本文由 東曹（上海）生物科技有限公司 整理匯編

2024-09-18 11:20 397閱讀次數(shù)

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  本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T16pg/ml-400pg/ml人FAB蛋白(FAB)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中FAB蛋白(FAB)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人FAB蛋白(FAB)水平。用純化的人FAB蛋白(FAB)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入FAB蛋白(FAB)，再與HRP標(biāo)記的FAB蛋白(FAB)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的FAB蛋白(FAB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人FAB蛋白(FAB)濃度。試劑盒組成人FAB蛋白(FAB)酶聯(lián)免疫分析試劑盒標(biāo)本要求1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。人FAB蛋白(FAB)酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個(gè)月[詳細(xì)]

  2018-09-19 10:00

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• 抗體催化的化學(xué)反應(yīng)及制備

  抗體催化的化學(xué)反應(yīng)：由抗體催化的化學(xué)反應(yīng)特異性高于酶，但催化速率低于常規(guī)的酶，只有l(wèi)010倍。但有一些未發(fā)現(xiàn)催化劑的反應(yīng)，如DielsAlder反應(yīng)也能被抗體催化。常規(guī)酶一般不能催化胺鍵水解，抗體酶能使胺鍵水解的速度增加25萬倍。訖今為止，已發(fā)現(xiàn)和證明的由抗體催化的化學(xué)反應(yīng)不下40種?！　】贵w催化的制備：抗體酶是抗原決定簇處于轉(zhuǎn)換態(tài)結(jié)構(gòu)的抗體。因?yàn)檗D(zhuǎn)換態(tài)分子極不穩(wěn)定無法制備抗體，所以催化性抗體的獲得主要是通過設(shè)計(jì)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)換態(tài)的類似物作為半抗原，與載體蛋白交聯(lián)后，免疫動(dòng)物，獲得針對半抗原的抗體，從中篩選具有催化活性的抗體。篩選催化性單克隆抗體所用的ELISA與篩選一般抗體的方法不完全一樣，應(yīng)根據(jù)催化反應(yīng)的特點(diǎn)而進(jìn)行適當(dāng)?shù)男薷?。?jīng)典的方法是先篩選出與底物或半抗原結(jié)合的抗體，然后從中再篩選出有催化活力的抗體，這種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力。利用催化性抗體對底物的催化活性，對底物進(jìn)行適當(dāng)修飾，使催化反應(yīng)的產(chǎn)物可直接表現(xiàn)抗體的催化活性，這樣可以簡化檢測步驟?！　∞D(zhuǎn)換態(tài)類似物半抗原的設(shè)計(jì)，必須了解催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)換態(tài)模型的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。催化抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)上與轉(zhuǎn)換態(tài)互補(bǔ)的某些催化基團(tuán)的形成，能穩(wěn)定轉(zhuǎn)換態(tài)分子。此外有人把單克隆抗體分子用化學(xué)修飾方法引入一些活性基團(tuán)，提高催化性抗體的催化與親和效率。應(yīng)用噬菌體抗體文庫也可以篩選催化性抗體，可省去制備轉(zhuǎn)換態(tài)類似物的復(fù)雜過程，直接用底物從文庫中篩選有催化活性的抗體片段。如用半抗原免疫后制備的文庫或文庫經(jīng)過多次混雜重組，則可以得到更高的親和力的催化性抗體?？躬?dú)特型抗體也用于催化性抗體的制備，用酶作為抗原免疫小鼠獲得能夠封閉酶活性位點(diǎn)的單克隆抗體，將這個(gè)抗體用蛋白酶除去Fc片段，用Fab免疫其他品系的小鼠或家兔，得到的抗體具有相應(yīng)的酶催化活性。[詳細(xì)]

  2024-09-28 07:04

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