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新鮮牛奶蛋白質(zhì)含量快速測定方法
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本文由 廈門斯坦道科學(xué)儀器股份有限公司 整理匯編
2024-09-29 13:15 303閱讀次數(shù)
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新鮮牛奶蛋白質(zhì)含量快速測定方法
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新鮮牛奶蛋白質(zhì)含量快速測定方法- 新鮮牛奶蛋白質(zhì)含量快速測定方法[詳細(xì)]
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2024-09-29 13:15
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- 蛋白質(zhì)溶液濃度測定方法蛋白質(zhì)溶液濃度測定方法有多種，下述幾種方法可供選用。蛋白質(zhì)濃度的測定，往往用于計(jì)算純化方法的回收率的重要方法。一、雙縮脲法雙縮脲法是**個(gè)用比色法測定蛋白質(zhì)濃度的方法，至令仍廣泛采用。在需要快速，但不很準(zhǔn)確的測定中，常用此法。硫銨不干擾顯色，這對蛋白質(zhì)提純的早期價(jià)段是非常有利的。雙縮脲法的原理是Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵，以及酪氨酸殘基絡(luò)合，形成紫藍(lán)色絡(luò)合物，此物在540nm波長處有Zda吸收。雙縮脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白質(zhì)溶液測定。干擾物有硫醇，以及具有肽性質(zhì)緩沖液，如Tris、Good緩沖液等?？捎贸恋矸ǔジ蓴_物，即用等體積10%冷的三氯醋酸沉淀蛋白質(zhì)，然后棄去上清液，再用已知體積的1mNaOH溶解沉淀的蛋白質(zhì)進(jìn)行定量測定。二、Lowry法此法是雙縮脲法的進(jìn)一步發(fā)展。他的**步就是雙縮脲反應(yīng)，即Cu++與蛋白質(zhì)在堿性溶液中形成絡(luò)合物，然后這個(gè)絡(luò)合物還原磷鉬磷-磷鎢酸試劑（福林-酚試劑），結(jié)果得到深藍(lán)色物。此法比雙縮脲法靈敏得多，適合于測定20mg/L～400mg/L含量的蛋白質(zhì)溶液。其干擾物質(zhì)與雙縮脲法相同，而且受他們的影響更大，硫醇和許多其他物質(zhì)的存在會(huì)使結(jié)果嚴(yán)重偏差。另外要注意的是，加入福林試劑時(shí)要特別小心，試劑只在酸性pH環(huán)境中才穩(wěn)定，上述提到的還原反應(yīng)只有在pH10時(shí)才發(fā)生，因此，福林試劑加入到堿性的Cu2+-蛋白質(zhì)溶液中時(shí)，必須立刻攪拌，以使磷鉬酸-磷鎢酸試劑在未被破壞之前能有效地被Cu2+-蛋白質(zhì)絡(luò)合物所還原。三、紫外吸收法大多數(shù)蛋白質(zhì)在280nm波長處有特征的Zda吸收，這是由于蛋白質(zhì)中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在的緣故，因此，利用這個(gè)特異性吸收，可以計(jì)算蛋白質(zhì)的含量。如果沒有干擾物質(zhì)的存在，在280nm處的吸收可用于測定0.1～0.5mg/ml含量的蛋白質(zhì)溶液。部分純化的蛋白質(zhì)常含有核酸，核酸在260nm波長處有Zda吸收。有核酸時(shí)，所測得的蛋白質(zhì)濃度必須作適當(dāng)校正，一般按下述公式粗略計(jì)算：是蛋白質(zhì)溶液在280nm波長處（光程1厘米）測得的光密度值。是蛋白質(zhì)溶液在260nm小波長處（光程1厘米）處所測得的光密度值。此方程是從烯醇酶（在酵母核酸存在時(shí)）得出來的。因此，對其他蛋白質(zhì)和其他核酸不一定適用。由于各種蛋白質(zhì)所含芳香族氨基酸的量不同，因此，濃度為0.1%的各種蛋白質(zhì)在280nm處的消光系數(shù)（）在0.5～2.5之間變化。所有的蛋白質(zhì)在230nm以下都有強(qiáng)吸收。例如，牛血清白蛋白的α0.1%在225nm和215nm處分別為5.0和11.7，而在280nm處測為0.58。在230nm以下的強(qiáng)吸收是由于肽鍵的存在，因此，此值對所有的蛋白質(zhì)都是一樣的。從215nm和225nm處的光密度之差可用于測定濃度為10μl/ml～100μl/ml的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)濃度可以近似地由下式得到：光密度之差求得，這一公式是減去溶液中非蛋白質(zhì)成分產(chǎn)生的誤差。但是，蛋白質(zhì)之間的分子量差異比較大，因此，在比較幾種蛋白質(zhì)含量時(shí)，必須作適當(dāng)?shù)男ＵＳ捎诘鞍踪|(zhì)的吸收峰常因pH改變而變化，所以在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，必須與樣品條件一致。相關(guān)產(chǎn)品如下：聯(lián)系方式上海索萊寶生物科技有限公司電話：021-6485566518018609966傳真：021-54261506郵編：200233地址：上海市欽江路15號14層郵箱：solarbio@126.com網(wǎng)址：www.shsolarbio.com優(yōu)質(zhì)試劑質(zhì)量放心價(jià)格Zdi為ZG生物產(chǎn)業(yè)做貢獻(xiàn)蛋白濃度測定相關(guān)產(chǎn)品特價(jià)促銷索寶特價(jià)另有其他常用生化試劑歡迎詢問【021-54100800】[詳細(xì)]
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2018-09-02 10:00
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2018-09-24 10:00
產(chǎn)品樣冊
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