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牛彈性蛋白酶(Elastase)說(shuō)明書(shū)間接法

本文由 上海瓦蘭生物科技有限公司 整理匯編

2018-09-22 10:00 260閱讀次數(shù)

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www.biokanu.com牛彈性蛋白酶(Elastase)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用。使用目的:本試劑盒用于測(cè)定牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中彈性蛋白酶(Elastase)的含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用間接法測(cè)定標(biāo)本中牛彈性蛋白酶(Elastase)水平。用純化的牛彈性蛋白酶(Elastase)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的彈性蛋白酶(Elastase)標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的彈性蛋白酶(Elastase)待檢樣品,溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的彈性蛋白酶(Elastase)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中牛彈性蛋白酶(Elastase)濃度。試劑盒組成120倍濃縮洗滌液20ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品S1(36U/L)0.5ml×1瓶2鏈霉親和素-HRP6ml×1瓶標(biāo)準(zhǔn)品S2(24U/L)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條標(biāo)準(zhǔn)品S3(12U/L)0.5ml×1瓶4生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體6ml×1瓶標(biāo)準(zhǔn)品S4(6U/L)0.5ml×1瓶5顯色劑A液6ml×1瓶標(biāo)準(zhǔn)品S5(3U/L)0.5ml×1瓶6顯色劑B液6ml×1/瓶9說(shuō)明書(shū)1份7終止液6ml×1瓶10封板膜2張標(biāo)本要求1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融操作步驟1.根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,在樣本反應(yīng)孔中加入50微升樣本,蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。3.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用4.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)4次,拍干。5.加生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體:每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘6.洗滌:操作同4。7.加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。8.洗滌:操作同4。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值待入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑B請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。線形范圍:1U/L-45U/L規(guī)格:96人份/盒保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月

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