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PNAS:新表面標(biāo)志分離超純干細(xì)胞
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本文由 上海飛軒生物科技有限公司 整理匯編
2013-04-15 00:00 162閱讀次數(shù)
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PNAS:新表面標(biāo)志分離超純干細(xì)胞
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- 主要用途動物細(xì)胞高純高爾基體分離試劑是一種旨在通過機(jī)械或化學(xué)處理、差速和等密度離心方法,從動物細(xì)胞中分離出活性完整而高度純化的高爾基細(xì)胞器組分的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其制備物產(chǎn)量高,活性保證,純度可達(dá)99%。適合于各種動物細(xì)胞,包括人體細(xì)胞等的高爾基體的制備??梢员挥糜谑荏w循環(huán)、糖蛋白和脂蛋白合成,以及抗體釋放機(jī)制等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能穩(wěn)定,分離產(chǎn)量高。技術(shù)背景高爾基體(Golgiapparatus或Golgibodies),又稱為高爾基復(fù)合體(Golgicomplex),是一種細(xì)胞器,存在于大多數(shù)真核生物細(xì)胞中。高爾基體由扁平膜結(jié)合的高爾基堆(stacks),即小池(cisternae)組成,約有4至8層,分成3個(gè)功能區(qū):順面、中層、反面等,進(jìn)一步地構(gòu)成細(xì)胞膜、分泌泡、內(nèi)涵體等。高爾基體整合各種大分子進(jìn)行加工、分類和包裝,然后分門別類地送到細(xì)胞特定的部位或分泌到細(xì)胞外。高爾基體參與糖蛋白質(zhì)的糖基化、碳水化合物的合成、蛋白質(zhì)的分泌、膜轉(zhuǎn)化、溶酶體形成的細(xì)胞活動。高爾基體的分離是現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)研究的常用手段之一:**,通過機(jī)械或化學(xué)方法破裂組織細(xì)胞;第二,通過低速差速離心去除殘?jiān)樾己途薮蠹?xì)胞器;第三,通過高速差速離心獲得高爾基體;甚至,第四,可以通過等密度離心獲得純度更高的高爾基體。[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
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2013-09-06 00:00
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2015-01-05 00:00
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- 主要用途動物細(xì)胞高純內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑是一種旨在通過機(jī)械或化學(xué)處理、差速和等密度離心方法,從動物細(xì)胞中分離出活性完整而高度純化的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)細(xì)胞器組分的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其制備物產(chǎn)量高,活性保證,純度可達(dá)99%。適合于各種動物原代和培養(yǎng)細(xì)胞(人體、老鼠、兔子等)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的制備。可以被用于細(xì)胞色素P450系統(tǒng)外源化合物(xenobiotics)代謝、脂類代謝、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白和腔內(nèi)蛋白等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能穩(wěn)定,分離產(chǎn)量高。技術(shù)背景內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmicreticulum;ER)是真核生物的細(xì)胞器組分,構(gòu)成細(xì)胞內(nèi)小管(tubules)、囊泡(vesicles)和小池(cisternae/sac)相互連接的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),負(fù)責(zé)蛋白轉(zhuǎn)譯、折疊和轉(zhuǎn)運(yùn)成為細(xì)胞膜成分(例如跨膜受體和其它整合膜蛋白等)或分泌型蛋白(例如消化性酶),負(fù)責(zé)鈣離子區(qū)隔(sequestration),以及糖原、固醇類和其它大分子的生產(chǎn)和儲存等功能。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分成三種:粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(Roughendoplasmicreticulum;RER)、滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(Smoothendoplasmicreticulum;SER)和肌質(zhì)網(wǎng)(sarcoplasmicreticulum;SR)。根據(jù)細(xì)胞代謝的需要,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)會互相轉(zhuǎn)換。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通過核糖體合成蛋白質(zhì)并分類;滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)行固醇、碳水化合物和藥物代謝等。肌質(zhì)網(wǎng)的主要功能為儲存和釋放鈣離子。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的分離是現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)研究的常用手段之一:**,通過機(jī)械或化學(xué)方法破裂組織細(xì)胞;第二,通過低速差速離心去除殘?jiān)樾己途薮蠹?xì)胞器;第三,通過高速差速離心獲得內(nèi)質(zhì)網(wǎng);甚至,第四,可以通過等密度離心獲得純度更高的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人體血小板高純分離試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途人體血小板高純分離試劑是一種旨在通過等密度離心的方法,直接從人體全血樣品中分離出結(jié)構(gòu)完整而高度純化的血小板組分的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適合于人體(生理或病理)血小板的制備。其制備物產(chǎn)量高,活性保證,純度可達(dá)99%??梢员挥糜谀囼?yàn)、功能檢測等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能穩(wěn)定,分離產(chǎn)量和純度保證。技術(shù)背景血小板(platelet),又稱為凝血細(xì)胞(thrombocytes),是一種小而形狀規(guī)則的細(xì)胞片段,直徑2至3微米。其前體為巨核細(xì)胞(megakaryocytes),平均生命周期5至9天。血小板在止血過程(hemostasis)中起著重要作用,幫助形成血液凝塊,同時(shí)也是多種生長因子,包括血小板源生長因子(platelet-derivedgrowthfactor)、轉(zhuǎn)化生長因子β(transforminggrowthfactor-β;TGF-β)、堿性纖維原細(xì)胞生長因子(basicfibroblastgrowthfactor;bFGF)等的自然來源。體內(nèi)血小板數(shù)量和功能異常會產(chǎn)生血小板?。╰hrombocytopathy):血小板過低(thrombocytopenia)或功能降低(thrombasthenia),將導(dǎo)致出血;過高(thrombocytosis)則容易產(chǎn)生血塊,而引起中風(fēng)、心肌梗塞、肺栓塞(embolism)。血小板的分離是現(xiàn)代血液學(xué)研究的Z常用的手段之一。福特(Ford)等使用等密度介質(zhì)(1.063克/毫升),通過低速離心,一步從紅細(xì)胞和白細(xì)胞中獲得純度更高、活性保證、結(jié)構(gòu)完整的血小板。產(chǎn)品內(nèi)容高純液(ReagentA)毫升稀釋液(ReagentB)毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在4℃冰箱里;高純液(ReagentA),避免光照;嚴(yán)格無菌操作;有效保證6月用戶自備2毫升離心管:用于樣品操作的容器15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器4℃(微型)臺式離心機(jī):用于樣品操作實(shí)驗(yàn)步驟準(zhǔn)備1個(gè)無菌的15毫升錐形離心管搖勻試劑盒里的高純液(ReagentA)移出xx毫升高純液(ReagentA)到15毫升錐形離心管加入xx毫升稀釋液(ReagentB),混勻此為高純工作液[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊
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豬YZ性巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
- 豬YZ性巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。96T使用目的:本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中YZ性巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志抗體表達(dá)。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中豬YZ性巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志抗體表達(dá)。用純化的豬抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中YZ性巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志抗體相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中豬YZ性巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志抗體的存在與否。豬YZ性巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。豬YZ性巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總結(jié):計(jì)算和結(jié)果判定:試驗(yàn)有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10臨界值(CUTOFF)計(jì)算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定:樣品OD值<臨界值(CUTOFF)者為YZ性巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志抗體陰性陽性判定:樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為YZ性巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志抗體陽性。注意事項(xiàng)1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號組分不得混用。2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5.底物請避光保存。6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測時(shí),參考波長為630nm7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。豬YZ性巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:00
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2024-09-30 15:22
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2024-09-17 10:49
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2016-03-17 00:00
應(yīng)用文章
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- 動物細(xì)胞高純高爾基體分離試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-03-30 00:00
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