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CCK-8試劑盒操作常見問題
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本文由 上海索寶生物科技有限公司 整理匯編
2018-09-02 10:00 1284閱讀次數(shù)
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CCK-8試劑盒特價促銷產(chǎn)品簡介:CellCountingKit-8(CCK-8試劑盒)是由同仁化學(xué)研究所(Do極ndo)開發(fā)的檢測細胞增殖、細胞毒性的試劑盒,為MTT法的替代方法,試劑盒中采用自己開發(fā)的水溶性四唑鹽-WST-8,在美國,歐洲等國家地區(qū)均持有ZL,同仁化學(xué)研究所于2006年在ZG獲得了WST-8的注冊商標。CCK-8法與普通的MTT法相比,具有顯著特點:★靈敏度高,數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好★操作簡便,省時省力★水溶性,不需要換液,尤其適合于懸浮細胞★無需放射性同位素和有機溶劑,對細胞毒性低★為1瓶溶液,毋需預(yù)制,即開即用★適合于高通量藥物篩選CCK-8用途:藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗CCK-8試劑盒在國內(nèi)知名科研院所、ZD大學(xué)、三甲醫(yī)院被廣泛應(yīng)用,國際認可度高,使用CCK-8發(fā)表的中外文獻達600多篇,其中截止08年底SCI影響因子IF>10分的論文有37篇,Z高IF26.5分[HeterozygositywithrespecttoZfp148causescompletelossoffetalgermcellsduringmouseembryogenesis,NatureGenetics33,172-176(01Feb2003)]CCK-8試劑與MTT等方法靈敏度比較CCK-8試劑盒特價促銷CCK-8試劑盒特價促銷專業(yè)生化試劑生產(chǎn)商|專業(yè)分子試劑供應(yīng)商特價850【021-54100800】產(chǎn)品明細:CCK-8試劑盒利用了同仁化學(xué)研究所(Do極ndo)開發(fā)的四唑鹽WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),它在電子載體1-MethoxyPMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲染料。CCK-8溶液可以直接加入到細胞樣品中;不需要預(yù)配各種成分。CCK-8法是用于測定細胞增殖或細胞毒性試驗中活細胞數(shù)目的一種高靈敏度,無放射性的比色檢測法。CCK-8被細胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的橙色甲染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中,生成的甲量與活細胞數(shù)量成正比。WST-8法檢測細胞增殖、細胞毒性實驗的靈敏度比其它四唑鹽如MTT,XTT,MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相當穩(wěn)定,并且對細胞沒有毒性,因此可以長時間孵育。CCK-8檢測步驟1.向各孔中加入100μl細胞懸液。a)2.在37℃下預(yù)孵育培養(yǎng)板。b)3.向各孔中加入各濃度的待測溶液c)10μl。4.37℃下孵育。5.向各孔中加入10μl的CCK-8溶液d)。6.37℃下孵育1-4小時。e)7.測定450nm處的OD值。a)使用適當?shù)呐囵B(yǎng)基制備50,000-100,000個/ml的細胞懸液。b)建議使用CO2培養(yǎng)箱過夜預(yù)培養(yǎng)。c)使用培養(yǎng)基或PBS來制備溶液。d)如果待測溶液有還原性,測定不含細胞,但含有CCK-8的待測溶液在450nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入CCK-8,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的100μl培養(yǎng)基和10μlCCK-8進行檢測。e)白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。CCK-8試劑盒特價促銷CCK-8試劑盒特價促銷專業(yè)生化試劑生產(chǎn)商專業(yè)分子試劑供應(yīng)商特價【021-54100800】優(yōu)質(zhì)試劑!質(zhì)量放心!價格Zdi!為ZG生物產(chǎn)業(yè)做貢獻歡迎新老客戶咨詢
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CCK-8試劑盒操作常見問題
- CCK-8試劑盒特價促銷產(chǎn)品簡介:CellCountingKit-8(CCK-8試劑盒)是由同仁化學(xué)研究所(Do極ndo)開發(fā)的檢測細胞增殖、細胞毒性的試劑盒,為MTT法的替代方法,試劑盒中采用自己開發(fā)的水溶性四唑鹽-WST-8,在美國,歐洲等國家地區(qū)均持有ZL,同仁化學(xué)研究所于2006年在ZG獲得了WST-8的注冊商標。CCK-8法與普通的MTT法相比,具有顯著特點:★靈敏度高,數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好★操作簡便,省時省力★水溶性,不需要換液,尤其適合于懸浮細胞★無需放射性同位素和有機溶劑,對細胞毒性低★為1瓶溶液,毋需預(yù)制,即開即用★適合于高通量藥物篩選CCK-8用途:藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗CCK-8試劑盒在國內(nèi)知名科研院所、ZD大學(xué)、三甲醫(yī)院被廣泛應(yīng)用,國際認可度高,使用CCK-8發(fā)表的中外文獻達600多篇,其中截止08年底SCI影響因子IF>10分的論文有37篇,Z高IF26.5分[HeterozygositywithrespecttoZfp148causescompletelossoffetalgermcellsduringmouseembryogenesis,NatureGenetics33,172-176(01Feb2003)]CCK-8試劑與MTT等方法靈敏度比較CCK-8試劑盒特價促銷CCK-8試劑盒特價促銷專業(yè)生化試劑生產(chǎn)商|專業(yè)分子試劑供應(yīng)商特價850【021-54100800】產(chǎn)品明細:CCK-8試劑盒利用了同仁化學(xué)研究所(Do極ndo)開發(fā)的四唑鹽WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),它在電子載體1-MethoxyPMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲染料。CCK-8溶液可以直接加入到細胞樣品中;不需要預(yù)配各種成分。CCK-8法是用于測定細胞增殖或細胞毒性試驗中活細胞數(shù)目的一種高靈敏度,無放射性的比色檢測法。CCK-8被細胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的橙色甲染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中,生成的甲量與活細胞數(shù)量成正比。WST-8法檢測細胞增殖、細胞毒性實驗的靈敏度比其它四唑鹽如MTT,XTT,MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相當穩(wěn)定,并且對細胞沒有毒性,因此可以長時間孵育。CCK-8檢測步驟1.向各孔中加入100μl細胞懸液。a)2.在37℃下預(yù)孵育培養(yǎng)板。b)3.向各孔中加入各濃度的待測溶液c)10μl。4.37℃下孵育。5.向各孔中加入10μl的CCK-8溶液d)。6.37℃下孵育1-4小時。e)7.測定450nm處的OD值。a)使用適當?shù)呐囵B(yǎng)基制備50,000-100,000個/ml的細胞懸液。b)建議使用CO2培養(yǎng)箱過夜預(yù)培養(yǎng)。c)使用培養(yǎng)基或PBS來制備溶液。d)如果待測溶液有還原性,測定不含細胞,但含有CCK-8的待測溶液在450nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入CCK-8,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的100μl培養(yǎng)基和10μlCCK-8進行檢測。e)白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。CCK-8試劑盒特價促銷CCK-8試劑盒特價促銷專業(yè)生化試劑生產(chǎn)商專業(yè)分子試劑供應(yīng)商特價【021-54100800】優(yōu)質(zhì)試劑!質(zhì)量放心!價格Zdi!為ZG生物產(chǎn)業(yè)做貢獻歡迎新老客戶咨詢[詳細]
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2018-09-02 10:00
產(chǎn)品樣冊
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CCK-8試劑盒說明書
- CCK-8試劑盒 WST-8 細胞增殖 細胞毒性,是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
WST-8屬于MTT的升級產(chǎn)品,能在電子載體1-甲氧基PMS的作用下被還原成水溶性甲臜產(chǎn)物,生成的甲臜量與活細胞數(shù)量成正比,因此顏色的深淺與細胞的增殖成正比,與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值,可以反映活細胞數(shù)量。
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2024-09-12 18:32
實驗操作
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ELISA操作常見問題及其解決方法
- ELISA操作常見問題ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:①標本因素;②試劑因素;③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。1.樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng),如果血清不稀釋,不可避免會產(chǎn)生很強的非特異性反應(yīng),出現(xiàn)假陽性。因此,國外檢測血清抗體的試劑盒,均規(guī)定將血清稀釋至適當?shù)谋稊?shù),以降低非特異性反應(yīng),使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性。但是,有些用戶未能嚴格按使用說明書操作,如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進行稀釋,個別用戶取5μl甚至1μl樣品進行稀釋,由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠,因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準確,檢測結(jié)果出現(xiàn)問題。2.試劑盒平衡試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20~30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠,樣品孵育時間相對縮短,ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。3.樣品和試劑的混勻稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性。4.加樣在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中,必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以,有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性,下次測定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。5.溫育溫育是ELISA測定中影響測定成敗Z為關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。Z為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。一些操作者,擅自改變說明書操作,使用自己喜歡的溫育時間和溫育溫度,這樣造成一些不必要的麻煩。因為,不同試劑盒有不同的溫育時間和溫育溫度的選擇,隨意更改溫育時間或者溫育溫度將導(dǎo)致試驗結(jié)果出現(xiàn)偏差。6.洗板固相免疫測定技術(shù)是一種非均相免疫測定技術(shù),需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過程中吸附的非特異成份分離開來,以保證ELISA測定的特異性。洗板對于ELISA測定來說,也是極其關(guān)鍵的一步。洗液盡量不要溢出孔外;加洗液后要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干;及時更換吸水紙,尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗結(jié)果。更多ELISA操作常見問題及其解決方法請見附件......[詳細]
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2024-09-30 14:23
產(chǎn)品樣冊
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CCK-8|細胞增殖、細胞毒性試劑盒|參數(shù)說明
- CCK-8|細胞增殖、細胞毒性試劑盒相關(guān)資料產(chǎn)品簡介:CellCountingKit-8(CCK-8試劑盒)是由同仁化學(xué)研究所(Do極ndo)開發(fā)的檢測細胞增殖、細胞毒性的試劑盒,為MTT法的替代方法,試劑盒中采用自己開發(fā)的水溶性四唑鹽-WST-8,在美國,歐洲等國家地區(qū)均持有ZL,同仁化學(xué)研究所于2006年在ZG獲得了WST-8的注冊商標。CCK-8法與普通的MTT法相比,具有顯著特點:★靈敏度高,數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好★操作簡便,省時省力★水溶性,不需要換液,尤其適合于懸浮細胞★無需放射性同位素和有機溶劑,對細胞毒性低★為1瓶溶液,毋需預(yù)制,即開即用★適合于高通量藥物篩選CCK-8用途:藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗CCK-8試劑盒在國內(nèi)知名科研院所、ZD大學(xué)、三甲醫(yī)院被廣泛應(yīng)用,國際認可度高,使用CCK-8發(fā)表的中外文獻達600多篇,其中截止08年底SCI影響因子IF>10分的論文有37篇,Z高IF26.5分[HeterozygositywithrespecttoZfp148causescompletelossoffetalgermcellsduringmouseembryogenesis,NatureGenetics33,172-176(01Feb2003)]CCK-8試劑與MTT等方法靈敏度比較CCK-8試劑盒特價促銷CCK-8試劑盒特價促銷專業(yè)生化試劑生產(chǎn)商|專業(yè)分子試劑供應(yīng)商特價850【021-54100800】產(chǎn)品明細:CCK-8試劑盒利用了同仁化學(xué)研究所(Do極ndo)開發(fā)的四唑鹽WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),它在電子載體1-MethoxyPMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲染料。CCK-8溶液可以直接加入到細胞樣品中;不需要預(yù)配各種成分。CCK-8法是用于測定細胞增殖或細胞毒性試驗中活細胞數(shù)目的一種高靈敏度,無放射性的比色檢測法。CCK-8被細胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的橙色甲染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中,生成的甲量與活細胞數(shù)量成正比。WST-8法檢測細胞增殖、細胞毒性實驗的靈敏度比其它四唑鹽如MTT,XTT,MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相當穩(wěn)定,并且對細胞沒有毒性,因此可以長時間孵育。CCK-8檢測步驟1.向各孔中加入100μl細胞懸液。a)2.在37℃下預(yù)孵育培養(yǎng)板。b)3.向各孔中加入各濃度的待測溶液c)10μl。4.37℃下孵育。5.向各孔中加入10μl的CCK-8溶液d)。6.37℃下孵育1-4小時。e)7.測定450nm處的OD值。a)使用適當?shù)呐囵B(yǎng)基制備50,000-100,000個/ml的細胞懸液。b)建議使用CO2培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)。c)使用培養(yǎng)基或PBS來制備溶液。d)如果待測溶液有還原性,測定不含細胞,但含有CCK-8的待測溶液在450nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入CCK-8,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的100μl培養(yǎng)基和10μlCCK-8進行檢測。e)白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。CCK-8試劑盒特價促銷CCK-8試劑盒特價促銷專業(yè)生化試劑生產(chǎn)商專業(yè)分子試劑供應(yīng)商特價【021-54100800】優(yōu)質(zhì)試劑!質(zhì)量放心!價格Zdi!為ZG生物產(chǎn)業(yè)做貢獻歡迎新老客戶咨詢[詳細]
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2018-09-02 10:00
產(chǎn)品樣冊
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血清操作中的常見問題解析
- 血清操作中的常見問題解析在血清操作中,常常會遇到各種問題,以下就一些常見問題進行解答。1.保存血清什么辦法**?我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃。若你一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。2.怎樣避免出現(xiàn)沉淀物?我們建議您在使用血清的時候,注意正確的血清解凍步驟,并盡量避免滅HX清及長時間的將血清置于高溫環(huán)境中3.如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?我們建議您將血清從冷凍箱中取出后,先置于2-8℃冰箱中使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。4.血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多原因,但Z普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性造成的;而血纖維蛋白在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成血清沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量?!∪裟コ@些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管中,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。5.什么事熱滅活?有必要做熱滅活嗎? 一般以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活性,而補體所參與的反應(yīng)有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。 實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅HX清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)過處理的血清對細胞生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細胞生長速率的降低?!《?jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者認為是微生物的分裂擴增?!∪舴潜仨殻梢圆恍枰鰺釡缁钸@一步,更確保血清的質(zhì)量!我公司售出產(chǎn)品提供售后服務(wù),保證產(chǎn)品質(zhì)量。凡夠買我公司ELISA檢測試劑盒可免費提供代測服務(wù)。[詳細]
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2018-10-03 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人膽囊收縮素8(CCK-8)試劑盒說明書
- 人膽囊收縮素8(CCK-8)試劑盒說明書[詳細]
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2015-04-30 00:00
期刊論文
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大鼠膽囊收縮素(CCK-8)ELISA試劑盒說明書
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com大鼠膽囊收縮素(CCK-8)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗大鼠CCK-8單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的CCK-8與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠CCK-8,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,CCK-8濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中CCK-8濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標板(CoatedWells)96孔酶標抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標準品(Standards):80ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本:血清、血漿(EDTA)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成80ng/ml的溶液。設(shè)標準管8管,每管加入標本稀釋液300ul。在**管中加入80ng/ml的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標準品40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0ng/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CCK-8含量。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CCK-8檢測濃度小于0.3ng/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠CCK-8。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標準曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細]
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2018-09-13 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人膽囊收縮素(CCK-8)ELISA試劑盒說明書
- 人膽囊收縮素(CCK-8)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人CCK-8單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的CCK-8與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人CCK-8,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍色,Z后加終止液,在450nm處測OD值,CCK-8濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中CCK-8濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標板(CoatedWells)96孔酶標抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標準品(Standards):80ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本:血清、血漿(EDTA)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成80ng/ml的溶液。設(shè)標準管8管,每管加入標本稀釋液300ul。在**管中加入80ng/ml的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標準品40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0ng/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CCK-8含量。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CCK-8檢測濃度小于0.3ng/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的人CCK-8。不與人其它細胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標準曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細]
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- 小鼠ELISA試劑盒在實驗中常見問題匯總點擊次數(shù):21發(fā)布時間:2013-8-28檢測用所有試劑全部都為進口試劑,適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本,靈敏度極高。我們專業(yè)的ELISA技術(shù)服務(wù),保證對所售任何產(chǎn)品一概負責(zé)到底,每一份實驗結(jié)果都真實可靠! 小鼠ELISA試劑盒注意事項: 1)在收集標本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定?! ?)我們提倡新鮮標本盡早檢測,對收集后及時進行檢測。1-3天左右檢測的樣本可儲存在4℃?zhèn)溆谩H缬刑厥庠蛐枰芷谛允占瘶吮?,請將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條液體類標本: 大鼠ELISA試劑盒包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等?! ?)血清: 室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心?! ?)血漿: 應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心?! ?)尿液: 用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行?! ?)細胞培養(yǎng)上清: A、檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。 B、檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心?! ?)組織標本: 小鼠ELISA試劑盒切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。[詳細]
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2018-09-19 10:00
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