分子雜交（molecular hybridization）是指使單鏈核酸堿基序列確定的技術(shù)。待測(cè)單鏈核酸與已知序列的單鏈核酸（叫做探針）間通過堿基配對(duì)使可檢出的雙螺旋片段形成為分子雜交的基本原理。下面就讓小編帶你了解一下Southern雜交方法。

探針概念

一段帶有檢測(cè)標(biāo)記已知的核苷酸序列，其和目的基因或者目的DNA特異互補(bǔ)。

制備方法

50-300bp通常為合適的長(zhǎng)度，有時(shí)長(zhǎng)度達(dá)到1.5kb。

1.化學(xué)合成

2.PCR擴(kuò)增

3.DNA重組技術(shù)

分類

按照不同的性質(zhì)和來源，探針包括以下幾類：

1.寡核苷酸探針

2.RNA探針

3.cDNA探針

4.基因組DNA探針

核酸分子雜交方法

根據(jù)待測(cè)核酸是否在固相支持物上固定來分可以分為：

1.液相雜交

（1）核酸酶S1保護(hù)分析法

（2）RNA酶保護(hù)分析法

2.固相雜交

（1）原位雜交

（2）膜上印跡雜交

根據(jù)分子種類來分可以分為：

（1）Western印跡雜交

（2）Northern印跡雜交

（3）Southern印跡雜交

標(biāo)記的種類

1.非同位素

熒光素、地 高 辛配體以及生物素等標(biāo)記物

2.同位素

125I、3H、35S以及32P等標(biāo)記探針

寡核苷酸探針合成的注意事項(xiàng)

1.如果和非靶序列有連續(xù)8個(gè)以上的相同堿基序列或者有超過百分之七十同源性，那么不用為好。

2.防止連續(xù)出現(xiàn)同一堿基

3.探針內(nèi)防止互補(bǔ)

4.G:C對(duì)含量Z好在百分之四十到百分之六十之間。

5.長(zhǎng)度Z好在10到50bp之間。