本文由 上海實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司ap 整理匯編

2015-07-08 00:00 436閱讀次數(shù)

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  2018-10-23 10:30

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  大鼠（Rat）3-硝基酪氨酸（3-NTELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被3-硝基酪氨酸（3-NT）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的3-硝基酪氨酸（3-NT）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。3.細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。5.保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品自備物品自備物品自備物品1.酶標(biāo)儀（450nm）2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒溫箱操作注意事項(xiàng)1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。3.濃度為0的S0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，Z終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。5.所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板12孔×8條12孔×4條無標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、15、30、60、120、240nmol/L試劑的準(zhǔn)備20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。2.自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；3.樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。結(jié)果判斷繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。試劑盒性能試劑盒性能試劑盒性能試劑盒性能1.準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。2.靈敏度：Zdi檢測濃度小于1.0nmol/L。3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。5.貯藏：2-8℃，避光防潮保存。6.有效期：6個月免責(zé)聲明1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。2.嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。[詳細(xì)]

  2024-09-30 15:02

  產(chǎn)品樣冊

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• 赭曲霉素（Ochratoxin）試劑盒使用說明書

  　　　　　　赭曲霉素（Ochratoxin）試劑盒使用說明書使用目的：本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織（如雞、牛肉和豬肉），雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中赭曲霉素（Ochratoxin）殘留的定量檢測。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采用直接競爭ELISA方法，在微孔板包被有赭曲霉素（Ochratoxin）偶聯(lián)抗原，加入赭曲霉素（Ochratoxin）標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離赭曲霉素（Ochratoxin）與微孔條上預(yù)包被的赭曲霉素（Ochratoxin）偶聯(lián)抗原互相競爭抗赭曲霉素（Ochratoxin）抗體酶標(biāo)記物，用TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測，吸光值與樣品中赭曲霉素（Ochratoxin）含量成反比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中赭曲霉素（Ochratoxin）的含量。試劑盒組成1預(yù)包被的赭曲霉素（Ochratoxin）偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板：1塊（12孔×8條）。2赭曲霉素（Ochratoxin）標(biāo)準(zhǔn)品：6瓶（1ml/瓶），含量分別是：0μg/ml，0.01μg/ml,0.02μg/ml,0.04μg/ml,0.08μg/ml,0.16μg/ml3抗赭曲霉素（Ochratoxin）抗體酶結(jié)合物：1瓶（6ml）。4顯色液A：1瓶（6ml）。5顯色液B：1瓶（6ml）。6終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。7樣本稀釋液：1瓶（10×,6ml），用于樣品稀釋用。8濃縮洗滌液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。貯存1試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍2未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存注意事項(xiàng)1使用試劑盒前請仔細(xì)閱讀說明書。2不要使用過期試劑盒。3試劑盒使用前，將試劑恢復(fù)至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時。4標(biāo)準(zhǔn)品中含有，使用時應(yīng)特別注意，操作時應(yīng)帶手套。5終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗(yàn)結(jié)果。7不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。8稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果9混合試劑時應(yīng)避免起泡。樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴(yán)格按說明書操作，提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋，否則會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存）1取10g粉碎的樣品，加20ml70%甲醇溶液2QL振蕩3分鐘3用WhatmanNo1濾紙過濾4取25l處理后的樣品，加入25l樣本稀釋液于反應(yīng)孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）酶免分析步驟1實(shí)驗(yàn)須知2實(shí)驗(yàn)開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（25±2℃），時間約2小時?；販刂潦覝兀?5±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的極ng確度和準(zhǔn)確度。3使用后請立即將試劑放回2~8℃保存4請不要改變分析程序5請使用極ng確的微量移液器6操作一旦開始，請不要中斷任何程序7ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序，請嚴(yán)格按照要求操作8為避免交叉污染，每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣9加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面10分析步驟11預(yù)先進(jìn)行編號，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，推薦進(jìn)行雙孔檢測12取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存13樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（10×）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）14在B0孔中加入50l0.0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液15在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液16在各樣品孔中加入50l樣品溶液17在所有孔中加入50l的抗B1抗體酶結(jié)合物18輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘。1937℃溫浴30min（溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差）20甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，Z后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。21反應(yīng)22洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50l顯色液A，再加50l顯色液B；輕微晃動反應(yīng)板使之徹底混勻2337℃溫浴10min24每孔中加入50l終止液，混勻25在450nm下檢測吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司是一家生物高新技術(shù)企業(yè)，主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主要銷售ELISA試劑盒，標(biāo)準(zhǔn)品對照品，血清，抗體，生物試劑、培養(yǎng)基等科研試劑，保證質(zhì)量，價(jià)格合理，歡迎您來電咨詢（021-6051734813817140470）。公司網(wǎng)址：http://www.gbdelisa.com[詳細(xì)]

  2024-09-29 11:12

  產(chǎn)品樣冊

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• 大鼠3-硝基酪氨酸（3-NT）ELISA試劑盒說明書

  電話：021-6533363955229872網(wǎng)址：http://www.westang.com大鼠3-硝基酪氨酸（3-NT）ELISA試劑盒（用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi)）原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗大鼠3-NT單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的3-NT與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗大鼠3-NT，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，Z后加終止液硫酸，在450nm處測OD值，3-NT濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中3-NT濃度。試劑盒組成（2-8℃保存）酶標(biāo)板（CoatedWells）96孔酶標(biāo)抗體工作液（EnzymeConjugate）12ml10×標(biāo)本稀釋液（SampleBuffer）12ml20×濃縮洗滌液（WashBuffer）50ml標(biāo)準(zhǔn)品（Standards）：200ug/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗體工作液（BiotinylatedAntibody）12ml終止液（StopSolution）12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成200ug/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，**管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入200ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。4.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）檢測程序1.加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板：同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0ug/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)3-NT含量。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的3-NT檢測濃度小于0.2ug/ml。2.特異性：可同時檢測重組或天然的大鼠3-NT。不與大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10％。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔，每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！[詳細(xì)]

  2018-09-13 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 牛3-硝基酪氨酸（3-NT）elisa試劑盒說明書

  牛3-硝基酪氨酸(3-NT)elisa試劑盒說明書本試劑盒僅供研究使用檢測范圍：96T9nmol/L-340nmol/L使用目的：本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中3-硝基酪氨酸(3-NT)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中牛3-硝基酪氨酸(3-NT)水平。用純化的牛3-硝基酪氨酸(3-NT)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入3-硝基酪氨酸(3-NT)，再與HRP標(biāo)記的3-硝基酪氨酸(3-NT)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的3-硝基酪氨酸(3-NT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中牛3-硝基酪氨酸(3-NT)濃度。牛3-硝基酪氨酸(3-NT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（640nmol/L）0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標(biāo)本要求1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過氧化物酶的（HRP）活性。牛3-硝基酪氨酸(3-NT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。320nmol/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液160nmol/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150l的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液80nmol/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150l的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液40nmol/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150l的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20nmol/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150l的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50l，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50l，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。牛3-硝基酪氨酸(3-NT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項(xiàng)1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴(yán)格按照牛3-硝基酪氨酸(3-NT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月[詳細(xì)]

  2018-11-22 10:00

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