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elisa實驗原理:大腸桿菌宿主殘留蛋白
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2018-11-16 10:02 842閱讀次數(shù)
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elisa實驗原理:大腸桿菌宿主殘留蛋白本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)水平。用純化的大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP),再與HRP標記的大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)濃度。
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elisa實驗原理:大腸桿菌宿主殘留蛋白
- elisa實驗原理:大腸桿菌宿主殘留蛋白本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)水平。用純化的大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP),再與HRP標記的大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)濃度。[詳細]
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2018-11-16 10:02
產(chǎn)品樣冊
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大腸桿菌宿主殘留蛋白 elisa試劑盒說明書
- 試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。1使用目的:本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織(如雞、牛肉和豬肉),藥物、血清和尿樣中大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)殘留的定量檢測。2實驗原理本試劑盒采用競爭ELISA方法,在微孔板包被有大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)偶聯(lián)抗原,加入大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)標準品或樣品,游離大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)與微孔條上預包被的大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)偶聯(lián)抗原互相競爭抗大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)抗體酶標記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色,用酶標儀在450nm波長下進行檢測,吸光值與樣品中大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)含量成反比,通過標準曲線計算樣品中大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)的含量。3試劑盒組成3.1預包被的大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)偶聯(lián)抗原的可拆酶標板:1塊(12孔×8條)。3.2大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)標準品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ug/ml,0.1ug/ml,0.3ug/ml,0.9ug/ml,2.7ug/ml,8.1ug/ml3.3抗大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)抗體酶結合物:1瓶(6ml)。3.4顯色液A:1瓶(6ml)。3.5顯色液B:1瓶(6ml)。3.6終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,6ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。3.9說明書一份。4需要而未提供的材料4.1設備4.1.1波長450nm酶標儀。4.1.2粉碎機。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍5.2未用完的微孔板應該密封干燥保存6注意事項6.1使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。6.2不要使用過期試劑盒。6.3試劑盒使用前,將試劑恢復至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時。6.4標準品中含有大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP),使用時應特別注意,操作時應帶手套。6.5終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6不同標準品、樣品所用吸頭不能混用,否則會影響試驗結果。6.7不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標準品、樣品所用吸頭不得混用,否則會影響實驗結果。6.8稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會影響實驗結果6.9混合試劑時應避免起泡。7工作液準備7.1大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)標準品溶液:0ug/ml,0.1ug/ml,0.3ug/ml,0.9ug/ml,2.7ug/ml,8.1ug/ml7.2濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用7.3樣本稀釋液:備用7.3顯色劑:已備用,避免光線直照7.4反應終止液:已備用8樣品處理:(樣品在提取過程中,要嚴格按說明書操作,提取過程中應準確稀釋,否則會出現(xiàn)結果不準確,樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存)一般樣品處理8.1取10g粉碎的樣品,加20ml70%甲醇溶液8.2QL振蕩3分鐘8.3用WhatmanNo1濾紙過濾8.4取100μl處理后的樣品,加入400μl樣本稀釋液8.5取100μl稀釋液進行分析動物組織前處理8.6準確稱取1±0.05g勻漿后的組織樣品到50ml的聚苯乙烯離心管中;加入3ml乙腈--丙酮提取溶液,2000rpm劇烈震蕩20s后4000r/min以上離心5min8.7取上清液0.8ml在50℃氮氣流下吹干8.8加入3.2mL樣品稀釋液,750rpm渦旋20s8.9取100ml用于分析飼料前處理方法8.10準確稱取1±0.05g粉碎飼料樣品到50ml的聚苯乙烯離心管中;加入4ml乙腈,1ml丙酮,2000rpm劇烈震蕩20s后4000r/min以上離心3min8.11取上清液0.7ml在50℃氮氣流下吹干8.12加入2.8mL樣品稀釋液,渦旋20s,混勻后取100ml用于分析牛奶前處理方法8.13取1ml牛奶樣品到5ml聚苯乙烯離心管中;加入4ml樣品稀釋液,混勻后取100ml用于分析奶粉前處理方法8.14準確稱取0.3g奶粉樣品到7ml的聚苯乙烯離心管中;加入2mlPBS溶液,2ml正己烷,震蕩混勻8.154000r/min以上離心5min,去除有機層和中間層,取下層溶液100ml到400ml樣品稀釋液8.16混勻后取100ml用于分析9酶免分析步驟9.1實驗須知9.1.1實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫(25±2℃),時間約2小時?;販刂潦覝兀?5±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的極ng確度和準確度。9.1.2使用后請立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3請不要改變分析程序9.1.4請使用極ng確的微量移液器9.1.5操作一旦開始,請不要中斷任何程序9.1.6ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序,請嚴格按照要求操作9.1.7為避免交叉污染,每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣9.1.8加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面9.2分析步驟9.2.1預先進行編號,標記B0、標準品和樣品的位置,推薦進行雙孔檢測9.2.2取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3樣品稀釋液、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)9.2.4在B0孔中加入50μl0.0ug/ml標準品溶液9.2.5在各標準孔中加入50μl的標準品溶液9.2.6在各樣品孔中加入50μl樣品溶液9.2.7在所有孔中加入50μl的抗大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)抗體酶結合物9.2.8輕輕晃動反應板幾秒鐘。9.337℃溫浴30min(溫浴過程中不時輕拍反應板,可以減少雙孔誤差)9.3.1甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,Z后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。9.4反應9.4.1洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50μl顯色液A,再加50μl顯色液B;輕微晃動反應板使之徹底混勻9.4.237℃溫浴10min9.4.3每孔中加入50μl終止液,混勻9.4.4在450nm下檢測吸光度,結果在5min內讀取。10結果計算10.1定量分析10.1.1所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以**個標準(0標準)的吸光度值(B0)再乘以1**%,即百分吸光度值。B標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00ug/ml標準溶液的平均吸光度值10.1.2以大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標準曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應點的橫坐標,即為大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)濃度的對數(shù)值,求得反對數(shù)即為測定液中大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)濃度C(ug/ml)10.1.3由于樣品經(jīng)過了預先稀釋,因此根據(jù)標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。10.2半定量測定10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當?shù)臉藴室号c樣品同運行,根據(jù)樣品與標準品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當?shù)臉藴室号c樣品同運行,根據(jù)樣品與標準品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。11特異性物質交叉反應大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)1**%12試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測下限為0.1ug/mlB0吸光度**值應大于1.0試劑盒吸光度板內誤差小于8%,板間誤差小于15%。用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。13標準曲線模式(僅供參考)試劑盒提供的標準曲線范圍為0.1ug/ml~8.1ug/ml。14分析限制本試劑盒檢測為陽性的樣品應該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。[詳細]
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2018-09-03 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大腸桿菌宿主殘留蛋白試劑盒使用說明書
- Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4 大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)試劑盒使用說明書檢測范圍:96T0.6ng/L-16ng/L使用目的:大腸桿菌宿主殘留蛋白試劑盒用于測定血清、血漿及相關液體樣本中大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)含量。實驗原理大腸桿菌宿主殘留蛋白試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)水平。用純化的大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP),再與HRP標記的大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(32ng/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。16ng/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液8ng/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液4ng/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液2ng/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液1ng/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。大腸桿菌宿主殘留蛋白試劑盒注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2024-09-14 19:14
產(chǎn)品樣冊
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大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coli P)檢測試劑盒
- 大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coli P)檢測試劑盒[詳細]
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2015-09-07 00:00
專利
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宿主殘留蛋白HCP ELISA抗體覆蓋率檢測
- 美國Azure公司的 Sapphire? 雙模式多光譜激光成像系統(tǒng),專業(yè)技術,帶來高質量檢測結果。配有四激光,RGB三色激光即可進行2D和2D-DIGE的檢測,大平臺,檢測更順暢,儀器可進行分辨率,激光強度,聚焦深度的設置,特別是聚焦,采用激光共聚焦光路,減少樣品表面灰塵等的干擾,提高信噪比,檢測更靈敏。[詳細]
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2019-11-01 15:39
應用文章
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人CHO細胞宿主蛋白elisa試劑盒使用方法
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T0.6pg/ml-22pg/ml使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中CHO細胞宿主蛋白(CHO-HCP)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人CHO細胞宿主蛋白(CHO-HCP)水平。用純化的CHO細胞宿主蛋白(CHO-HCP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入CHO細胞宿主蛋白(CHO-HCP),再與HRP標記的CHO細胞宿主蛋白(CHO-HCP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CHO細胞宿主蛋白(CHO-HCP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人CHO細胞宿主蛋白(CHO-HCP)濃度。[詳細]
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2018-10-01 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人蛋白酪氨酸激酶(PTK)elisa試劑盒實驗原理
- 實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人蛋白酪氨酸激酶(PTK)水平。用純化的人蛋白酪氨酸激酶(PTK)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入蛋白酪氨酸激酶(PTK),再與HRP標記的蛋白酪氨酸激酶(PTK)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的蛋白酪氨酸激酶(PTK)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人蛋白酪氨酸激酶(PTK)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(8000U/mL)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個[詳細]
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2018-10-01 10:00
產(chǎn)品樣冊
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兔粘蛋白1(MUC1)ELISA試劑盒實驗原理
- 兔粘蛋白1(MUC1)酶聯(lián)免疫分析試劑盒僅供研究使用,用于測定兔血清,血漿及相關液體樣本中粘蛋白1(MUC1)的含量。實驗注意事項:1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。8.本試劑不同批號組分不得混用,嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.9.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。注:以上信息僅供參考,具體參考方法請與隨貨說明書為準。上海華壹生物科技有限公司專業(yè)試劑盒供應商,歡迎來電咨詢:021-24209192,021-24209195[詳細]
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2018-11-15 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人超敏C反應蛋白elisa試劑盒實驗原理
- 使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中超敏C反應蛋白(hs-CRP)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人超敏C反應蛋白(hs-CRP)水平。用純化的人超敏C反應蛋白(hs-CRP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入超敏C反應蛋白(hs-CRP),再與HRP標記的超敏C反應蛋白(hs-CRP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的超敏C反應蛋白(hs-CRP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人超敏C反應蛋白(hs-CRP)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(80μg/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個[詳細]
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2024-10-02 06:41
產(chǎn)品樣冊
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微生物鐵氧還蛋白(FDX)ELISA試劑盒實驗原理
- 微生物鐵氧還蛋白(FDX)ELISA試劑盒實驗原理 本生一直視質量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,以過硬的質量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。[詳細]
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2023-08-18 11:44
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β淀粉樣蛋白1-40ELISA試劑盒實驗原理
- 人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒僅供科學研究使用實驗原理:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)的含量。應用雙抗體夾心法測定標本中人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)水平。用純化的人β淀粉樣蛋白1-40抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入β淀粉樣蛋白1-40抗原,再與HRP標記的羊抗人抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)抗原濃度。[詳細]
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2018-11-15 10:00
產(chǎn)品樣冊
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2023-08-07 17:22
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人β血小板球蛋白β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA試劑盒實驗原理
- 本生一直視質量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,以過硬的質量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。[詳細]
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2023-08-30 16:33
應用文章
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大腸桿菌雜交及基因定位實驗
- 大腸桿菌雜交及基因定位實驗[詳細]
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2016-01-12 00:00
專利
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人心型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)實驗原理是什么?
- 人心型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)如何操作試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本ZX型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)的含量。實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人心型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)水平。用純化的人心型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入心型脂肪酸結合蛋白(H-FABP),再與HRP標記的H-FABP抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的心型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人心型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)濃度。[詳細]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人可溶性血纖蛋白單體復合物(SFMC)ELISA試劑盒實驗原理
- 人可溶性血纖蛋白單體復合物(SFMC)ELISA試劑盒實驗原理 本生一直視質量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,以過硬的質量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。[詳細]
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2023-08-07 17:21
應用文章
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ELISA原理(實驗條件、技術要點)
- ELISA原理(實驗條件、技術要點)實驗條件和技術要點:酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,簡稱ELISA)與免疫酶測定等名稱所指的內容是不相同的,ELISA的內容專指固相吸附技術和免疫酶標抗體(或抗原)技術相結合的一種方法,它是將抗原或抗體包被在固相支持物(或稱載體上),然后再進行免疫反應,形成酶標記的抗原抗體復合物,反應完畢,借助底物顯示特異結合的標記抗體(或抗原)上的酶活性,用酶與底物反應后生成的有色產(chǎn)物進行光密度測定,達到抗原或抗體定量的目的。在應用ELISA時,首先要清楚下面內容:1,是檢測抗體還是抗原?2,檢測的結果是定性還是定量?3,是否需要檢測特異抗體的類型?4,所用抗體/單克隆抗體的親和力怎樣?(1)檢測抗原Z常用于檢測抗原的方法是非競爭性的雙抗體夾心法,其次是競爭法。但競爭法在具體實驗中有些困難,特別是檢測微生物的抗原,因為需要標記抗原,這對于某些抗原是很難做到的,甚至是不可能的。另外在競爭法中,酶標記的抗原與標本直接混合在一起,許多標本中含有酶YZ劑或蛋白A樣物質,可影響ELISA的結果。(2)檢測抗體檢測抗體種類常用的方法是檢測抗體種類的捕獲法,這個方法常用于檢測特異性IgG、IgA和IgM.。這個方法的**步是捕獲所需要檢測的一個種類的抗體,接下來是檢測捕獲的抗體是否是特異性抗原的抗體。間接ELISA在檢測IgG時比較簡單,但不適用于檢測其他種類的抗體,因為血清中如果有特異IgG存在將與IgM或IgA等競爭結合抗原。競爭法檢測抗體有兩種方法:一種是將標記的抗體和標本同時加入反應孔內,但標記的抗體和標本中的抗體必須是結合抗原的不同決定簇;另一種是先加標本,沖洗后再加標記的抗體。競爭法檢測抗體比間接法容易判斷結果,并且比較敏感和特異。不論選擇哪種方法,ELISA都包括6個步驟:1,抗原或抗體吸附于固相;2.加標本和試劑;3,孵育和沖洗;4,加酶標抗原或抗體;5,加適當?shù)牡孜铮?,檢測和分析結果。雖然ELISA法在理論上十分簡單,但每一步都有要注意的事項。不論是新設計的ELISA還是沿用其他ELISA方法都有以下幾方面技術要點:固相載體的選擇和試劑的制備,反應條件和操作的標準化。酶標記抗原競爭法利用混合的未標記抗原和酶標記抗原相互競爭抗體上的結合點,從而進行抗原的定量。未標記抗原的量越大,則酶標記抗原和抗體的結合就越受到YZ。但是競爭法在實驗時比較復雜,有時在抗原混合液與相應抗體孵育后,在測定游離抗原與抗體相結合抗原的活性以前,要先進行鹽析或有機溶劑沉淀或第二抗體沉淀等方法把兩種不同存在形態(tài)的抗原分開。并且在加入底物后,容易產(chǎn)生血清色的物質。因此,每次測定時都需做空白對照。由于這些缺點,酶標記抗原競爭法使用不多。促銷期間有精美禮品贈送還可以享受免費代測服務。您只需要把標本寄給我們,一星期左右就可以出實驗數(shù)據(jù)。歡迎購買我公司的ELISA試劑盒,我們承諾試劑盒有質量問題包退包換。上海研謹生物公司對外承接RT-PCR技術服務、細胞培養(yǎng)技術服務、原位雜交技術服務、免疫沉淀技術服務、WesternBlotting技術服務、動物模型構建服務、SCI論文服務、PCR實驗服務,并為廣大科研用戶提供各種高品質的試劑和服務,如細胞、血清、Elisa試劑盒、質粒提取試劑盒、DNA產(chǎn)物純化試劑盒、病毒RNA提取試劑盒、PCR等產(chǎn)品,針對以上各項服務,我們均有具有豐富服務經(jīng)驗和深厚專業(yè)背景的人員團隊為您提供技術服務和支持。[詳細]
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2018-09-04 10:00
產(chǎn)品樣冊
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ELISA實驗原理、步驟、問題分析
- 上海恒遠生物科技有限公司專業(yè)供應各種屬elisa試劑盒,提供免費代測服務,保證實驗結果客觀真實性。我公司對試劑盒質量1**%保證,若存在質量問題,我們無條件包退換。若需要了解試劑盒的詳細信息,請來的咨詢:電話:021-6052049813636351217業(yè)務QQ:1005074258何經(jīng)理ELISA實驗原理、步驟、ELISA問題分析ELISA實驗原理酶聯(lián)免疫吸附測定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)原理1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)用于IgG定量測定的文章,使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發(fā)展成液體標本中微量物質的測定方法。ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可極大地地放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度類型及步驟ELISA的主要常用類型及步驟1.間接法測抗體間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體(二抗)以檢測與固相抗原結合的受檢抗體,故稱為間接法。操作步驟如下:1)將特異性抗原與固相載體聯(lián)結,形成固相抗原,洗滌除去未結合的抗原及雜質。2)加稀釋的樣本,保溫反應。樣本中的特異抗體與固相抗原結合,形成固相抗原抗體復合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,樣本中的其他成份在洗滌過程中被洗去。3)加酶標抗抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗抗體結合,從而間接記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關。4)加底物顯色。2.雙抗體夾心法測抗原雙抗體夾心法是檢測抗原Z常用的方法,操作步驟如下:1)將特異性抗體與固相載體聯(lián)結,形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。2)加受檢樣本,保溫反應。樣本中的抗原與固相抗體結合,形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。3)加酶標抗體,保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與樣本中受檢抗原的量相關。4)加底物顯色。3.雙抗原夾心法測抗體反應原理和模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物,以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體4.競爭法測抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的酶標抗原愈少,Z后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。ELISAQ&A如何選擇合適的陽性對照?陽性對照的基本組成應該盡量與檢測樣本的組成一致,一般陽性對照多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質,加入一定量的待檢物質。比如,以人血清為標本的測定,陽性對照多用確定的病人血清或者以復鈣人血漿為原料加入一定量標準品。如何選擇合適的陰性對照?陰性對照的基本組成也應該盡量與檢測樣本的組成一致,**先行檢測確定其中不含待檢物質。比如,檢測人血清標本時,陰性對照應該選擇正常人血清;檢測免疫動物血清中抗體效價時,陰性對照應該選擇該動物的免疫前血清。如何選擇Zyou化的包被條件?1.包被抗原的選擇包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被,對于含雜質較多的抗原可以采用間接捕獲法包被(先用能夠與目的抗原反應的物質如抗體直接吸附在酶標板上,再通過特異性反應使抗原固相化)。經(jīng)純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物,由于分子量太小,往往難于直接吸附在酶標板上,一般都先使其與無關蛋白質如BSA等偶聯(lián),偶聯(lián)物吸附于固相載體上。2.包被液的選擇一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話,也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。3.包被溫度的選擇通常是4-8度條件下過夜或者37度保溫2小時,我們強烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的保持。4.包被濃度的選擇包被的Z適濃度隨固相載體和包被物的性質變化,一般蛋白質的包被濃度為1-5ug/ml,要明確針對特定包被抗原的Z適包被濃度需要通過實驗來確定。包板后需要封閉嗎?應該選擇什么樣的封閉體系?封閉是否必要,取決于ELISA的模式及具體的實驗條件。一般說來,雙抗體夾心法,只要酶標記物是高活性的,操作時洗滌徹底,不經(jīng)封閉也可得到滿意的結果。而在間接法測定中,封閉一般是必不可少的。常用的封閉劑有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明膠、5%的脫脂奶粉,AbMART推薦使用5%脫脂奶粉,價廉而且封閉能力強,不過5%脫脂奶粉只適合短期內使用,不宜長期保存,所以試劑盒中較少使用。如何正確使用酶結合物?1.酶結合物的稀釋液在稀釋液中常加入高濃度的無關蛋白質(例如1%BSA或5%脫脂奶粉),通過競爭YZ酶結合物在固相載體上的非特異性吸附。一般還加入能夠YZ蛋白質吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑,如吐溫20(0.05%的濃度較為適宜)。2.正確稀釋酶結合物酶結合物的合適工作濃度需要通過預實驗來確定,濃度過高易導致本底偏高,濃度過低則會導致陽性信號的減弱。酶結合物**在使用前稀釋,稀釋后的酶結合物不宜長期保存,因為低濃度的酶結合物極易失活。問題可能的原因解決方法陰性對照產(chǎn)生了陽性的結果試劑或者耗材污染更換試劑,使用一次性耗材洗板出現(xiàn)問題更換更強配方的洗滌液,增加洗板次數(shù),延長洗板時間如果是在雙抗體夾心法中出現(xiàn),有可能是包被抗體與二抗間有交叉反應更換包被抗體或二抗使用了過多的抗體減少抗體使用量整板出現(xiàn)高背景二抗產(chǎn)生了非特異性吸附減少二抗使用量,縮短二抗反應時間顯色液不新鮮使用現(xiàn)配的顯色液顯色反應時間過長沒有終止控制顯色反應時間,及時終止反應試劑或者耗材污染更換試劑,使用一次性耗材反應溫度過高導致的非特異性吸附嚴格控制反應在Z適溫度下進行封閉條件不佳導致的非特異性吸附更換封閉能力更強的封閉液,延長封閉時間反應信號偏低包被條件不合適提高包板濃度,延長包板時間抗原抗體反應不夠充分延長反應時間,確保反應在Z適溫度下進行顯色液配方不恰當增加顯色底物的量二抗結合不夠提高二抗?jié)舛?,延長反應時間,更換效果更好的二抗梯度稀釋做ELISA時產(chǎn)生跳孔現(xiàn)象酶標板疊放導致傳熱不均勻,各孔反應溫度有差異盡量避免酶標板疊放在一起移液器稀釋時未能保持連續(xù)性定期校準移液器,確保移液器的正確使用反應溶液蒸發(fā)酶標板用封條密封或者加蓋洗板不均勻確定洗板機能夠正常工作酶標板底有雜物或者水珠讀板時清理干凈酶標板底部[詳細]
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2018-11-16 10:02
產(chǎn)品樣冊
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CHO細胞宿主蛋白酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
- 96T使用目的:本試劑盒用于測定血清、血漿及相關液體樣本中CHO細胞宿主蛋白(CHO-HCP)表達。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中CHO細胞宿主蛋白(CHO-HCP)表達。用純化的CHO細胞宿主蛋白(CHO-HCP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中CHO細胞宿主蛋白(CHO-HCP)相結合,經(jīng)洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的CHO細胞宿主蛋白(CHO-HCP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中CHO細胞宿主蛋白(CHO-HCP)的存在與否。[詳細]
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2018-10-03 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人金屬肽酶含血小板反應蛋白1酶聯(lián)elisa試劑盒實驗原理
- 人金屬肽酶含血小板反應蛋白1酶聯(lián)elisa試劑盒實驗原理[詳細]
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2024-09-11 17:41
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