本文由 上海凈信實業(yè)發(fā)展有限公司 整理匯編

2016-09-19 00:00 1859閱讀次數(shù)

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  腐殖酸的污染。土壤中，特別是森林，草地土壤含有非常豐富的腐殖酸。腐殖酸是一系列的有機物分子，部分分腐殖酸同核酸分子非常類似，在純化過程中非常難于去除。微量的腐殖酸污染都會導(dǎo)致下游應(yīng)用，如PCR，酶切的失敗。裂解方法。土壤樣品中含有各種微生物，如細菌和真菌等。革蘭氏陽性細菌和真菌都含有非常厚的細菌壁，讓這些微生物的細胞壁有效破裂是提取高產(chǎn)量宏基因組DNA的關(guān)鍵。由于土壤樣品的復(fù)雜性，使用酶法（如溶菌酶，破壁酶，蝸牛酶）或液氮研磨都不可行，因為土壤中含有各種金屬離子或YZ因子導(dǎo)致消化酶的活性失活，或土壤中的沙粒等會導(dǎo)致液氮研磨很難進行。土壤DNA提取的解決簡介土壤樣品含有大量的微生物，其中絕大部分的微生物都是無法直接培養(yǎng)進行繁殖和研究。從土壤樣品中提取DNA是研究土壤微生物Z為有效的方法。目前從土壤樣品中提取微生物DNA的方法主要有直接法和間接法。直接法是指把土壤樣品放在裂解液中，經(jīng)過有效的破壁方法使微生物的DNA全部釋放到裂解液中，然后再進行分離提取，如Zhou的方法。間接法是指將土壤放在一種的緩沖液中，如BufferPBS等，把微生物從土壤中分離出來，然后再進行DNA的提取。間接法可大大降低土壤中腐殖酸，重金屬鹽對DNA提取帶來的影響，但是這種方法會丟失許多微生物，得到的DNA并非土壤樣品中的全基因組（宏基因組），目前已經(jīng)很少研究者會采用這種方法。從土壤樣品中直接提取DNA可Zda可能性地獲得全基因組，但是這種方法卻面臨以下幾個問題：1.2.3.DNA得率難于控制。土壤樣品或因肥沃，或因貧瘠，或因含水量豐富，或因干枯，或因取樣的深淺度，都會造成微生物數(shù)量和品種發(fā)生劇烈改變。在一個小范圍的土壤樣品DNA含量往往會差別成千上百倍。此外，某些土壤中含有的化學(xué)成分，如重金屬鹽，粘土物質(zhì)都會造成DNA得率降低。OmegaBiotek公司的E.Z.N.A.SoilDNAKit是目前土壤DNA提取Z為優(yōu)化的試劑盒。該試劑盒采用玻璃珠研磨法和熱激化學(xué)破壁法，可不需特殊的珠磨儀，在點動渦旋儀就可進行，適合于廣大的研究室。試劑盒中HTRReagent是OmegaBiotek公司du家開發(fā)的腐殖酸吸附劑，能GX去除各種腐殖酸的污染。此外還采用無醇的硅膠柱純化方式，可GX去除土壤中各種可溶性金屬鹽，以及其它可溶性的YZ因子。該試劑盒已經(jīng)成功地提取如下土壤（部分是客戶反饋）：自然保護區(qū)森林的土壤（長達30-40年森林土壤，表層有30-50cm落葉層），紅樹林土壤，草地，耕地，海底泥，污泥，礦石區(qū)泥土，有機物污染的泥土，池塘泥，垃圾泥，空調(diào)管道堆積物等。實驗方法為表明該試劑盒的優(yōu)勢性，我們選擇以下不同組織樣品進行DNA提取實驗，每個樣品重復(fù)3次。l森林類樣品：自然保護區(qū)森林土壤（廣東黑石頂自然保護區(qū)）和海南島紅樹林保護區(qū)l礦石區(qū)樣品：礦石區(qū)水底土壤（濕）和礦石區(qū)地表土壤（干）l耕地樣品：稻田土壤，菜地土壤l有機物污染地表樣品：污水溝衍泥和生活垃圾堆放區(qū)操作方法（按SoilDNAKit試劑盒進行）簡單描述以下：1.取▲0.5g森林土壤/耕地土壤，或◆4g礦石區(qū)土壤和有機物污染土壤至15ml離心管中；2.加入▲0.5g酸洗玻璃珠，或◆4g酸洗玻璃珠；3.加入▲1mlBufferSXLMLus，或◆8mlBufferSXLMLus；4.立即在渦旋儀上Z高速渦旋3分鐘。5.加入▲100ul，或◆800ulBufferDS，渦旋15s混勻6.轉(zhuǎn)移至預(yù)熱至70oC水浴鍋中，水浴10-15分鐘。7.3000xg離心3分鐘，轉(zhuǎn)移▲800ul，或◆7ml上清，并加入▲270ulBufferSP2或◆2.3mlBufferSP2，渦旋混勻；8.▲10,000xg離心5分鐘，或◆5，000xg離心10分鐘；9.把上清液轉(zhuǎn)稱至新的2ml/15ml離心管中，加入0.7倍的異丙醇。（在處理礦石區(qū)樣品時和有機物污染的樣品中，還加入133ul糖原溶液），渦旋混勻；10.▲10,000xg離心5分鐘，或◆5，000xg離心10分鐘沉淀收集DNA。11.倒棄上清液，并反扣于吸水紙上5分鐘；12.加入200ulElutionBuffer，渦旋5秒。65℃水浴20-60分鐘，讓DNA充分溶液。13.加入50ulHTR,反應(yīng)2min后，離心，取上清。14.上清加入等體積（約200ul）XP2Buffer，均勻后上柱。15.加入300ulXP2Buffer，洗滌一次。16.加入700ulSPWWashBuffer，洗滌兩次。17.空甩后，加入適當量的ElutionBuffer洗脫即可。實驗結(jié)果1.DNA電泳結(jié)果取10ul純化的基因組DNA上樣于0.8%瓊脂糖凝膠，80V電泳30分鐘，結(jié)果如下。0.5g森林類土壤樣品（前兩個自然保護區(qū)森林土壤，后兩個為紅樹林土壤）0.5g耕地類土壤樣品A:水稻田土壤B:玉米土壤4g有機物污染土壤樣品A:生活垃圾堆放地B:污水溝底泥4g礦石泥1和3是兩個礦石區(qū)水底土壤（濕）2和4礦石區(qū)地表土壤（干）相關(guān)附錄【omega】基因組DNA抽提試劑盒系列　Se全血DNA小量提取試劑盒：從小于1ml血液樣品中純化2-30ug淋巴細胞基因組DNAD3471-00SEBloodDNAKit（20）150D3471-01SEBloodDNAKit（50）300D3471-02SEBloodDNAKit（200）1000全血DNA小量提取試劑盒：從小于250ul血液樣品中純化2-30ugDNA，包括寄生的病毒等基因組DNAD3392-00BloodDNAKit（5）108D3392-01BloodDNAKit（50）720D3392-02BloodDNAKit（200）2610全血DNA中/大量提取試劑盒：從小于10ml、20ml血液樣品中純化200-250ug或400-600ug基因組DNAD3494-01BloodDNAMidiKit（10）495D3494-03BloodDNAMidiKit（50）2250D3494-04BloodDNAMidiKit（100）4320D2492-01BloodDNAMaxiKit（5）450D2492-02BloodDNAMaxiKit（20）1710D2492-03BloodDNAMaxiKit（50）3600[詳細]

  2024-09-29 06:33

  產(chǎn)品樣冊

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• 賽默飛TSQ針對《ZG藥典》版藥材阿膠、鹿角膠、龜甲膠的鑒別

  引言阿膠、鹿角膠、龜甲膠均系常用的滋補藥，在及中成藥配伍方面占有極重要的位置，由于貨源緊缺以致藥材基源混雜和摻假現(xiàn)象時有發(fā)生。目前，針對這三種膠類真?zhèn)舞b別的方法有多種，但其認定的Z高標準則是《ZG藥典》關(guān)于此類膠的規(guī)定。本實驗嚴格參照《ZG藥典》2015年版中藥材阿膠、鹿角膠、龜甲膠的鑒別方法，應(yīng)用三重四極桿質(zhì)譜系統(tǒng)TSQEndura開發(fā)了藥材阿膠、龜甲膠及鹿角膠的檢測方法。[詳細]

  2018-08-10 10:58

  產(chǎn)品樣冊

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• 高通量組織研磨儀對指甲進行研磨提取微量元素實驗效果-上海凈信

  高通量組織研磨儀對指甲進行研磨提取微量元素實驗效果-上海凈信[詳細]

  2024-09-20 00:04

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• TL2010S動物組織研磨器研磨雞淋巴組織的試驗方法

  TL2010S動物組織研磨器研磨雞淋巴組織的試驗方法[詳細]

  2024-09-18 02:53

  選購指南

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• 基因組DNA提取相關(guān)

  基因組DNA相關(guān)基因組DNA提取試劑盒簡介：DNA是遺傳信息的載體，是Z重要的生物信息分子，是分子生物學(xué)研究的主要對象，為了進行測序、雜交、基因表達、文庫構(gòu)建等試驗，獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提，因此基因組DNA的提取也是分子生物學(xué)試驗技術(shù)中Z重要、Z基本的操作之一。Solarbio公司提供各種不同樣品基因組DNA提取試劑盒，如植物、動物、細菌、細胞、血液、酵母等基因組DNA提取試劑盒。所提取的基因組純度高，片段大小在50kb左右。用戶可根據(jù)需要選用不同的試劑盒來進行不同樣品的抽提。基因組DNA提取的原則：1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性（因為遺傳信息全部儲存在核酸一級結(jié)構(gòu)中，故完整的一級結(jié)構(gòu)是保證核酸結(jié)構(gòu)與功能研究的基礎(chǔ)）。2、排除其它分子（如蛋白質(zhì)、多糖、脂類、有機溶劑等）的污染，使下游試驗順利進行?；蚪MDNA提取的原理和方法：DNA與組蛋白構(gòu)成核小體，核小體纏繞成中空的螺旋管狀結(jié)構(gòu)，即染色絲，染色絲再與許多非組蛋白形成染色體。染色體存在于細胞核中，外有核膜及胞膜。從組織中提取DNA必須先將組織分散成單個細胞，然后破碎胞膜及核膜，使染色體釋放出來，同時去除與DNA結(jié)合的組蛋白及非組蛋白。1、樣品預(yù)處理從各種不同來源的樣品（如細菌、酵母、血液、動植物組織細胞等）中提取高純度的基因組DNA，因細胞結(jié)構(gòu)及其成分不同，樣品預(yù)處理方式也不同，以下簡單介紹常用提取材料的預(yù)處理方式，若需詳細了解，請參考本公司各基因組DNA提取試劑盒說明書。部分樣品預(yù)處理方式:植物材料液氮研磨動物材料勻漿、液氮研磨培養(yǎng)細胞蛋白酶K處理細菌溶菌酶破壁酵母破壁酶破壁、玻璃珠研磨血液紅細胞裂解液去紅細胞2、細胞裂解CTAB法：適用于植物組織、真菌等。CTAB是一種陽離子去污劑，可溶解細胞膜，并與核酸形成復(fù)合物。該復(fù)合物在高鹽溶液中（>0.7MNaCl）是可溶的，通過有機溶劑抽提，去除蛋白、多糖、多酚等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。SDS法：適用于細菌、血液、酵母、動物組織、細胞等。SDS是一種陰離子去污劑，可溶解細胞膜，裂解細胞，使蛋白質(zhì)變性、染色體解體。其它裂解方法：物理方式：機械剪切、超聲波破碎、研磨勻漿等化學(xué)方式：異硫氰酸胍、堿裂解等酶法：蛋白酶K3、DNA分離純化純化要求：核酸樣品中不應(yīng)存在對酶（如核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶等）有YZ作用的成分。其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖、多酚和脂類分子等污染應(yīng)降低到Zdi程度。排除其它核酸分子的污染，如提DNA時應(yīng)去除RNA，反之亦然。純化方法：細胞破碎后，常使用吸附材料結(jié)合方法去除雜質(zhì)和純化DNA，主要有硅基質(zhì)材料、陰離子交換樹脂和磁珠等。因硅基質(zhì)材料可特異吸附核酸DNA，使用方便、快捷，不需要使用有毒溶劑如酚、氯仿等，使得提取基因組像過濾一樣簡單，因此硅基質(zhì)材料成為大規(guī)模分離純化DNA的通用方法。硅基質(zhì)材料吸附核酸的原理：主要利用DNA在高鹽低pH值環(huán)境下與硅基質(zhì)材料相結(jié)合，在低鹽高pH值環(huán)境下與硅基質(zhì)材料脫離的特征。其機理可能是高濃度鹽離子破壞了硅基質(zhì)水分子結(jié)構(gòu)，形成陽離子橋，當鹽被清除后，再水化的硅石破壞了基質(zhì)和DNA之間的吸引力，因而DNA從硅基質(zhì)上被洗脫下來。注意事項：盡量簡化操作步驟，縮短提取過程，以減少各種有害因素對核酸的破壞。減少化學(xué)物質(zhì)對DNA的降解，為避免過酸、過堿對DNA雙鏈中磷酸二酯鍵的破壞，操作多在pH值4.0-10.0的條件下進行。防止基因組DNA的生物降解，主要是DNase降解基因組DNA，DNase需二價金屬陽離子如Mg2+等的激活，可用EDTA等金屬離子螯合劑螯合Mg2+以YZDNase的活性。減少物理因素對DNA的降解，物理降解因素主要包括機械剪切力（如劇烈振蕩、攪拌等），細胞突然置于低滲液中導(dǎo)致的細胞爆炸式破裂，DNase大量釋放，樣品反復(fù)凍融和高溫等。4、DNA洗脫收集DNA的洗脫效率取決于以下重要因素：洗脫液成分：采用硅基質(zhì)膜吸附的DNA，可將DNA在低鹽高pH值條件下洗脫下來。pH值在7.0-8.5之間洗脫效率較高，pH值低于7.0則洗脫效率很低。一般基因組提取試劑盒中的洗脫緩沖液就是TE（pH8.0），既為DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫下來提供良好的pH環(huán)境，其中的EDTA又能保證DNA不被DNase降解，同時由于EDTA濃度非常低，對核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶的影響非常微弱，不影響后續(xù)實驗，可放心使用。洗脫液體積：當洗脫液體積小于30ul時，洗脫效率很低且不穩(wěn)定；當洗脫液體積在50-200ul時，洗脫效率穩(wěn)定在80-90，并可保證得到Zda產(chǎn)量，因此洗脫液體積不能小于30ul。加洗脫液部位：100-200ul洗脫液能完全覆蓋硅基質(zhì)膜，DNA的洗脫量可得到保證，但當洗脫液體積較少如30-50ul時，須在硅基質(zhì)膜中間部分懸空滴加洗脫液，以確保少量的洗脫液能完全覆蓋硅膠膜。洗脫液的溫度：在加洗脫液之前，先將洗脫液在60-75℃水浴中預(yù)熱10分鐘，可有效提高DNA的洗脫效率。洗脫時間和次數(shù)：加入預(yù)熱的洗脫液后，可在室溫放置2-5分鐘使DNA完全溶解在洗脫液里通過離心而洗脫下來。同時可進行二次或三次洗脫，即將前次洗脫下來的洗脫液再上柱、離心，使前次沒有洗脫下來的DNA再次溶解在洗脫液里，從而提高DNA的產(chǎn)量。5、DNA的定量及檢測提取得到的DNA*片段需從分子質(zhì)量、濃度、純度等方面進行檢測，從而判斷DNA質(zhì)量。用瓊脂糖凝膠電泳分析DNA分子質(zhì)量：得到的基因組DNA*片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。Solarbio公司的基因組DNA提取試劑盒提取的不同材料基因組DNA*片段大小一般在50kb左右，能很好地滿足后續(xù)試驗的要求。通常用瓊脂糖凝膠電泳分析DNA分子質(zhì)量時，以溴酚藍為示蹤染料，EB染色，紫外觀察，并與DNA分子量標準對照即可判斷所提DNA的平均分子量。高質(zhì)量的基因組DNA應(yīng)顯示為單一條帶，如DNA降解則表現(xiàn)為彌散條帶。用紫外分光光度計檢測DNA濃度和純度：濃度測定：DNA在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當于大約50ug/ml雙鏈DNA。以下簡單介紹OD260的測定方法：所提基因組DNA樣品=100ul進行OD260值測定的待測樣品=20ul所提基因組DNA樣品+180ulTE=200ulDNA稀釋倍數(shù)=200ul/20ul=10倍如200ul待測樣品OD260值=0.2待測樣品濃度（即100ul基因組DNA樣品濃度）=50ug/ml×OD260值×稀釋倍數(shù)=100ug/ml所提100ul基因組DNA樣品總量=100ug/ml×100ul=10ugDNA純度測定：一般用OD260/OD280值檢測DNA樣品的純度。正常OD260/OD280值約為1.7-1.9，說明DNA純度較好；若OD260/OD280值小于1.7，說明可能有蛋白污染；若OD260/OD280值大于2.0，說明可能有RNA污染或DNA已經(jīng)降解。注：因為pH值和離子會影響光吸收值，因此洗脫時如不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，OD260/OD280值會偏低，但并不表示純度低。6、DNA的儲存儲存溶液：DNA為兩性解離分子，在堿性條件下較穩(wěn)定，因此一般用TE（pH8.0）保存。TE的成分為：10mMTris-HCl（Tris與鹽酸形成強的緩沖對）；1mMEDTA（乙二胺四乙酸，能螯合二價金屬陽離子，YZDNase的活性）；pH8.0（堿性條件可減少DNA的脫氨作用，防止降解）。ddH2O的正常pH值為7.0，可作為DNA的儲存液，但有些實驗室制備的ddH2O呈酸性（pH值小于7.0），這不僅影響DNA的洗脫效率，而且導(dǎo)致長時間保存的DNA容易發(fā)生降解。因此建議用TE作為DNA的長期儲存液。儲存條件：為避免DNA降解，提取的DNA應(yīng)先進行分裝，然后置于-20℃或-70℃保存，同時注意避免反復(fù)凍融造成DNA降解。[詳細]

  2024-09-29 11:52

  產(chǎn)品樣冊

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• 針對柴油類有機物的EPA 方法8015C

  EPA8015C是一套用于確定各種無鹵揮發(fā)性有機化合物、半揮發(fā)性有機化合物和石油烴的濃度的氣相色譜法。在這份應(yīng)用報告中，我們采用Clarus690GC分析石油烴，特別是柴油類有機物（DRO）。Clarus690GC采用寬量程氫火焰離子化檢測器（WR-FID），WR-FID所具有的大動態(tài)范圍能夠在單次色譜運行過程中檢測高濃度和低濃度的分析物。TotalChrom色譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)（CDS）軟件將計算nC10和nC28之間的峰面積，從而準確地量化每個樣品當中的DRO濃度。寬量程FID能夠更靈敏地檢測分析物，廣泛地滿足報告限度要求。[詳細]

  2018-08-17 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 針對大型客車防雨密封性的試驗方法

  大型客車在做防雨密封性的試驗，必須要有相關(guān)國家標注來進行對比。看是否能符合防雨密封性的特征，敬請大家關(guān)注相關(guān)國標的改動及其試驗方法。[詳細]

  2018-10-13 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 高通量組織研磨儀產(chǎn)品樣冊

  高通量組織研磨儀產(chǎn)品樣冊[詳細]

  2016-10-20 09:08

  產(chǎn)品樣冊

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• 血液基因組DNA提取試劑盒

  資料名稱：血液基因組DNA提取試劑盒 適用產(chǎn)品：使用本試劑盒回收的D N A 可適用于各種常規(guī)操作， 包括酶切、P C R 、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實驗。 正文語言：中文 文件編號：BP024-1 文件版本：1.0 文件格式：PDF 文件大?。?.9MB 內(nèi)容簡介：本試劑盒采用酶裂解法裂解血液樣本，適用于從新鮮、加抗凝血劑或冷凍的血液樣本中提取基因組DNA。離心吸附柱采用的硅基質(zhì)材料為本公司特有新型材料，可特異性、GX、專一吸附DNA，可Zda限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。[詳細]

  2018-05-23 09:43

  其它

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• 土壤基因組DNA提取試劑盒

  資料名稱：土壤基因組DNA提取試劑盒 適用產(chǎn)品：適用于新鮮的土壤樣本（如花盆土、農(nóng)田土、花壇土、濕泥、河流沉積物等）中提取基因組DNA。 正文語言：中文 文件編號：BP028-1 文件版本：1.0 文件格式：PDF 文件大小：0.8MB 內(nèi)容簡介：本試劑盒采用獨特的硅膠膜吸附技術(shù)，能夠快速提取和純化土壤基因組DNA，適用于新采取的土壤樣本，如農(nóng)田土、花壇土、濕泥等。本試劑盒采用獨特的緩沖液系統(tǒng)，可將土壤樣本中的腐殖酸等雜質(zhì)盡量去除，經(jīng)裂解后的DNA可GX結(jié)合到吸附柱上，殘留的少量雜質(zhì)可使用漂洗液進行去除，Z后使用洗脫液進行洗脫收集，獲得高純度的基因組DNA。用本試劑盒提取的土壤基因組DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建等分子生物學(xué)下游實驗。[詳細]

  2018-05-23 16:29

  其它

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• 植物基因組DNA提取試劑盒

  資料名稱：植物基因組DNA提取試劑盒 適用產(chǎn)品：本試劑盒采用獨特的硅膠膜吸附技術(shù)，能夠快速提取植物基因組DNA，適用于從植物組織細胞中提取總基因組DNA，提取的基因組DNAZda長度可達到50 kb。 正文語言：中文 文件編號：BP029-1 文件版本：1.0 文件格式：PDF 文件大?。?.9MB 內(nèi)容簡介：本試劑盒采用獨特的硅膠膜吸附技術(shù)，能夠快速提取植物基因組DNA，適用于從植物組織細胞中提取總基因組DNA，提取的基因組DNAZda長度可達到50 kb。本試劑盒采用獨特的緩沖液系統(tǒng)，可Zda限度的去除雜蛋白及其他有機物等雜質(zhì)，經(jīng)裂解后的DNA可GX結(jié)合到吸附柱上，殘留的少量雜質(zhì)可使用漂洗液進行去除，Z后使用洗脫液進行洗脫收集，獲得高純度的基因組DNA。用本試劑盒提取的植物基因組DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建等分子生物學(xué)下游實驗。[詳細]

  2018-05-23 16:30

  其它

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• 土壤基因組DNA提取試劑盒

  資料名稱：土壤基因組DNA提取試劑盒 適用產(chǎn)品：適用于新鮮的土壤樣本（如花盆土、農(nóng)田土、花壇土、濕泥、河流沉積物等）中提取基因組DNA。 正文語言：中文 文件編號：BP028-1 文件版本：1.0 文件格式：PDF 文件大?。?.8MB 內(nèi)容簡介：本試劑盒采用獨特的硅膠膜吸附技術(shù)，能夠快速提取和純化土壤基因組DNA，適用于新采取的土壤樣本，如農(nóng)田土、花壇土、濕泥等。本試劑盒采用獨特的緩沖液系統(tǒng)，可將土壤樣本中的腐殖酸等雜質(zhì)盡量去除，經(jīng)裂解后的DNA可GX結(jié)合到吸附柱上，殘留的少量雜質(zhì)可使用漂洗液進行去除，Z后使用洗脫液進行洗脫收集，獲得高純度的基因組DNA。用本試劑盒提取的土壤基因組DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建等分子生物學(xué)下游實驗。[詳細]

  2018-05-24 10:22

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