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膜片鉗

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膜片鉗技術(shù)的操作步驟和研究對(duì)象

更新時(shí)間:2025-10-23 00:26:40 類型:膜片鉗的應(yīng)用 閱讀量:3208
導(dǎo)讀:膜片鉗技術(shù)是通過(guò)微玻管電極接觸細(xì)胞膜,用千兆歐姆以上的阻抗使之封接,在電學(xué)上分隔和電極尖開口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域以及其周圍,在此基礎(chǔ)上固定點(diǎn)位,對(duì)這膜片上的離子通道的離子電流進(jìn)行監(jiān)測(cè)記錄的方法。

1976年德國(guó)馬普生物物理研究所Neher和Sakmann創(chuàng)建了膜片鉗技術(shù)(patch clamp recording technique)。這是一種根據(jù)記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜單一的或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。生命科學(xué)研究因?yàn)樗突蚩寺〖夹g(shù),獲得了巨大的前進(jìn)動(dòng)力。


研究對(duì)象

膜片鉗技術(shù)不僅適用于對(duì)離子通道(配體門控性、電壓門控性、第二信使介導(dǎo)的離子通道、機(jī)械敏感性離子通道以及縫隙連接通道等等)的研究,而且還適用于對(duì)可興奮細(xì)胞的胞吞、胞吐機(jī)制、離子泵和交換體的研究等。

04.jpg

操作步驟

(1)膜片微電極的制作

拉制

使用拉管儀拉管儀將玻璃毛細(xì)管拉制成為膜片微電極。

涂硅酮樹酯

在微電極的Z以外的部分涂上硅酮樹酯,之后其通過(guò)加熱鎳鉻電阻線圈以便烘干凝固。

熱刨光

為了提高巨阻抗封接的成功率,在顯微鏡下將微電極靠近熱源進(jìn)行熱刨光處理

充灌微電極液

需要通過(guò)空濾膜過(guò)濾用于灌充微電極的液體,從而除去巨阻抗封接形成的灰塵。

(2)巨歐姆阻抗封接

(3)單一離子通道記錄

(4)全細(xì)胞記錄

(5)制真菌素穿孔膜片鉗法

(6)膜片電容測(cè)定法

(7)參數(shù)補(bǔ)償


標(biāo)本種類

有各種各樣的標(biāo)本可以提供使用,從Z早的內(nèi)分泌細(xì)胞、肌細(xì)胞(心肌、平滑肌、骨骼?。┖蜕窠?jīng)元發(fā)展到胃壁細(xì)胞、上皮細(xì)胞、血細(xì)胞、肝細(xì)胞免疫細(xì)胞、精母細(xì)胞、耳窩毛細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞;

從培養(yǎng)細(xì)胞(包括細(xì)胞株)以及急性分散細(xì)胞發(fā)展到組織片(如腦片、脊髓片)乃至整體動(dòng)物;從青蛙、蠑螈、爪蟾卵母、蝸牛細(xì)胞發(fā)展到雞細(xì)胞、人細(xì)胞、大鼠細(xì)胞等等;從動(dòng)物細(xì)胞發(fā)展到真菌、植物以及細(xì)胞細(xì)菌。除此以外膜片鉗技術(shù)在平面雙分子層(Planar bilayer)、脂質(zhì)體(Liposome)等人工標(biāo)本上也得到了廣泛的應(yīng)用。


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