水至1000ml　?。?）　洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M　KH2PO40.2克　Na2HPO412H2O　2.9克　NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05％0.5ml加蒸餾水至1000ml　?。?）　稀釋液:牛血清白蛋白（BSA）0.1克　加洗滌緩沖液至100ml　或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10％使用?！　。?）　終止液（2MH2SO4）：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml?！　。?）　底物緩沖液（PH5.0磷酸檸檬酸）:0.2MNa2HPO4（28.4克／L）25.7ml　0.1M檸檬酸（19.2克／L）24.3ml　加蒸餾水50ml?！　。?）　TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:TMB（10mg／5ml無水乙醇）0.5ml底物緩沖液（PH5.5）10ml0.75％H2O2　32μl　?。?）　ABTS使用液:ABTS　0.5mg　底物緩沖液（PH5.5）1ml　3％H2O2　2μl　　（8）　抗原、抗體和酶標記抗體?！　。?）　正常人血清和陽性對照血清?！　?.　器材:　?。?）　聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標板）40孔或96孔，ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶?！　。?）　小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等?！　。?）　4℃冰箱，37℃孵育箱。（四）　注意事項　　1.　正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉?！　?.　在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:　?。?）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。　?。?）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的Z適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值Zda而蛋白量Z少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml?！　。?）　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度?！　。?）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。ELISA相關(guān)儀器試劑設備酶標儀洗板機化學發(fā)光檢測儀ELISA檢測試劑盒ELISPOT檢測ELISA試劑盒抗體酶標板[詳細]

  2018-11-15 10:03

  產(chǎn)品樣冊

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• ELISA實驗原理、步驟、問題分析

  上海恒遠生物科技有限公司專業(yè)供應各種屬elisa試劑盒，提供免費代測服務，保證實驗結(jié)果客觀真實性。我公司對試劑盒質(zhì)量1**%保證，若存在質(zhì)量問題，我們無條件包退換。若需要了解試劑盒的詳細信息，請來的咨詢：電話：021-6052049813636351217業(yè)務QQ:1005074258何經(jīng)理ELISA實驗原理、步驟、ELISA問題分析ELISA實驗原理酶聯(lián)免疫吸附測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）原理1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術(shù)發(fā)展成液體標本中微量物質(zhì)的測定方法。ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度類型及步驟ELISA的主要常用類型及步驟1.間接法測抗體間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體（二抗）以檢測與固相抗原結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：1）將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗原，洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。2）加稀釋的樣本，保溫反應。樣本中的特異抗體與固相抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體，樣本中的其他成份在洗滌過程中被洗去。3）加酶標抗抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗抗體結(jié)合，從而間接記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關(guān)。4）加底物顯色。2.雙抗體夾心法測抗原雙抗體夾心法是檢測抗原Z常用的方法，操作步驟如下：1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。2）加受檢樣本，保溫反應。樣本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。3）加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與樣本中受檢抗原的量相關(guān)。4）加底物顯色。3.雙抗原夾心法測抗體反應原理和模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體4.競爭法測抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合。標本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標抗原愈少，Z后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。ELISAQ&A如何選擇合適的陽性對照?陽性對照的基本組成應該盡量與檢測樣本的組成一致，一般陽性對照多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質(zhì)，加入一定量的待檢物質(zhì)。比如，以人血清為標本的測定，陽性對照多用確定的病人血清或者以復鈣人血漿為原料加入一定量標準品。如何選擇合適的陰性對照?陰性對照的基本組成也應該盡量與檢測樣本的組成一致，**先行檢測確定其中不含待檢物質(zhì)。比如，檢測人血清標本時，陰性對照應該選擇正常人血清;檢測免疫動物血清中抗體效價時，陰性對照應該選擇該動物的免疫前血清。如何選擇Zyou化的包被條件?1.包被抗原的選擇包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被，對于含雜質(zhì)較多的抗原可以采用間接捕獲法包被（先用能夠與目的抗原反應的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標板上，再通過特異性反應使抗原固相化）。經(jīng)純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物，由于分子量太小，往往難于直接吸附在酶標板上，一般都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)如BSA等偶聯(lián)，偶聯(lián)物吸附于固相載體上。2.包被液的選擇一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液，如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。3.包被溫度的選擇通常是4-8度條件下過夜或者37度保溫2小時，我們強烈建議4-8度條件下包被，有利于蛋白活性的保持。4.包被濃度的選擇包被的Z適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)變化，一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml，要明確針對特定包被抗原的Z適包被濃度需要通過實驗來確定。包板后需要封閉嗎?應該選擇什么樣的封閉體系?封閉是否必要，取決于ELISA的模式及具體的實驗條件。一般說來，雙抗體夾心法，只要酶標記物是高活性的，操作時洗滌徹底，不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果。而在間接法測定中，封閉一般是必不可少的。常用的封閉劑有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明膠、5%的脫脂奶粉，AbMART推薦使用5%脫脂奶粉，價廉而且封閉能力強，不過5%脫脂奶粉只適合短期內(nèi)使用，不宜長期保存，所以試劑盒中較少使用。如何正確使用酶結(jié)合物?1.酶結(jié)合物的稀釋液在稀釋液中常加入高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)（例如1%BSA或5%脫脂奶粉），通過競爭YZ酶結(jié)合物在固相載體上的非特異性吸附。一般還加入能夠YZ蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑，如吐溫20（0.05%的濃度較為適宜）。2.正確稀釋酶結(jié)合物酶結(jié)合物的合適工作濃度需要通過預實驗來確定，濃度過高易導致本底偏高，濃度過低則會導致陽性信號的減弱。酶結(jié)合物**在使用前稀釋，稀釋后的酶結(jié)合物不宜長期保存，因為低濃度的酶結(jié)合物極易失活。問題可能的原因解決方法陰性對照產(chǎn)生了陽性的結(jié)果試劑或者耗材污染更換試劑，使用一次性耗材洗板出現(xiàn)問題更換更強配方的洗滌液，增加洗板次數(shù)，延長洗板時間如果是在雙抗體夾心法中出現(xiàn)，有可能是包被抗體與二抗間有交叉反應更換包被抗體或二抗使用了過多的抗體減少抗體使用量整板出現(xiàn)高背景二抗產(chǎn)生了非特異性吸附減少二抗使用量，縮短二抗反應時間顯色液不新鮮使用現(xiàn)配的顯色液顯色反應時間過長沒有終止控制顯色反應時間，及時終止反應試劑或者耗材污染更換試劑，使用一次性耗材反應溫度過高導致的非特異性吸附嚴格控制反應在Z適溫度下進行封閉條件不佳導致的非特異性吸附更換封閉能力更強的封閉液，延長封閉時間反應信號偏低包被條件不合適提高包板濃度，延長包板時間抗原抗體反應不夠充分延長反應時間，確保反應在Z適溫度下進行顯色液配方不恰當增加顯色底物的量二抗結(jié)合不夠提高二抗?jié)舛?，延長反應時間，更換效果更好的二抗梯度稀釋做ELISA時產(chǎn)生跳孔現(xiàn)象酶標板疊放導致傳熱不均勻，各孔反應溫度有差異盡量避免酶標板疊放在一起移液器稀釋時未能保持連續(xù)性定期校準移液器，確保移液器的正確使用反應溶液蒸發(fā)酶標板用封條密封或者加蓋洗板不均勻確定洗板機能夠正常工作酶標板底有雜物或者水珠讀板時清理干凈酶標板底部[詳細]

  2018-11-16 10:02

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  2019-08-01 09:30

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