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ELISA試劑盒實驗中的封閉液小知識
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2024-09-11 17:52 514閱讀次數(shù)
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ELISA試劑盒實驗中的封閉液小知識
- ELISA試劑盒實驗中的封閉液小知識[詳細]
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2024-09-11 17:52
實驗操作
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Elisa實驗中的封閉液小知識
- Elisa試驗中我們會注意到Elisa試劑盒說明書上寫到封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點,那首先了解一下蔗糖封閉的原理:1、Elisa實驗中,蔗糖本身沒有封閉作用。2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。3、加蔗糖的主要目的是保護Elisa板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護劑”的作用。4、蔗糖溶液一般在Elisa板子經(jīng)過BSA封閉后加,當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理。至于哪一種更好需要你實驗后來驗證,但多數(shù)選擇前者。封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可),0.4%的明膠,但是實驗表明前者比較好,后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上,結(jié)合抗體或抗原的時候就不會產(chǎn)生非特異結(jié)合了,不會影響實驗的準(zhǔn)確度。tween的作用:雖然不能單獨封閉,但和BSA在封閉時會起到清洗非特異性結(jié)合或結(jié)合不牢固的蛋白的作用,假如抗體包被在板上會出現(xiàn)YY-附件:Elisa實驗中緩沖溶液等試劑的配置Elisa實驗中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),簡單介紹一下Elisa試劑以及各種溶液的配置方法:(1) Elisa實驗包被緩沖液;(2) Elisa實驗洗滌緩沖液;(3) Elisa實驗稀釋液;(4)Elisa實驗終止液;(5)Elisa底物緩沖液;(6)Elisa實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液;(7) Elisa實驗ABTS使用液;(8)ELISC。ELISA試驗中的試劑(1) Elisa實驗包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):NaHCO31.59克NaHCO3 2.93克加蒸餾水至1000ml(2) Elisa實驗洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15MKH2PO4 0.2克Na2HPO412H2O 2.9克NaCl 8.0克KCl 0.2克Tween-20 0.05% 0.5ml加蒸餾水至1000ml(3) Elisa實驗稀釋液:牛血清白蛋白(BSA)0.1克加洗滌緩沖液至100ml或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。(4) Elisa實驗終止液(2M H2SO4):蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。(5) Elisa底物緩沖液(PH5.0磷酸檸檬酸):0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml0.1M檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml加蒸餾水50ml。(6) Elisa實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml底物緩沖液(PH5.5) 10ml0.75%H2O232μl(7) Elisa實驗ABTS使用液:ABTS 0.5mg底物緩沖液(PH5.5) 1ml3%H2O22μl(8)Elisa實驗封閉液:牛血清白蛋白(BSA)5克加洗滌緩沖液至100ml。值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉,不適合長期保存。為了保證Elisa實驗的準(zhǔn)確性,實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要極ng確,將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標(biāo)孔,嚴(yán)防交叉污染。[詳細]
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- FIB-SEM 雙束電鏡自上世紀(jì)九十年代問世以來就收到材料研究工作者的青睞,尤其是對于半
導(dǎo)體領(lǐng)域。在 1990 年 Orsay Physics 就為 IBM 研制出了世界上DY臺 FIB-SEM 雙束系統(tǒng)。所
謂的 FIB-SEM 雙束電鏡就是在掃描電鏡的基礎(chǔ)上增加了聚焦離子槍(FIB)。因為 FIB 具備微區(qū)
加工能力,雙束電鏡不僅能夠觀察和分析樣品的表面特征,同時可以利用離子槍的切割能力,觀
察和分析樣品表層下面的微區(qū)特征;因此 FIB 和 SEM 的結(jié)合,發(fā)展成為一種功能更加全面的材料微區(qū)分析手段[詳細]
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