不同的物質(zhì)在一定的電場強度下,因為所帶電荷不同,所以受到的引力不同,往相反的電極泳動的速度不同從而達(dá)到分離的目的。利用帶電粒子在電場中移動速度不同而達(dá)到分離目的的技術(shù),稱為電泳技術(shù)。
主要結(jié)構(gòu):
緩沖液的主槽、凝膠托盤、試樣格(梳子)、擋板和電泳導(dǎo)線共同組成水平電泳槽。
使用方法:
1.首先在平臺上放置凝膠托盤,在槽中插入擋板。冷卻融化的瓊脂糖溶液到55攝氏度,使用少量的瓊脂糖凝膠封邊玻璃板,放樣品梳。然后連續(xù)地往模子里倒入融化的瓊脂糖溶液(厚度取決于樣品的濃度,需要防止混入氣泡),在室溫條件下凝固。

2.等到凝膠聚合后,將梳子輕輕地拔掉,先拔一邊,垂直拔出會導(dǎo)致膠孔產(chǎn)生真空,帶出部分凝膠。往電泳槽內(nèi)移入凝膠托盤,將緩沖液倒入,凝膠必須全部被浸沒。
3.往梳井里加樣,防止氣泡進入,不能將槍頭插入太深,避免使得膠塊穿透。
4.將上蓋蓋好,將電泳槽和電源之間的電泳導(dǎo)線連接。
5.留意正負(fù)極不要接錯,檢查完畢后將電泳儀電源打開。電壓和電流的大小通過凝膠板的厚薄來選擇。
6.當(dāng)溴酚藍(lán)指示劑前沿達(dá)到膠底部的3/4時將電泳停止。在完成電泳實驗后,需先將電泳儀電源關(guān)閉,然后將電泳導(dǎo)線拔出,再將電泳槽上蓋打開,將凝膠托盤取出。
7.往染色區(qū)的通風(fēng)櫥子中移入凝膠使用EB染色液進行10-20min的染色,然后使用沖洗盤將膠片上多余的EB染色液沖洗掉,再使用海綿進行兩次徹底的吸水,直到?jīng)]有水痕留在膠片上,使用保鮮膜將膠片包裹好,放入凝膠成像儀中進行凝膠成像。
注意事項:
1.不允許將EB染色液加入電泳槽中,必須在電泳結(jié)束后且在染色區(qū)內(nèi)進行染色。
2.正負(fù)級分不清楚,造成樣品跑入緩沖液。黑色為負(fù)極,紅色為正極,樣品由負(fù)極往正極跑,需在靠近負(fù)極一端加樣。
3.加樣的時候,不能將槍頭插得太深,避免膠塊被穿透。
4.必須按照marker要求的濃度對膠的濃度進行制備,不然,小分子物質(zhì)會從膠塊中跑出。
5.若沒有經(jīng)驗,Z好定時,不然樣品可能因為疏忽從膠塊中跑出。
6.樣品必須在上樣緩沖液中完全溶解,不然在凝膠中不能移動。采用同種緩沖液制膠和電泳,點樣必須在緩沖液加到凝膠之上以后。
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