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ELISA法測定血小板膜結(jié)合纖維蛋白原臨床診治冠心病的意義

本文由 上海盈公生物技術(shù)有限公司 整理匯編

2018-09-27 10:00 526閱讀次數(shù)

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ELISA法測定血小板膜結(jié)合纖維蛋白原臨床診治冠心病的意義冠心病是當(dāng)今生活中常見的心臟病,患者會(huì)有壓榨性的疼痛感。近年來,由于人們的生活壓力逐漸增大,冠心病的患病率和發(fā)病率也成上升趨勢。這篇文章通過對醫(yī)院46例冠心病患者的病例分析,來探討下ELISA法測定血小板膜結(jié)合纖維蛋白原在臨床診治冠心病的意義。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?探討ELISA法測定冠心病患者血小板膜結(jié)合纖維蛋白原的臨床價(jià)值實(shí)驗(yàn)方法:選取2009年9月至2010年11月于醫(yī)院就診的46例冠心病患者病例,急性心肌梗死26例,不穩(wěn)定性心絞痛11例,穩(wěn)定性心絞痛9例。使用ELISA法測定其血小板膜結(jié)合纖維蛋白(PFig)值,并與40例健康者PFig值進(jìn)行分析比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:穩(wěn)定性心絞痛、不穩(wěn)定性心絞痛患者和急性心肌梗塞患者的血小板結(jié)合纖維蛋白值呈遞增趨勢,差異具有顯著性。并且,急性心肌梗塞患者和不穩(wěn)定性心絞痛患者PFig值均大于正常值(p<0.05),穩(wěn)定性心絞痛患者與身體健康者相比,PFig值差異不明顯(p>0.05)。穩(wěn)定性心絞痛患者與健康患者GMP-140值無明顯差異(p>0.05),不穩(wěn)定性心絞痛患者和急性心肌梗塞患者該值比正常值依次(p<0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:ELISA法測定血小板膜結(jié)合纖維蛋白原便于操作,結(jié)果明確,檢測數(shù)據(jù)可作為臨床診斷冠心病的參考指標(biāo)。1資料與方法1.1研究對象:選取2009年9月至2010年11月于我院就診的冠心病患者46例,男性25例,女性21例,年齡34-67歲,平均年齡47.7歲。診斷符合世界衛(wèi)生組織冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中,急性心肌梗死(AMI)26例,不穩(wěn)定性心絞痛(UA)11例,穩(wěn)定性心絞痛(SA)9例。對照組選取同期于我院體檢健康者40例,男性20例,女性20例,年齡29-65歲,平均年齡45.2歲。1.2標(biāo)本收集兩組均于清晨空腹取靜脈血4.5ml,加入0.5mlEDTA-Na2抗凝,4攝氏度下設(shè)定1000r/min離心8分鐘。取上層懸液,用PBS洗滌4次,計(jì)數(shù)血小板數(shù),調(diào)整Plt數(shù)至105/ml,分裝后保存至零下80攝氏度的低溫中,以測定PltGMP-140和纖維蛋白原。1.3檢測方法將抗Fig單克隆抗體用包被液稀釋成2μg/ml,在聚苯乙烯反映辦沒空加入0.1ml,37攝氏度下保存2小時(shí),4攝氏度中保存,倒去溶液,洗滌3次。各孔加入封閉液0.12ml,至37攝氏度中保存1小時(shí),洗滌3次。加入待測標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)、空白,每孔0.1ml,37攝氏度保存2小時(shí),于4攝氏度中保存。洗滌3次,分別加入1:3000酶標(biāo)記抗體0.1ml,37攝氏度保存1小時(shí)。,洗滌3次,分別加入底物0.1ml.37攝氏度避光放置20分鐘。各孔分別加入2ml/LH2SO40.1ml,以空白為準(zhǔn)調(diào)零,在490nm處測定A值。采用放射免疫法測定血小板膜蛋白-140(GMP-140),采用免疫比濁法測定纖維蛋白原。2結(jié)果測定結(jié)果顯示,穩(wěn)定性心絞痛、不穩(wěn)定性心絞痛患者和急性心肌梗塞患者的血小板結(jié)合纖維蛋白值呈遞增趨勢,差異具有顯著性。并且,急性心肌梗塞患者和不穩(wěn)定性心絞痛患者PFig值均大于正常值(p<0.05),穩(wěn)定性心絞痛患者與身體健康者相比,PFig值差異不明顯(p>0.05)。四組研究對象GMP-140值比較,穩(wěn)定性心絞痛患者與健康患者該值無明顯差異(p>0.05),不穩(wěn)定性心絞痛患者和急性心肌梗塞患者該值比正常值依次(p<0.05)。3討論冠心病是因冠狀動(dòng)脈狹窄、供血不足而引起的心肌機(jī)能障礙和(或)器質(zhì)性病變。吳惠毅,楊新玲,ELISA測定血小板膜結(jié)合纖維蛋白原的臨床價(jià)值[J]臨床檢驗(yàn)雜志(2004.02:89-90),顯示血小板增多、反應(yīng)性或功能性亢進(jìn)是冠心病血栓前狀態(tài)的指標(biāo)之一。血小板粘附、聚焦和釋放反映增強(qiáng),血循環(huán)中則出現(xiàn)GMP-140、血栓素等血小板聚焦物增多的現(xiàn)象。當(dāng)血小板受刺激激活時(shí),GMP-140與質(zhì)膜融合,持久存在于活化血小板膜表面,20分鐘即可降至基礎(chǔ)水平(參考文獻(xiàn):逯靜茹,冠心病伴胰島素抵抗患者血脂與纖維蛋白原和血小板聚集率的關(guān)系[J]ZG誤診學(xué)雜志,2009.16:3858-3859)。內(nèi)皮細(xì)胞中GMP-140含量僅是血小板的1/3,因此GMP-140是反映血小板活化與釋放Z有特異性的標(biāo)志。研究表明,冠心病患者血小板活化程度增加,且與病情嚴(yán)重程度相關(guān)。本文檢測結(jié)果中穩(wěn)定性心絞痛患者與健康患者GMP-140值無明顯差異(p>0.05),不穩(wěn)定性心絞痛患者和急性心肌梗塞患者該值比正常值依次(p<0.05),與研究結(jié)果一致,并提示PFig在血小板活化過程中發(fā)揮著重要作用。血小板活化時(shí)Z早的膜結(jié)構(gòu)變化之一是兩種膜糖蛋白結(jié)合成復(fù)合物,顯露出Fg結(jié)合位點(diǎn),繼而血漿Fg迅速與之結(jié)合(參考文獻(xiàn):范秋,張麗敏,冠心病的臨床診斷及ZL分析[J]ZG醫(yī)學(xué)創(chuàng)新2010.7(01):57-58)。本文穩(wěn)定性心絞痛、不穩(wěn)定性心絞痛患者和急性心肌梗塞患者的血小板結(jié)合纖維蛋白值呈遞增趨勢,差異具有顯著性。并且,急性心肌梗塞患者和不穩(wěn)定性心絞痛患者PFig值均大于正常值(p<0.05),穩(wěn)定性心絞痛患者與身體健康者相比,PFig值差異不明顯(p>0.05),說明血小板大量聚集是心血管血栓形成的基礎(chǔ),且血小板先富聚集增強(qiáng),但PFig值不受膜糖蛋白復(fù)合物數(shù)量的調(diào)節(jié),在血小板激活和纖維蛋白的共同作用下,形成血栓。PFig值可作為診治冠心病的參考指標(biāo),通過選用單克隆抗體作為包被抗體,建立PFigELISA測定法,標(biāo)本測定前采用超聲法使PFig充分暴露。該方法便于操作,結(jié)果明確,有一定的臨床價(jià)值,可作為診療冠心病的方法進(jìn)行推廣。

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