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蛋白質(zhì)純化及復(fù)性
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2007-10-11 00:00 225閱讀次數(shù)
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蛋白質(zhì)純化及復(fù)性
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蛋白質(zhì)純化及復(fù)性 蛋白質(zhì)純化及復(fù)性[詳細(xì)]
2007-10-11 00:00
應(yīng)用文章
蛋白質(zhì)復(fù)性基本信息說明 蛋白質(zhì)因受某些物理或化學(xué)因素的影響，分子的空間構(gòu)象被破壞，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)發(fā)生改變并失去原有的生物學(xué)活性的現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的變性作用（denaturation）。變性作用并不引起蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的破壞，而是二級(jí)結(jié)構(gòu)以上的高級(jí)結(jié)構(gòu)的破壞，變性后的蛋白質(zhì)稱為變性蛋白。包涵體復(fù)性，蛋白質(zhì)折疊，如果變性條件劇烈持久，蛋白質(zhì)的變性是不可逆的。如果變性條件不劇烈，這種變性作用是可逆的，說明蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)的變化不大。這時(shí)，如果除去變性因素，在適當(dāng)條件下變性蛋白質(zhì)可恢復(fù)其天然構(gòu)象和生物活性，這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的復(fù)性（renaturation）。例如胃蛋白酶加熱至80～90℃時(shí)，失去溶解性，也無(wú)消化蛋白質(zhì)的能力，如將溫度再降低到37℃，則又可恢復(fù)溶解性和消化蛋白質(zhì)的能力。分離步驟分離包含體并復(fù)性蛋白質(zhì)的操作步驟并不復(fù)雜，從破碎細(xì)胞開始，然后將細(xì)胞勻漿離心，回收包含體后，加入變性劑溶解包含體，使之成為可溶性伸展態(tài)，再除去變性劑使表達(dá)產(chǎn)物折疊恢復(fù)天然構(gòu)象及活性。但在實(shí)際研究中發(fā)現(xiàn)，在體外折疊時(shí)，蛋白質(zhì)分子間由于存在大量錯(cuò)誤折疊和聚合，復(fù)性效率往往很低。究其原因，蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)雖然由其氨基酸順序決定，然而伸展肽鏈折疊為天然活性結(jié)構(gòu)的過程還受到周圍環(huán)境的影響。1995年，Karuppiah和Sharma發(fā)表文章，介紹了使用環(huán)糊精輔助碳酸酐酶B的復(fù)性［9］。環(huán)糊精由淀粉通過環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶降解制得，是由D-吡喃葡萄糖單元以α-1，4-糖苷鍵相互結(jié)合成互為椅式構(gòu)象的環(huán)狀低聚糖，其分子通常含有6～12個(gè)吡喃葡萄糖單元。有實(shí)用意義的是含6、7、8個(gè)吡喃葡萄糖單元的α、β、γ-環(huán)糊精，但α-環(huán)糊精空腔較小，γ-環(huán)糊精價(jià)格昂貴，常用的是β-環(huán)糊精［10］。環(huán)糊精的特征是能形成包絡(luò)化合物，客體分子從寬口端進(jìn)入其分子空腔。包絡(luò)物的形成主要靠非共價(jià)鍵相互作用如范德華力、氫鍵、疏水相互作用、幾何形狀匹配等。利用環(huán)糊精的疏水性空腔結(jié)合變性蛋白質(zhì)多肽鏈的疏水性位點(diǎn)，可以YZ其相互聚集失活，從而促進(jìn)肽鏈正確折疊為活性蛋白質(zhì)。1999年，Sundari等報(bào)道了用直鏈糊精輔助胰島素、碳酸酐酶和雞蛋白溶菌酶復(fù)性［11］，發(fā)現(xiàn)直鏈糊精基本上能夠模擬環(huán)糊精在輔助蛋白質(zhì)復(fù)性方面的作用，而且具有這樣一些優(yōu)點(diǎn)：直鏈糊精的螺旋結(jié)構(gòu)形成一個(gè)疏水性空管，可以結(jié)合更多的蛋白質(zhì)分子；在水中溶解度較高，有利于提高復(fù)性酶濃度和實(shí)驗(yàn)操作；價(jià)格比環(huán)糊精便宜，實(shí)際應(yīng)用前景廣闊。[詳細(xì)]
2018-09-28 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
蛋白質(zhì)的分離純化 蛋白質(zhì)的分離純化[詳細(xì)]
2013-03-31 00:00
專利
蛋白質(zhì)提取與純化技術(shù) 蛋白質(zhì)提取與純化技術(shù)[詳細(xì)]
2013-04-09 00:00
安裝說明
蛋白質(zhì)提取與純化技術(shù) 蛋白質(zhì)提取與純化技術(shù)[詳細(xì)]
2024-09-18 19:23
期刊論文
蛋白質(zhì)提取與純化技術(shù).doc 蛋白質(zhì)提取與純化技術(shù).doc[詳細(xì)]
2024-09-14 01:23
專利
有機(jī)溶劑沉淀法分離與純化蛋白質(zhì) 有機(jī)溶劑沉淀法分離與純化蛋白質(zhì)[詳細(xì)]
2024-09-17 02:00
操作手冊(cè)
肉食的危害及蛋白質(zhì)神話 肉食的危害及蛋白質(zhì)神話[詳細(xì)]
2024-09-11 18:03
報(bào)價(jià)單
PCR純化試劑盒/DNA純化試劑盒 PCR純化試劑盒/DNA純化試劑盒[詳細(xì)]
2015-09-11 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
PCR 純化試劑盒/DNA 純化試劑盒 PCR 純化試劑盒/DNA 純化試劑盒[詳細(xì)]
2014-12-11 00:00
期刊論文
實(shí)驗(yàn)室超純水設(shè)備的原理及純化過程 實(shí)驗(yàn)室超純水設(shè)備的原理及純化過程[詳細(xì)]
2024-09-18 18:06
報(bào)價(jià)單
乳及乳制品蛋白質(zhì)摻假檢測(cè)研究進(jìn)展 乳及乳制品蛋白質(zhì)摻假檢測(cè)研究進(jìn)展[詳細(xì)]
2011-03-14 00:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
非蛋白質(zhì)脂肪族氨基酸及衍生物 非蛋白質(zhì)脂肪族氨基酸及衍生物[詳細(xì)]
2010-09-16 00:00
報(bào)價(jià)單
乳及乳制品蛋白質(zhì)摻假檢測(cè)研究進(jìn)展 乳及乳制品蛋白質(zhì)摻假檢測(cè)研究進(jìn)展[詳細(xì)]
2024-09-29 00:41
報(bào)價(jià)單
酸純化蒸餾器 酸純化蒸餾器[詳細(xì)]
2014-12-22 00:00
報(bào)價(jià)單
水純化方法 水純化方法[詳細(xì)]
2014-03-28 00:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
Milli-Q?IQ Element水純化及取水裝置產(chǎn)品樣冊(cè) 使用來自Milli-Q? IQ 7000或Milli-Q? IQ 7003/05/10/15系統(tǒng)的新制備超純水，Milli-Q? IQ Element裝置進(jìn)一步對(duì)水進(jìn)行純化。在使用點(diǎn)取用的水被證實(shí)含有極低水平的元素污染物，從單個(gè)ppt到亞ppt檢測(cè)水平。專門從事超痕量元素分析的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)驗(yàn)證了本裝置的水質(zhì)。[詳細(xì)]
2024-09-15 05:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
可溶性包涵體蛋白復(fù)性（化學(xué)稀釋II）試劑盒產(chǎn)品說明書 可溶性包涵體蛋白復(fù)性（化學(xué)稀釋II）試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途可溶性包涵體蛋白復(fù)性（化學(xué)稀釋II）試劑是一種旨在使用化學(xué)穩(wěn)定方法，使可溶性變性純化蛋白重新折疊，恢復(fù)其蛋白功能和活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種可溶性純化蛋白，尤其是細(xì)菌內(nèi)重組蛋白（融合蛋白）以及鹽酸胍或Sarkosyl可溶性處理的包涵體蛋白?？珊罄m(xù)用于蛋白功能、酶活性等分析。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，參數(shù)優(yōu)化，操作便捷，復(fù)性效果理想。技術(shù)背景在蛋白純化和融化過程中，特別是包涵體蛋白，變性劑（denaturant）提供了Z有效的手段，其獲得的純化蛋白屬于變性蛋白（denaturedprotein）。為了使變性蛋白恢復(fù)為天然蛋白（nativeprotein），即具有蛋白質(zhì)的自然結(jié)構(gòu)和活性，需要進(jìn)行蛋白復(fù)性（renaturation）或重新折疊（refolding）。蛋白復(fù)性是一個(gè)復(fù)雜的過程，諸如pH、離子強(qiáng)度、低分子添加劑、氧化還原電位（redoxpotential）和溫度等物化因子，影響體外蛋白復(fù)性的效率。通常體外復(fù)性的方法包括稀釋法和緩沖交換法。前者通過化學(xué)處理，而后者采用物理方法（例如透析、膜過濾（diafiltration）、凝膠過濾層析（gel-filtrationchromatography）等，以達(dá)到蛋白復(fù)性的效果。L-精氨酸（L－arginine）、聚乙二醇（PEG）、硫代甜菜堿（sulfobetaine）、去垢劑、變性劑等將影響化學(xué)稀釋復(fù)性處理的效率。產(chǎn)品內(nèi)容穩(wěn)定液（ReagentA）20毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在4℃冰箱里，有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器恒溫?fù)u床：用于反應(yīng)孵育實(shí)驗(yàn)步驟準(zhǔn)備好可溶性純化變性蛋白樣品移取50微升蛋白樣品（10毫克/毫升）到1.5毫升離心管加入950微升穩(wěn)定液（ReagentA）放進(jìn)20℃恒溫?fù)u床孵育2小時(shí)，速度為200RPM（選擇步驟）移取10微升進(jìn)行生物檢測(cè)，例如蛋白功能或活性：比色法、HPLC、受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)等確定復(fù)性蛋白活性值即刻放進(jìn)－70℃冰箱里保存注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為20次操作操作時(shí)須戴手套本產(chǎn)品的復(fù)性效率達(dá)80％以上建議與本公司系列包涵體蛋白溶解試劑盒配套使用由于樣品的特異性，用戶可以優(yōu)化溫度、孵育時(shí)間、蛋白濃度，以獲得Zda復(fù)性效率如果復(fù)性效率過低，建議使用可溶性包涵體蛋白復(fù)性（物理透析）試劑盒－HL30044.5如果獲得滿意的復(fù)性效果，用戶可以按比例擴(kuò)大復(fù)性容量本公司提供系列包涵體蛋白處理試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無(wú)蛋白酶污染[詳細(xì)]
2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
蛋白質(zhì)抽取 上海金穗生物公司是一家專業(yè)經(jīng)營(yíng)生物試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、試劑耗材的公司，生物引擎在廣大用戶的幫助和支持下，經(jīng)過不懈的努力，已成為國(guó)內(nèi)生命科學(xué)領(lǐng)域產(chǎn)品的主要供應(yīng)商之一，主要經(jīng)營(yíng)ELISA試劑盒、細(xì)胞、血清、抗體、金標(biāo)試劑盒、生物試劑、耗材、培養(yǎng)基、一抗、二抗等產(chǎn)品，產(chǎn)品暢銷國(guó)內(nèi)大部分地區(qū)，銷售額逐年穩(wěn)步提高。上海金穗生物公司擁有雄厚的實(shí)力、合理的價(jià)格和優(yōu)良的服務(wù)，能夠及時(shí)解決和滿足客戶的各方面的需求，公司的服務(wù)和業(yè)務(wù)網(wǎng)絡(luò)遍及全國(guó)，在同行獲得一致好評(píng)。www.shjsbio.com[詳細(xì)]
2018-10-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
產(chǎn)品應(yīng)用（27）核酸及蛋白質(zhì)檢測(cè)方法集錦（上） 如何能夠準(zhǔn)確和靈敏對(duì)核酸及蛋白質(zhì)進(jìn)行定量檢測(cè)是許多實(shí)驗(yàn)成敗與否的重要環(huán)節(jié)。Molecular Devices?酶標(biāo)儀為核酸及蛋白質(zhì)檢測(cè)提供了多種可靠方案。結(jié)合SoftMax Pro? 軟件強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能，可一鍵生成定量結(jié)果，并可根據(jù)用戶需求定制格式并導(dǎo)出數(shù)據(jù)。[詳細(xì)]
2021-02-19 14:03
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