蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡試驗(yàn)）就是Western Blot。作為一種實(shí)驗(yàn)方法。它常被用于分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中。生物組織樣品或者凝膠電泳處理過(guò)的細(xì)胞經(jīng)過(guò)特異性抗體著色，通過(guò)對(duì)著色的位置和著色深度的分析來(lái)使特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息獲得。

電泳前準(zhǔn)備工作

1、玻璃板的清洗

使用一只手將玻璃板扣緊，使用另一只手蘸點(diǎn)洗衣粉輕輕擦洗。在擦洗過(guò)兩面之后，使用自來(lái)水沖，再用蒸餾水沖洗干凈后立在筐里晾干。

2、灌膠與上樣

（1）對(duì)齊玻璃板后放入夾中卡緊。然后垂直卡在架子上準(zhǔn)備灌膠。

（2）將10%分離膠配制出來(lái)，將TEMED加入之后，馬上搖勻，就能夠灌膠。灌膠時(shí)，能夠沿玻璃放出用10ml槍吸取的5ml膠。等到膠面一直升到綠帶中間線高度為止，之后將一層水加在膠上，液封后的膠能夠更加迅速地凝固。

（3）當(dāng)膠已經(jīng)凝固的時(shí)候，會(huì)有一條折射線出現(xiàn)在水和膠之間。再等3分鐘，膠凝固充分，可以將膠上層水倒掉，并且使用吸水紙吸干水。

（4）將4%的濃縮膠配制而成，將TEMED加入以后，馬上搖勻就能夠灌膠。將濃縮膠灌入并且使之充滿剩余空間，在濃縮膠中插入梳子。為了防止膠中產(chǎn)生氣泡，灌膠時(shí)要沿玻璃板使膠流下。在將梳子插入時(shí)，要保持梳子水平。之所以會(huì)經(jīng)常在濃縮膠凝固的過(guò)程中兩邊補(bǔ)膠，是因?yàn)槟z凝固時(shí)會(huì)收縮，從而減小了體積，從而減小了加樣孔的上樣體積。等到濃縮膠凝固之后，拔出梳子。

（5）將濃縮膠用水沖洗一下，然后往電泳槽中放入。

（6）蛋白含量檢測(cè)結(jié)束之后，將上樣量也就是含50ng蛋白的溶液體積計(jì)算出來(lái)。在0.5ml離心管中加入取出的上樣樣品，將5×SDS上樣緩沖液加入直到終濃度為1×，為了使蛋白變性，上樣前要在沸水中將樣品煮5min。

（7）將足夠的電泳液加入之后，準(zhǔn)備開(kāi)始上樣。用微量進(jìn)樣器貼壁將樣品吸出。在加樣孔中插入加樣器針頭將樣品緩慢加入。在將下一個(gè)樣品加入的時(shí)候，為了防止交叉污染，需要在外槽電泳緩沖液中對(duì)進(jìn)樣器洗滌3次。