分子雜交（molecular hybridization）是指使單鏈核酸堿基序列確定的技術(shù)。待測(cè)單鏈核酸與已知序列的單鏈核酸（叫做探針）間通過堿基配對(duì)使可檢出的雙螺旋片段形成為分子雜交的基本原理。下面就讓小編帶你了解一下Southern雜交方法。

通過限制性內(nèi)切酶切割后的DNA片段中是否有與探針同源的序列存在可以使用Southern雜交來檢測(cè)。

檢測(cè)步驟：

1.對(duì)DNA進(jìn)行酶切，凝膠電泳使各個(gè)酶切的片段分離，再原位變性DNA。

2.在硝酸纖維素濾膜或尼龍膜等固體支持物上接收轉(zhuǎn)移的DNA片段。

3.對(duì)濾膜進(jìn)行預(yù)雜交，將濾膜上非特異性位點(diǎn)掩蓋。

4.雜交探針與同源DNA片段，之后將非特異性結(jié)合的探針通過漂洗去除。

5.根據(jù)顯影來對(duì)目的DNA所在的位置進(jìn)行檢測(cè)。

DNA的轉(zhuǎn)移方法：

1.真空轉(zhuǎn)移

進(jìn)行真空轉(zhuǎn)移的商品化儀器有很多，它們通常是在真空室上面的多孔屏上放置硝酸纖維素膜或尼龍膜，再在濾膜上放置凝膠，從上面的一個(gè)貯液槽中流下緩沖液，將凝膠中的DNA洗脫出來，使其在濾膜上沉積。

優(yōu)點(diǎn)：

迅速為這種方法的優(yōu)點(diǎn)，從正常厚度(4-5mm)和正常瓊脂糖濃度(<1%)的凝膠中定量地轉(zhuǎn)移出來的時(shí)間能夠只在半小時(shí)之內(nèi)。和Southern轉(zhuǎn)移相比，其轉(zhuǎn)移后得到的雜交信號(hào)要2-3倍于Southern轉(zhuǎn)移的信號(hào)。

缺點(diǎn)：

若操作不夠仔細(xì)，會(huì)造成凝膠碎裂，并且不嚴(yán)格洗膜，其背景要高于毛細(xì)轉(zhuǎn)移。

2.電泳轉(zhuǎn)移

變性DNA之后，可以在帶電荷的尼龍膜上接受DNA。

優(yōu)點(diǎn)：

能夠直接對(duì)較大的DNA片段進(jìn)行轉(zhuǎn)移。

缺點(diǎn)：

在轉(zhuǎn)移的過程中會(huì)產(chǎn)生較大的電流，很難對(duì)溫度進(jìn)行控制。一般只有當(dāng)真空轉(zhuǎn)移和毛細(xì)管轉(zhuǎn)移沒有效果的時(shí)候，電泳轉(zhuǎn)移才會(huì)被使用。

3.毛細(xì)管轉(zhuǎn)移

該方法是Southern發(fā)明的，因此，有被叫做Southern轉(zhuǎn)移。

優(yōu)點(diǎn)：

該方法的優(yōu)點(diǎn)就是操作簡(jiǎn)單，。

缺點(diǎn)：

該方法轉(zhuǎn)移需要耗費(fèi)比較長(zhǎng)的時(shí)間，在轉(zhuǎn)移號(hào)，雜交信號(hào)也不強(qiáng)。

影響因素

對(duì)Southern雜交能否檢出雜交信號(hào)產(chǎn)生影響的因素有很多，主要包含以下幾點(diǎn)：

1.探針與目的DNA間的配對(duì)情況

2.轉(zhuǎn)移到濾膜上DNA的量

3.探針的大小和比活性

4.目的DNA在總DNA中所占的比例