分子雜交（molecular hybridization）是指使單鏈核酸堿基序列確定的技術(shù)。待測單鏈核酸與已知序列的單鏈核酸（叫做探針）間通過堿基配對使可檢出的雙螺旋片段形成為分子雜交的基本原理。下面就讓小編帶你了解一下Southern雜交方法。

探針制備方法：

1.切口平移法

探針類型：雙鏈DNA

標記類型：放射性和非放射性探針

原理：從雙鏈切口利用Klenow酶的5’-3’外切酶和DNA聚合酶活性使DNA探針合成。

特點：具有較低的靈敏度，簡便迅速

2.末端標記法

探針類型：DNA和RNA探針

標記類型：放射性探針

原理：在探針的5’端利用T4核苷酸激酶標記[Y-32P]ATP。

特點：具有很高的靈敏度，和內(nèi)標探針相比更加的穩(wěn)定。

3.體外轉(zhuǎn)錄法：

探針類型：單鏈DNA或者RNA探針

標記類型：放射性和非放射性探針

原理：將單鏈或者變性靶核酸作為模板，使用逆轉(zhuǎn)錄酶或者RNA聚合酶使雙鏈探針體外合成，然后再通過沒解處理使單鏈探針得到。

特點：具有很高的靈敏度

4.隨機引物法

探針類型：雙鏈DNA

標記類型：放射性和非放射性探針

原理：將變性的靶DNA作為模板，通過隨機的八堿基引物使DNA探針體外合成。

特點：具有比較低的靈敏度，簡便迅速

5.PCR摻入法

探針類型：雙鏈DNA

標記類型：放射性和非放射性探針

原理：通過PCR使DNA探針合成。

特點：需要將引物合成，具有較高的靈敏度，模板不受限制。

6.末端轉(zhuǎn)移法

探針類型：雙鏈或單鏈DNA

標記類型：放射性和非放射性探針

原理：在雙鏈或者單鏈的DNA探針的3’-OH上利用DNA末端轉(zhuǎn)移酶鏈接核苷酸。

特點：需要TDT酶，簡便迅速。