本文由 北京易科泰生態(tài)技術有限公司 整理匯編

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  FluorCam葉綠素熒光成像技術應用案例（第四期）FluorCam葉綠素熒光成像技術在國內的應用FluorCam葉綠素熒光成像技術作為Z早實用化的葉綠素熒光成像技術，是目前世界上Zquan威、使用范圍Z廣、種類Z全面、發(fā)表論文Z多的葉綠素熒光成像技術。FluorCam已經發(fā)展出十幾個型號，涵蓋了從葉綠體、單個細胞、微藻到葉片、果實、花朵，乃至整株植物和植物灌層，幾乎可以測量所有的植物樣品，甚至包括含有葉綠素的微生物和動物。易科泰Ecolab生態(tài)實驗室總結了FluorCam相關SCI參考文獻近500篇，可聯系Ecolab生態(tài)實驗室（eco-lab@eco-tech.com.cn,info@eco-lab.cn）索取文獻目錄及全文。了解FluorCam葉綠素熒光成像技術詳情請點擊以下鏈接：FluorCam葉綠素熒光成像技術FluorCam葉綠素熒光成像技術Z早在21世紀初引進到國內，但一直到2010年后國內的科學家才在國際交流中逐漸發(fā)現這項技術的巨大價值，在短短數年中也利用這一技術發(fā)表了幾十篇高水平SCI文獻。本期主要介紹目前FluorCam葉綠素熒光成像技術在國內的應用情況。一、植物光合生理研究葉綠素熒光可以直接反應植物光系統的生理狀況，因此從葉綠素熒光技術發(fā)明之初，就被用于各種植物光合生理研究。山東農科院使用FluorCam葉綠素熒光成像技術研究了小麥旗葉與外露花梗光合能力的差異[1]。研究中發(fā)現在小麥生長前中期，旗葉與外露花梗的Zda光化學效率Fv/Fm和量子產額ΦPSII基本相同。但在生長后期，旗葉的光合能力顯著下降，而花梗光合能力的下降幅度要小于旗葉（圖1）。這證明了在生長后期的灌漿期，花梗對維持籽粒的生長更為重要。之后，他們又研究了小麥葉片和穎片季節(jié)衰老過程中以及穎果發(fā)育過程中光合特性的變化[2；3，圖2]。圖1.不同生長階段的旗葉（A，C）和外露花梗（B，D）的Fv/Fm（A，B）和ΦPSII（C，D）典型葉綠素熒光成像圖圖2.不同生長期小麥葉片和穎片的Zda光化學效率Fv/Fm（A）、量子產額ΦPSII（B）和非光化學淬滅NPQ（C）的變化二、植物生物/非生物逆境脅迫與抗逆性研究由于幾乎所有種類的生物/非生物逆境脅迫都會影響到植物光合系統的正常生理功能，而葉綠素熒光技術是公認的植物逆境光合功能研究Z靈敏的無損探針。因此通過FluorCam葉綠素熒光成像技術不但能反映植物受脅迫程度和抗逆能力的差異，而且能指明脅迫影響光合系統的具體機理過程。1.養(yǎng)分虧缺山東農業(yè)大學使用FluorCam研究了兩種玉米在不同施氮條件下光合特性的變化[4]。研究發(fā)現，施加氮肥使兩個品種的Zda光化學效率Fv/Fm和量子產額ΦPSII都有所升高，而ΦPSII的升高幅度要高于Fv/Fm，表明氮肥對PSII的實際功能活性更有作用。同時玉米品種HZ4熒光參數的升高幅度也要高于Q319，這應該是由于HZ4是一種低N效率的非持綠玉米（圖3）。圖3.氮對兩種玉米品種造成影響的葉綠素熒光成像圖2.鹽堿脅迫山東農業(yè)大學使用FluorCam研究發(fā)現S-adenosyl-L-methionine(SAM)基因過表達會顯著增加在堿脅迫下的番茄的光合能力[5]（圖4）。圖4.野生型和轉基因番茄葉片在堿脅迫下的Fv/Fm熒光成像圖3.水分脅迫山東農科院研究了不同灌溉方式對小麥光合特性的影響[6]。研究發(fā)現比起傳統的漫灌，溝灌條件下的小麥葉片有更高的Zda光化學效率Fv/Fm、量子產額ΦPSII、光化學淬滅qP和更低的非光化學淬滅NPQ（圖5）。這說明溝灌給小麥提供了更好的土壤水分條件，從而使小麥葉片擁有了更強的光化學活性。圖5.傳統漫灌和溝灌條件下小麥的Fv/Fm、ΦPSII、qP和NPQ熒光成像圖國內還有其他院校使用FluorCam開展了熱脅迫、病害、重金屬毒害、光質影響等多種脅迫研究[7；8；9；10]。三、植物光合基因組學與分子生物學研究植物光合作用可以說是植物對人類乃至整個生物圈Z重要的功能，一方面為其他生物直接或間接地提供能量和食物，另一方面也在地球碳氧循環(huán)中發(fā)揮關鍵性作用。因此，對植物光合作用功能基因的研究，一直是植物基因組學與分子生物學研究的重中之重。而葉綠素熒光能直接反映相關功能基因的表型變化，所以幾乎所有與光合基因相關的研究都要用葉綠素熒光技術來進行表型篩選、基因功能驗證等方面的工作。1.從光合表型到基因功能ZG科學院植物研究所張立新研究員是Z早將FluorCam葉綠素熒光成像技術引入國內的科學家。中科院植物所光生物學ZD實驗室是國內植物光合基因相關研究Z前沿的科研單位。FluorCam葉綠素熒光成像技術引入后就立刻用于了光合相關基因功能與表型研究。2006年，張立新研究團隊就使用FluorCam葉綠素熒光成像技術研究了擬南芥ppt1突變體光系統II光化學能力的變化，進而證明了磷酸鹽轉運蛋白對維持葉片生長后期正常光合作用的重要性[11]（圖6）。之后，植物所張立新團隊和彭連偉團隊都使用FluorCam發(fā)表了多篇植物光合基因相關文獻[12；13]。彭連偉在研究NADH脫氫酶復合體穩(wěn)定性時[14]，發(fā)現在50molphotons/m.s的光強下，lhca5lhca6pgr5、lhca6pgr5和crr4-2pgr5擬南芥突變體都產生了生長阻滯，并表現出了高葉綠素熒光（圖7A，B）。這表明了這些突變體的光合電子傳遞活性和NDH活性都受到了YZ。進一步分析不同光強下的ΦPSII，野生型、lhca5和lhca6突變體的ΦPSII水平是相近的，這表明Lhca5和Lhca6在光合電子傳遞中都不是必需的（圖7C）。而lhca6pgr5和lhca5lhca6pgr5的ΦPSII水平則顯著降低，通過其他結果比對發(fā)現這是由于在低光照條件下，這些突變體的PSI就受到了光YZ并出現了氧化應激反應。在后續(xù)的研究中，彭連偉團隊還使用FluorCam發(fā)現了NdhV亞基對NADH脫氫酶復合體穩(wěn)定性的重要作用[15]。其團隊的張琳博士利用FluorCam封閉式熒光成像系統，從T-DNA插入或EMS誘變的擬南芥突變體庫中篩選光合電子傳遞調控的突變體，并ZD研究了bfa3的功能，相關結果于2016年4月發(fā)表在國際學術期刊PlantPhysiology[16]。憑借這一科研發(fā)現，張琳博士榮獲易科泰FluorCam葉綠素熒光成像論文一等獎。圖6.ppt1突變體和野生型的表型和葉綠素熒光成像圖圖7.lhca5lhca6pgr5三突變體葉綠素熒光分析，A.可見表型；B.葉綠素熒光表型；C.ΦPSII測量國內另一個應用FluorCam技術進行光合基因研究較為出色的單位是西北農林科技大學。他們引進儀器技術雖然較晚，但在購置FluorCam開放式葉綠素熒光成像系統后很快就發(fā)表了2篇高水平文章，研究了多個關于擬南芥葉綠體發(fā)育和葉片顏色相關的基因功能[17；18]（圖8）。圖8.擬南芥野生型與GTPase家族基因突變株的葉綠素熒光成像圖上海生命科學研究院青年研究組長、博士生導師ChanhongKim在蘇黎世聯邦理工學院、康奈爾大學博伊斯湯普森研究所工作期間就已經使用FluorCam葉綠素熒光成像系統進行了大量的研究工作并在PNAS、PlantCell發(fā)表多篇相關文獻。2014年，ChanhongKim到上海生命科學研究院工作后立刻購置了一臺FluorCam封閉式葉綠素熒光/GFP成像系統。他用這一系統一方面進行GFP表達植株的快速篩選（圖9），另一方面進行單線態(tài)氧和EXECUTER1介導信號在基粒中發(fā)生過程的研究，這一Zxin研究成果發(fā)表同樣在2016年PNAS上[19]。沈陽農業(yè)大學也使用FluorCam技術開展了大白菜生長緩慢、類囊體減少的突變體光和特性的研究[20]。2.從基因功能到光合表型在有的研究中，光合基因功能是通過其他方法基本上確定的。但這個基因表達出的表型是否符合預期，還是必須通過FluorCam葉綠素熒光成像技術進行光合表型方面的驗證。ZG農業(yè)大學與易科泰生態(tài)技術有限公司EcoLab生態(tài)實驗室合作，從黃瓜中克隆了紫黃質脫環(huán)氧化酶基因（CsVDE），再將這一基因的反義片段轉基因到擬南芥中[21]。發(fā)現在高光脅迫條件下，轉基因擬南芥的葉綠素熒光參數非光化學淬滅（NPQ）比野生型顯著降低，這證明了CsVDE在葉黃素循環(huán)和PSII光YZ敏感性上的重要作用（圖10）。圖10.野生型與轉基因擬南芥在高光條件下的NPQ成像圖圖9.使用FluorCam獲得的GFP成像圖，圖中發(fā)出明亮顏色的擬南芥植株即為表達了GFP的植株，其顏色越偏向紅色，則表明其表達的GFP更多，暗藍色的植株即為沒有表達GFP的植株四、國際合作由于FluorCam葉綠素熒光成像技術引進到國內的時間較晚，國內科學家對這一技術的運用程度還低于歐美同行。因此，很多國內的科學家目前是與國際上的知名科研院所開展合作，使用FluorCam進行研究工作并發(fā)表文章。比如浙江大學與德國康斯坦茨大學合作發(fā)表的使用FKM多光譜熒光動態(tài)顯微成像系統（此系統應用了FluorCam顯微成像技術，康斯坦茨大學Kupper教授和PSI公司合作完善了這一技術，是國際上對這一技術應用Z前沿的學者）研究了銅對海州香薷Elsholtziasplendens光合系統的毒害作用[22]；華中農業(yè)大學、江西農業(yè)大學與德國洪堡大學等單位合作研究了病毒介導的豌豆基因沉默對四吡咯生物合成、葉綠體發(fā)育等造成的影響[23]；內蒙古農業(yè)大學與捷克科學院等單位合作研究的芽單胞菌門含有葉綠體的稀有細菌的光合特性和相關基因研究[24；25]；江蘇農科院與英國諾丁漢大學合作研究的兩種病原菌對不同小麥品系的侵害性[26]等。參考文獻：1.KongLA,etal.2010.Thestructuralandphotosyntheticcharacteristicsoftheexposedpeduncleofwheat(TriticumaestivumL.):animportantphotosynthatesourceforgrainfil領.BMCplantbiology10,1412.KongLA,etal.2015.Photochemicalandantioxidativeresponsesoftheglumeandflagleaftoseasonalsenescenceinwheat.FrontiersinPlantScience,6:358.doi:10.3389/fpls.2015.003583.KongLA,etal.2016.Comparisonofthephotosyntheticcharacteristicsinthepericarpandflagleavesduringwheat(TriticumaestivumL.)caryopsisdevelopment.Photosynthetica54(1),40-464.Li,G.etal.2012.Effectsofnitrogenonphotosyntheticcharacteristicsofleavesfromtwodifferentstay-greencorn(ZeamaysL.)varietiesatthegrain-fil領stage.Can.J.PlantSci.92,671-6805.Gong,B.etal.2014.OverexpressionofS-adenosyl-L-methioninesynthetaseincreasedtomatotolerancetoalkalistressthroughpolyaminemetabolism.PlantBiotechnologyJournal,12,6947086.KongLA,etal.2010.Arootzonesoilregimeofwheat:physiologicalandgrowthresponsestofurrowirrigationinraisedbedplantinginNorthernChina.AgronomyJournal102,1541627.FengB.etal.2014.EffectofHeatStressonthePhotosyntheticCharacteristicsinFlagLeavesattheGrainFil領StageofDifferentHeatResistantWinterWheatVarieties.JournalofAgronomyandCropScience200(2),1431558.周錦業(yè)，丁國昌，何荊洲，曹光球，李秀玲，卜朝陽.2015.不同光質對金線蓮組培苗葉綠素含量及葉綠素熒光參數的影響.農學學報5(5)，67-729.簡敏菲，汪斯琛，余厚平，李玲玉，簡美鋒，余guan軍．2016.Cd2+?Cu2+脅迫對黑藻（Hydrillaverticillata）的生長及光合熒光特性的影響.生態(tài)學報36(6)10.鄭國華,潘東明,牛先前&方樹民.2010.冰核細菌對低溫脅迫下枇杷光合參數和葉綠素熒光參數的影響.ZG生態(tài)農業(yè)學報18(6)，1251125511.MaJF,GuoJK,PengLW,ChenCY&ZhangLX,2006.DecreaseofphotosystemiiphotochemistryinArabidopsisppt1mutantisdependentonleafage.Journalofintegrativeplantbiology48,1409141412.SunXW,WangLY&ZhangLX,2007.InvolvementofDEG5andDEG8proteasesintheturnoverofthephotosystemIIreactioncenterD1proteinunderheatstressinArabidopsisthaliana.ChineseScienceBulletin52,1742174513.ChiW,etal.2008.ThepentratricopeptiderepeatproteinDELAYEDGREENING1isinvolvedintheregulationofearlychloroplastdevelopmentandchloroplastgeneexpressioninArabidopsis.Plantphysiology147,57358414.PengL,&Shikanai,T.2011.SupercomplexformationwithphotosystemIisrequiredforthestabilizationofthechloroplastNADHdehydrogenaselikecomplexinArabidopsis.Plantphysiology155,1629163915.FanX,etal.2015.TheNdhVsubunitisrequiredtostabilizethechloroplastNADHdehydrogenase-likecomplexinArabidopsis.ThePlantJournal,82,22123116.ZhangL,etal.2016.BiogenesisFactorRequiredForATPSynthase3FacilitatesAssemblyoftheChloroplastATPSynthaseComplex.PlantPhysiology171,1291-130617.QiY,etal.2016.APutativeChloroplastThylakoidMetalloproteaseVIRESCENT3RegulatesChloroplastDevelopmentinArabidopsisthaliana.TheJournalofBiologicalChemistry291,3319-333218.QiY,etal.2016.MutationsincircularlypermutedGTPasefamilygenesAtNOA1/RIF1/SVR10andBPG2suppressvar2-mediatedleafvariegationinArabidopsisthaliana.PhotosynthesisResearch127(3),355-36719.WangLS,etal.2016.Singletoxygen-andEXECUTER1-mediatedsigna領isinitiatedingranamarginsanddependsontheproteaseFtsH2.PNAS,DOI:10.1073/pnas.160356211320.ZhangL,etal.2016.BiogenesisFactorRequiredForATPSynthase3FacilitatesAssemblyoftheChloroplastATPSynthaseComplex.PlantPhysiology171,1291-130621.LiX,etal.2013.MolecularCloningandCharacterizationofViolaxanthinDeEpoxidase(CsVDE)inCucumber.PLoSONE8(5):1-1122.PengH,etal.2012.DifferencesincopperaccumulationandcopperstressbetweeneightpopulationsofHaumaniastrumkatangense,EnvironmentalandExperimentalBotany,79:58-6523.LuoT.etal.2013.Virus-inducedgenesilencingofpeaCHLIandCHLDaffectstetrapyrrolebiosynthesis,chloroplastdevelopmentandtheprimarymetabolicnetwork.PlantPhysiologyandBiochemistry65,172624.ZengY，etal.2014.Functionaltype2photosyntheticreactioncentersfoundintherarebacterialphylumGemmatimonadetes.PNAS,111(21),7795780025.ZengY,etal.2015.Characterizationofthemicroaerophilic,bacteriochlorophylla-containingbacteriumGemmatimonasphototrophicasp.nov.,andemendeddescriptionsofthegenusGemmatimonasandGemmatimonasaurantiaca.InternationalJournalofSystematicandEvolutionaryMicrobiology,DOI:10.1099/ijs.0.00027226.RenR,etal.2015.ComparativeaggressivenessofMicrodochiumnivaleandM.majusandevaluationofscreeningmethodsforFusariumseed領blightresistanceinwheatcultivars.EurJPlantPathol,141,281294[詳細]

  2018-09-19 10:00

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• 摩擦學與表面工程

  摩擦學與表面工程[詳細]

  2016-02-29 00:00

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  2024-09-11 17:49

  應用文章

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  黑莓富含天然色素、碳水化合物、SOD 果膠物質、多種維生素及 20 多種人體所需的氨基 酸、是一種“高營養(yǎng)、高抗性、無污染、純天然”的營養(yǎng)保健品，被聯合國糧農組織推薦為 當今國際第三代新型特種漿果品種。[詳細]

  2022-03-23 10:33

  其它

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• FluorCam模塊式植物表型成像技術方案

  FluorCam模塊式植物表型成像技術方案[詳細]

  2024-09-14 01:13

  應用文章

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• 蛋白質組學及研究技術路線

  蛋白質組學及研究技術路線[詳細]

  2024-09-17 02:02

  操作手冊

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• 植物組培架

  組培架[詳細]

  2024-09-12 14:17

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• 葉綠素測定儀/植物葉綠素檢測儀HAD-YL6

  葉綠素測定儀/植物葉綠素檢測儀型號:HAD-YL6綠素測定儀可以即時測量植物的葉綠素相對含量或“綠色程度”，植物葉片中的葉綠素含量指示了植物本身的狀況，長勢良好的植物的葉子會含有更多的葉綠素，葉綠素的含量與葉片中氮的含量有很密切的關系，因而葉綠素測量值還能說明植物真實的硝基需求量，通過這種儀器有利于合理施加氮肥，提高氮的利用率，并可保護環(huán)境（防止施加過多的氮肥而使環(huán)境特別是水源受到污染）測量原理：葉綠素測定儀通過測量葉片在兩種波長范圍內的透光系數來確定葉片當前葉綠素的相對數量,也就是在葉綠素選擇吸收特定波長光的兩個波長區(qū)域，根據葉片透射光的量來計算測量值。技術參數：功能特點測量時間快速LCD直接顯示葉綠素值儀器小巧便攜，可隨身攜帶到野外測量測量樣品各種植物葉片測量面積Ф10mm測量方式2波長光學濃度差方式感應器硅半導體光電二極管顯示方式測量值：3位數液晶顯示測量次數：2位數液晶顯示測量的Z小間隔小于2秒測量范圍0.0-99.9SPAD精度±1.0SPAD(室溫下，SPAD值介乎0-50)重復性±0.2SPAD單位以內(SPAD值介乎0-50)重現性±0.5SPAD單位以內(SPAD值介乎0-50)操作溫度0～50℃儲存溫度-20~～55℃數據存儲SD卡存儲：2G電源充電鋰電池待機時間充一次電正常情況可用七天[詳細]

  2018-09-24 10:01

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