1979年，瑞士米歇爾弗雷德里希生物研究所（Friedrich Miescher Institute）的Harry Towbin提出了蛋白質(zhì)印跡法。1981年，首次在所著的《分析生物化學(xué)》（Analytical Biochemistry）中被叫做Western Blot。蛋白免疫印跡（Western Blot）是從凝膠往固相支持物NC膜或PVDF膜上轉(zhuǎn)移電泳分離后的細(xì)胞或組織總蛋白質(zhì)，然后用特異性抗體來(lái)對(duì)某特定抗原檢測(cè)的一種蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)，現(xiàn)在在疾病早期診斷、抗體活性檢測(cè)以及基因在蛋白水平的表達(dá)研究方面得到了廣泛的應(yīng)用。

含量測(cè)定

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

（1）從－20℃將1mg/ml BSA取出，室溫融化后備用。

（2）將1.5ml離心管取18個(gè)，3個(gè)一組，分別標(biāo)記為0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。

（3）根據(jù)下面的表格將各種試劑加入到各管中。

（4）混勻后，室溫放置2分鐘，在生物分光光度計(jì)（Bio－Photometer，Eppentoff）上比色分析。

2、樣品蛋白含量的檢測(cè)

（1）取1.5ml離心管足夠多，將1ml4℃儲(chǔ)存的考馬斯亮藍(lán)溶液分別加入到每個(gè)離心管中，在室溫下放置30分鐘以后，就能夠被用來(lái)對(duì)蛋白進(jìn)行檢測(cè)。

（2）將100ul 0.15mol/L NaCl溶液加入到取出的一管考馬斯亮藍(lán)溶液中，混勻放置2min中，就能夠作為空白樣品，在比色杯中倒入空白樣品，在做好標(biāo)準(zhǔn)曲線的程序下按blank對(duì)空白樣品進(jìn)行檢測(cè)。

（3 ）將空白樣品棄掉，比色杯使用無(wú)水乙醇清洗2次（每次0.5mL），再將其使用無(wú)菌水洗一次。

（4）將95ul 0.15mol/L NaCl加入到取出的一管考馬斯亮藍(lán)溶液中，混勻后靜置2min，往扣干的比色杯中倒入按sample鍵對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。