分子雜交（molecular hybridization）是指使單鏈核酸堿基序列確定的技術(shù)。待測單鏈核酸與已知序列的單鏈核酸（叫做探針）間通過堿基配對使可檢出的雙螺旋片段形成為分子雜交的基本原理。下面就讓小編帶你了解一下Southern雜交方法。

DNA變性

概念

DNA變性是指兩條DNA鏈間的氫鍵在某些理化因素的作用下斷裂成單鏈的過程。

變性方法：

1.化學(xué)試劑變性

例如雙鏈核酸分子鏈間的氫鍵在尿素、甲酰胺、甲醛等化學(xué)試劑的作用下斷裂。

2.酸堿變性：

雙鏈核酸分子鏈間的氫鍵當(dāng)PH值大于10或者小于3時(shí)會(huì)發(fā)生斷裂。

3.熱變性

雙鏈核酸分子鏈間的氫鍵在溫度升高到90-100攝氏度時(shí)會(huì)完全斷裂。

復(fù)性

概念

復(fù)性或者雜交指的是在一定的條件下，根據(jù)堿基互補(bǔ)原則，變性的單鏈核酸分子重新結(jié)合成雙鏈核酸的過程。

如寡核苷酸和RNA、寡核苷酸和DNA、RNA和RNA、RNA和DNA以及DNA和DNA這些具有互補(bǔ)序列的兩條單鏈核酸均能夠互補(bǔ)形成雙鏈。

復(fù)性過程

1.單鏈分子之間發(fā)生碰撞使局部雙鏈形成。

2.如果局部雙鏈周圍的堿基不配對，那么雙鏈即會(huì)重新解離。

3.如果如果局部雙鏈周圍的堿基配對，那么就會(huì)使ZX序列形成。

4.完整的雙鏈分子形成。

分子雜交的一般步驟

1.對DNA或者RNA樣品進(jìn)行制備

2.結(jié)合固定基質(zhì)

3.在80攝氏度下真空固定

4.預(yù)雜交

5.將標(biāo)記探針加入進(jìn)行雜交

6.洗滌

7.放射自顯影或顯色反應(yīng)