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天然質(zhì)譜法對(duì)半胱氨酸連接的抗體 藥物偶聯(lián)物及其藥物/抗體比率進(jìn)行測(cè)定
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本文由 安捷倫科技(中國(guó))有限公司 整理匯編
2016-08-08 00:00 574閱讀次數(shù)
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本文以半胱氨酸連接的抗體藥物偶聯(lián)物 (Antibody-Drug Conjugate, ADC) 為研究對(duì)象,使用天然質(zhì)譜法,通過(guò) Agilent 6530 Q-TOF LC/MS 檢測(cè) ADC 的完整分子量,并使用安捷倫 DAR 計(jì)算器軟件 (Agilent DAR Calculator) 計(jì)算 ADC 的加權(quán)平均藥物/抗體比率(Drug to Antibody Ratio,DAR)。
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天然質(zhì)譜法對(duì)半胱氨酸連接的抗體 藥物偶聯(lián)物及其藥物/抗體比率進(jìn)行測(cè)定
- 本文以半胱氨酸連接的抗體藥物偶聯(lián)物 (Antibody-Drug Conjugate, ADC) 為研究對(duì)象,使用天然質(zhì)譜法,通過(guò) Agilent 6530 Q-TOF LC/MS 檢測(cè) ADC 的完整分子量,并使用安捷倫 DAR 計(jì)算器軟件 (Agilent DAR Calculator) 計(jì)算 ADC 的加權(quán)平均藥物/抗體比率(Drug to Antibody Ratio,DAR)。[詳細(xì)]
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2016-08-08 00:00
專利
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抗體藥物偶聯(lián)物 (ADC) 的藥物/抗體比率 (DAR) 計(jì)算
- 抗體藥物偶聯(lián)物 (ADC) 是制藥公司藥物開(kāi)發(fā)途徑中快速發(fā)展的一類新型生物ZL藥物。ADC 的制備方法是通過(guò)化學(xué)方法將具有生物活性的小分子藥物與單克隆抗體相連。ADC 通過(guò)結(jié)合 GX細(xì)胞毒性藥物與靶標(biāo)特異性抗體將細(xì)胞毒性藥物直接送達(dá)病變組織,同時(shí)限制藥物在非 目標(biāo)組織中的毒性。 藥物/抗體比率 (DAR) 是抗體所連接藥物數(shù)量的平均值,它是 ADC 的重要屬性。由于低載藥 量會(huì)降低效力,而高載藥量則會(huì)對(duì)藥代動(dòng)力學(xué) (PK)1 和毒性產(chǎn)生負(fù)面影響,因此 DAR 值能夠 對(duì)藥效產(chǎn)生影響。目前的偶聯(lián)化學(xué)方法有賴氨酸側(cè)鏈酰胺化或半胱氨酸鏈間二硫鍵還原,載 藥量通常為 0 ~ 8 個(gè)藥物分子 (D0 ~ D8)/抗體。[詳細(xì)]
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2020-05-08 14:50
應(yīng)用文章
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UHPLC/Q-TOF 聯(lián)用系統(tǒng)測(cè)定抗體藥 物偶聯(lián)物 (ADC) 的藥物/抗體比率 (DAR)
- 本文以半胱氨酸連接的抗體藥物偶聯(lián)物 (Antibody-Drug Conjugate, ADC) 為研究對(duì)象,使用連接
PLRP-S 反相液相色譜柱的 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)分離還原的輕鏈、重鏈和相對(duì)應(yīng)連接藥物的輕重鏈,并通過(guò) Agilent 6530 高分辨率四極桿飛行時(shí)間 (Q-TOF) 液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)對(duì)各個(gè)色譜峰進(jìn)行鑒定。通過(guò)積分處理紫外吸收?qǐng)D譜中各輕重鏈的峰面積百分比,結(jié)合各個(gè)峰的偶聯(lián)藥物數(shù)目,計(jì)算 ADC 的加權(quán)平均藥物/抗體比率 (Drug to Antibody Ratio, DAR)。同時(shí)使用了安捷倫 DAR 計(jì)算器 (Agilent DARCalculator) 對(duì)質(zhì)譜解卷積結(jié)果進(jìn)行 DAR 值計(jì)算,所得結(jié)果與紫外吸收?qǐng)D譜計(jì)算所得結(jié)果相同。[詳細(xì)]
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2024-09-20 13:30
選購(gòu)指南
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疏水色譜法對(duì)抗體偶聯(lián)藥物的DAR分析
- 疏水色譜法對(duì)抗體偶聯(lián)藥物的DAR分析[詳細(xì)]
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2014-10-10 00:00
操作手冊(cè)
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Orbitrap高分辨質(zhì)譜在抗體偶聯(lián)藥物質(zhì)量分析中的應(yīng)用
- 根據(jù)抗體偶聯(lián)藥物的偶聯(lián)方式可分為非靶向共價(jià)偶聯(lián)(如賴氨酸的氨基偶聯(lián))、半胱氨酸巰基偶聯(lián)(重鏈間靠非共價(jià)鍵結(jié)合)、定點(diǎn)氨基酸共價(jià)偶聯(lián)、N- 糖基化偶聯(lián)。[詳細(xì)]
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2025-08-12 15:43
產(chǎn)品樣冊(cè)
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Agilent 6530 Q-TOF 對(duì)單克隆抗體 藥物的二硫鍵連接進(jìn)行確認(rèn)
- 本文介紹了使用 Agilent 6530 Q-TOF 采集肽段數(shù)據(jù),采用整合有 BioConfirm 的 MassHunter 定性軟件,通過(guò)軟件中的蛋白酶解產(chǎn)物比較功能 (Compare Protein Digest Files),實(shí)現(xiàn)了對(duì)單克隆抗體藥物中二硫鍵連接的確證。此方法無(wú)需對(duì)樣品進(jìn)行額外的標(biāo)記,僅通過(guò)對(duì)還原和非還原組樣品的一級(jí)質(zhì)譜進(jìn)行比對(duì),即可實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品二硫鍵連接的確認(rèn)。[詳細(xì)]
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2024-09-20 03:43
實(shí)驗(yàn)操作
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藥物溶出度的測(cè)定方法及其進(jìn)展
- 藥物溶出度的測(cè)定方法及其進(jìn)展[詳細(xì)]
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2007-03-04 00:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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SFE在天然藥物方面的應(yīng)用
- SFE在天然藥物方面的應(yīng)用[詳細(xì)]
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2024-09-26 01:25
課件
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人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體試劑盒使用方法
- 檢測(cè)范圍:96T20pg/ml-480pg/ml使用目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)水平。用純化的人抗雙鏈DNA/天然DNA(dsDNA)抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA),再與HRP標(biāo)記的人抗雙鏈DNA/天然DNA(dsDNA)抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(960pg/ml)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說(shuō)明書(shū)1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。480pg/ml5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液240pg/ml4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液120pg/ml3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液60pg/ml2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液30pg/ml1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。[詳細(xì)]
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2018-10-03 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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天然藥物成分常用提取分離系統(tǒng)介紹
- [詳細(xì)]
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2020-04-26 17:54
應(yīng)用文章
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大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒
- 大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2013-12-09 00:00
其它
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人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)檢測(cè)試劑盒
- 人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)檢測(cè)試劑盒[詳細(xì)]
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2015-03-12 00:00
操作手冊(cè)
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液相色譜儀在天然藥物及成藥分析中的應(yīng)用
- 液相色譜儀在天然藥物及成藥分析中的應(yīng)用[詳細(xì)]
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2015-08-12 00:00
操作手冊(cè)
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藥物對(duì)人體Na+/Ca2+交換劑的影響及其對(duì)藥物開(kāi)發(fā)的意義
- 所有的動(dòng)物蛋白都能催化Ca2+:Na+交換,盡管有些也能運(yùn)輸K+。NCX質(zhì)膜蛋白用3個(gè)na +交換個(gè)1ca2 +。哺乳動(dòng)物的Na+/Ca2+交換器有三種亞型NCX1-3,它們的相似度約為70%[詳細(xì)]
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2021-03-01 09:40
應(yīng)用文章
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DSC藥物晶型的測(cè)定
- DSC藥物晶型的測(cè)定[詳細(xì)]
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2024-09-14 23:12
應(yīng)用文章
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藥物輔料硬脂酸鎂的比表面積測(cè)定
- 藥物輔料硬脂酸鎂的比表面積測(cè)定[詳細(xì)]
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2024-09-28 00:31
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人抗天然脫氧核糖核酸抗體(n-DNA-Ab)ELISA試劑盒
- 人抗天然脫氧核糖核酸抗體(n-DNA-Ab)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2013-12-17 00:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人抗天然脫氧核糖核酸抗體(n-DNA-Ab)檢測(cè)試劑盒
- 人抗天然脫氧核糖核酸抗體(n-DNA-Ab)檢測(cè)試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-18 18:06
其它
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藥物解決方案
- 藥物解決方案[詳細(xì)]
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2024-09-23 13:54
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