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ELISA試劑盒具體操作流程

本文由 上海盈公生物技術(shù)有限公司 整理匯編

2018-09-27 10:00 822閱讀次數(shù)

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ELISA試劑盒操作事宜如下:1、待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。2、酶標板置4℃。3、洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。4、陰性對照孔每孔加入PBS50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。5、酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。6、洗板,同4。7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液100μl。8、酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。9、洗板,同(4)。10、每孔加TMB顯色液100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。11、每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應(yīng)。12、分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,Z終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。ELISA試劑盒13、數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。注:所用溶液配方(1)PBS:稱取0.2gKH2P04,2.9gNa2HP04?12H20、8.0gNaCl,0.2gKCl,加雙蒸水至1000ml。(2)包被緩沖液:稱取1.59gNa2CO3,2.938NaHCO3,加雙蒸水至1000m1。(3)洗滌液(PBST):含0.05%Tween-20的PBS。(4)稀釋液:含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS,主要用以稀釋抗體、標準品、樣品。(5)TMB顯色液:稱取1.84gNa2HP04.12H20,0.51g檸檬酸,加雙蒸水至1O0ml,配成檸檬酸-磷酸緩沖溶液。用10.5ml檸檬酸-磷酸緩沖溶液溶解1錠TMB,再加入35μl3%H2O2(6)細胞裂解液:1%TritonX-100,137mmol/LNaCl,20mmol/LTris-HCl,2mmol/LEDTA,1mmol/LPMSF,pH7.4。(其中PMSF溶于異丙醇中,配成1Ommo/L,-20℃貯存?zhèn)溆谩?

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